5409430977

związać Obdarzone ładunkiem ujemnym bialkn * z kolumna, można wymyć z kolumny przez jej pr?^'^-

(afgSuig ®

|d'UMd'MMM

iii i il ui n

nvn Ui .•»*>,*.u rr^>» *u,*ć hJirptim mhi*'tk 'MM.ld»'>|u

■    i<»ujl>tK.» np )»uminjr    ‘n-UA’1 »!'/'• i

i|M .Y>ir;*u*;w'««M i *»np«ii tjp .'nrpu^ h \r7vi-

t-ty-vinu>rxAj IU 1 i,-iunrxiv.xim    » jj».o-nI K ■tnjnriM’ tiru*rq* 4«iu’k

n*ię nuuauWjiI j tptauw wUnUil    ***D»>f* 011x11*1

uiMfn* J«i*»t;«4»nj i.TUjtł* i.Har* v    p- A*> RUKuImI ir*t«n **1x04

|l««iiiriuj|. >• 'iJWOJ-Ju ipn *    1    l-mmritpjjjd

niriJMi 3LU|(oam .«p nnumaiunt T»*    V "<•» • njrtWK

Mimx » 3txiQmr inuso :ifhv»oto im

chlorku sodu (jony i\^!a*CT) o wzrastającym gradi_eriCl(j się stężeniu) i odpowiednim pH. Jony Cl" konkuruj ₂ |,J.^! r obdarzonymi ładunkiem dodatnim grupami mahjriaf 7' o malej gęstości ładunku ujemnego wypływają z koi* ,,¹ białka o większej gęstości ładunku ujemnego (rys. 2b>    "

Do rozdziału białek o wypad kowy nr ładunku ujeoin ^ wychł stosuje się kolumny zawierające obdarzone -k< grupy dietyloaminoetylowe (DEAE) (takie jak DEAE._n, -Sephade*). Ten typ chromatografii jonowymiennej av,>, tografią anionowymienną. Koiumny zawierające obdjr!,. ujemnym gnipy karboksymetyłowe (CM) (takie jak q/ CM-Sephadcx) stosuje się do rozdziału białek o wypij, , dodatnim (białek kationowych). Ten typ chromatograf?* chromatografią kationowymienną. Oprócz elucjl yr.uii białko można wymyć z kolumny wymieniającej aniony om buforu, a z kolumny wymieniającej kationy —zwiększ. „

3 więc zmieniając stan jonizacji łańcuchów bocznych aminu temat B2) i, co za tym idzie, wypadkowy ładunek białb

Chromatografia

powinowactwa

■Mi

Chromatografia powinorvactwa wykorzystuje speęyfLv.iii', fi SI cyjne i wykazujące duże powinowactwo wiązanie su' t" I cząsteczką, nazywaną ligandem Najpierw ligand jest tMiiii r cyjnie z obojętny m chemicznie i porowatym nośnikiem (Idr w rosę). Mieszaninę białek przepuszcza się przez kolumnę ‘ «««''• fjj nym (immobilizowanym) ligandem. Określone białko »v.; D dem, natomiast pozostałe przechodzą svvobodnie przez wM‘ " Następnie kolumnę przemywa się intensywnie bufowtn,-^' specyficznie związane białka, a białko wiążące się z z kolumny dwoma sposobami; przez przemycie kolunn ¹ zawierającym ligand w wolnej postad, który' konkuruje i lip¹' Wizowanym o wiązanie z białkiem, lub zmieniając wto.*' (zmiana pH lub stężenia soli). Jeśli do cłuq'i białka z Va.»Iun"' łigand w wolnej postaci, ligand ten musi z.ostaćnaStępnli'u^¹' -S2ejcd niego cząsteczki białka. W tym ceł u często stosuj temat B6). Chromatografia powinowactwa wykorzystuje^''' sto wyjątkowe właściwości białku nmrtżUwia włęi kp'

?. mk**—¹    ‘ *’