6295504612

INŻYNIERIA ŚRODOWISKA - MŁODYM OKIEM TOM 6.2014

płytki Petriego o określonych wielkościach (zwykle średnica wynosi 9 cm), które wypełnia się pożywką zestaloną agarem w objętościach 15-20 ml. Krążki bibułowe nasącza się olejkiem znając ich dokładną ilość i umieszcza się na odpowiednio przygotowanym podłożu zawierającym szczepy drobnoustrojów. Stężenie olejku w krążku jest największe i w miarę zwiększania się odległości od środka maleje. Zasada metody dyfuzji agarowej polega na przenikaniu substancji z krążka do żelu agarowego i działaniu składników zawartych w olejku na komórki szczepów wysianych na powierzchnię podłoża.

Dyfundująca substancja powoduje powstawanie stref zahamowania wzrostu drobnoustrojów wokół krążka, proporcjonalnych do stopnia wrażliwości szczepów. Drobnoustroje znajdujące się bliżej krążka wykazują większą odporność na działanie substancji, natomiast te, które są bardziej oddalone od krążka, czyli rosnące w miejscach gdzie stężenie olejku jest mniejsze, świadczą o słabszej odporności drobnoustrojów na badany olejek. Wielkość strefy zahamowania wzrostu drobnoustrojów wyraża się w milimetrach, rzadziej w centymetrach, przy czym wartość powinna obejmować średnicę krążka [13,14],

Metoda agarowa dyfuzyjna jest najbardziej rozpowszechnioną metodą w badaniach aktywności przeciwdrobnoustrojowej. Dzięki metodzie dyfuzji agarowej w prosty sposób można ocenić stopień zahamowania wzrostu drobnoustrojów oraz ich zmiany morfologiczne.

Metoda krążkowa wymaga starannego, precyzyjnego i zgodnego z przepisami wykonania badań. Dyfuzyjna metoda krążkowa jest uważana przez wielu autorów za mało dokładną dla olejków eterycznych, gdyż zawarte w nich lotne substancje łatwo mogą ulec odparowaniu podczas usuwania rozpuszczalnika z krążka, podczas inkubacji, a także dlatego, że niektóre składniki zawarte w olejkach są słabo rozpuszczalne w wodzie i mogą słabo dyfundować do podłoża agarowego.

W metodzie dyfuzji agarowej wykorzystującej nasączone krążki, istnieje również metoda studzienkowa. Różnica pomiędzy obiema metodami jest taka, że w miejscu gdzie umieszczany jest krążek, zamiast niego wykonuje się niewielkie otwory w podłożu i aplikuje się określone ilości olejku eterycznego [12,13],

1.6.2. Metoda rozcieńczeń

Metoda seryjnych rozcieńczeń stosowana jest do badania bakterii i grzybów. Hodowle agarowe prowadzone są zazwyczaj na płytkach Petriego, natomiast hodowle płynne w kolbach stożkowych (grzyby) lub probówkach (bakterie). Ułatwieniem określenia aktywności

18