979436856

2.2. Preparaty mikroskopowe.

Preparaty mikroskopowe można podzielić na bezpośrednie (przyżyciowe), sporządzone w celu obserwacji kształtu, ruchu jak i ilości żywych komórek oraz na preparaty utrwalone, wykorzystywane do dalszego barwienia w celu uwidocznienia poszczególnych organelli komórkowych. Najlepsze wyniki obserwacji komórek daje analiza materiału żywego. Takie obserwacje są podstawą większości ćwiczeń opisanych w niniejszym rozdziale skryptu. W przypadku hodowli kultur jednokomórkowych przenoszone są one na szkiełko podstawowe za pomocą pipety pasterowskiej, ezy bądź igły preparacyjnej. Roślinne hodowle tkankowe należy przygotować do obserwacji przez pocięcie tkanki na cienkie skrawki przy użyciu żyletki lub skalpela. Skrawki przenosi się za pomocą pęset bądź igieł preparacyjnych na szkiełko podstawowe i dodaje kroplę wody. W celu uzyskania jednej warstwy komórek wykonuje się preparaty gniecione. Preparaty takie najczęściej wykonuje się z wierzchołków korzeni i pędów, których mały fragment (około 1 mm) umieszcza się na szkiełku podstawowym w kropli wody lub 50% glicerolu (preparat wówczas wolniej wysycha) i nakrywa szkiełkiem nakrywkowym. Następnie, używając tępego końca igły preparacyjnej, uderza się delikatnie w szkiełko nakrywkowe, aż do otrzymania możliwie największego obszaru z jedną warstwą komórek.

Uwaga:

Materiały takie jak: marchew, ziemniak, cebula, banan, gruszka, pomidor przynoszą na zajęcia Studenci. Można dodatkowo przynieść inne niż wymienione obiekty do badań, z których uda się przygotować ciekawe preparaty mikroskopowe. Pomysły mile widziane.

Ćwiczenie 1

Obserwacja komórek przy różnym powiększeniach

■    Materiał

Komórki ludzkiej białaczki mieloblastycznej HL60, mysiej białaczki LI210, komórki ludzkiego raka jelita grubego HT29.

■    Sprzęt

Mikroskop świetlny, szkiełka podstawowe, nakrywkowe, pipety automatyczne.

■    Wykonanie

Zawiesinę komórek ludzkiej białaczki mieloblastycznej HL60, mysiej białaczki L1210 lub komórek ludzkiego raka jelita grubego HT29 nanieść przy użyciu pipety automatycznej na oczyszczone alkoholem etylowym szkiełko podstawowe i nakryć szkiełkiem nakrywkowym (aby uniknąć pęcherzyków powietrza utrudniających obserwację, należy przykładać szkiełko nakrywkowe pod kątem 45° i powoli opuszczać je na kroplę zawiesiny komórek). Obserwować komórki przy powiększeniu obiektywu 40x, a następnie przy powiększeniu 100x (należy pamiętać o wypełnieniu przestrzeni między obiektywem a szkiełkiem mikroskopowym olejkiem immersyjnym). Porównać komórki z wybranych linii komórek nowotworowych pod względem kształtu oraz wielkości. Wykonać rysunek.