6295504347
3 | Zakład Mikrobiologii UJK
Ćwiczenie nr 1
Temat: Transformacja pDsRed2 Cześć teoretyczna
1. Transformacja komórek bakteryjnych.
2. Elektroporacja i inne metody uzyskania bakteryjnych komórek kompetentnych.
Część praktyczna
1. Żwirować 1.5 ml hodowli całonocnej DH5a przy 13.500 rpm przez 3 min.
2. Odrzucić supernatant i wypłukać 4-krotnie komórki w sterylnej wodzie dejonizowanej (1000 pl, 600 pl, 300 pl, 100 pl).
3. Żwirować komórki, odrzucić supernatant i zawiesić komórki w 90 pl 10% glicerolu.
4. Dodać do probówki 6 pl DNA plazmidowego i inkubować w lodzie przez 30 min.
5. Mieszaninę umieścić w kuwecie do elektroporacji i przeprowadzić elektroporcję przy 1800V.
6. Umieścić kuwety w lodzie na 10 min.
7. Dodać 1 ml podłoża TSB i inkubować przez 30 min w 37 ^C.
8. Wysiać bakterie na podłoże z dodatkiem antybiotyku i inkubować przez całą noc w 379C. Notatki
Wyszukiwarka
Podobne podstrony:
7
10
11
12
4
5
6
8
9
4
5
6
7
3
4
5
6
7
8
więcej podobnych podstron