Mikroskopia świetlna
Krzysztof Dołowy
Zdolność rozdzielcza ludzkiego oka:
Z punktu widzenia soczewki
o średnicy z
renicy (6mm) oświetlonej światłem
zielonym (500nm)
1,22 *ð lð 1,22 *ð5×ð10-ð7
að =ð =ð =ð 1,2 ×ð10-ð4radiana
d 6 ×ð10-ð3
Czyli około 25 sekund łuku
Zdolność rozdzielcza ludzkiego oka:
Z punktu widzenia siatkówki
W siatówce na obszarze największej czułości
wzroku czopki mają średnicę 1,5źm i może
rozróżnić dwa obiekty gdy dwa pobudzone czopki
rozdzielone sÄ… jednym niepobudzonym. BiorÄ…c
pod uwagę promień oka 2,3cm
3×ð10-ð6
að ð sinað =ð =ð 1,3×ð10-ð4radiana
0,023
Czyli około 25 sekund łuku
Powiększenie mikroskopu
Interferencja ogranicza zdolność
powiększającą
Kontrast można poprawić wpływając na
amplitudÄ™ bÄ…dz
częstotliwość fali świetlnej
Zasada kontrastu fazowego
Promień światła padając na
preparat przechodzi nie
zmieniony obok obiektu, lub
ulega dyfrakcji na czÄ…stkach
preparatu różniącymi się od
otoczenia współczynnikiem
załamania. W zależności od
grubości preparatu i różnicy
współczynników załamania
obraz dyfrakcyjny ma innÄ…
fazę niż światło nie
odchylone.
Komórki w: a) mikroskopie świetlnym; b) w czarnym
polu; c) w kontraście fazowym; d) w kontraście
Nomarskiego
Efekt pseudo-3D
" Intensywność i kolor różnych
elementów obrazu daje efekt
pseudo-trójwymiarowy
" Efekt ten zależy od grubości
preparatu, wypukłości i
współczynnika załamania
światła różnych obszarów
preparatu ale nie odpowiada
prawdziwej strukturze preparatu
Fluorescencja minerałów
Zasada fluorescencji
Zasada działania
filtru
interferencyjnego
Fluorescence Spectra
Shown below are excitation and emission spectra for 8 different dyes used in FACS immunofluorescence experiments.
Spectra are uncorrected for detector sensitivity and are scaled for presentation purposes.
Obraz wielobarwny
Uzyskujemy kilka obrazów
monochromatycznych, które w
Obraz jest efektem nałożenia 3
wyniku nałożenia dają
niezależnych obrazów rejestrowanych
sumaryczny obraz wielobarwny.
w oddzielnych kanałach dla różnych
fluorochromów
Komórka nerwowa - Żaba szponiasta (Xenopus laevis )
mikrotubule cytoszkieletu (na zielono) jÄ…dro (na fioletowo).