TYPY MUTACJI



mutacje obejmujące zmianę liczby lub struktury chromosomow



mutacje genowe (delecje, duplikacje, insercje)



mutacje punktowe, związane ze zmianą jednego nukleotydu: tranzycje (puryny w

purynę

lub pirymidyny w pirymidynę) i transwersje (puryny w pirymidynę lub pirymidyny w
purynę):



mutacje transkrypcyjne (w obrębie promotora)



mutacje translacyjne

- mutacje zmiany sensu (missens)
- mutacje nonsensowne (nonsens), dające jeden z trzech kodonow stop w mRNA (UAA,
UAG, UGA)
- mutacje ramki odczytu (frameshift), związane z insercją lub delecją pojedynczego
nukleotydu
- mutacje milczące (sillent)



w obszarach regulacyjnych genu (mutacje RNA)

- mutacje miejsc cięcia (splicing)
- mutacje w miejscach donorowych lub akceptorowych genu

Mutacje dynamiczne

(

zwielokrotnienie trojnukleotydowychpowtorzeń):



CGG fra X



CTG dystrofia miotoniczna typu 1



CAG choroba Huntingtona



CCTG dystrofia miotoniczna typu 2



ATTCT ataksja rdzeniowo-możdżkowa typu 10

Antycypacja:

stopniowe obniżanie się wieku występowania objawow chorobowych
oraz wzrost liczby powtorzeń w kolejnych pokoleniach

polimorfizm genowy

jednoczesne występowanie w populacji rożnych form allelicznych danego genotypu

•

zmiana sekwencji nukleotydow z częstością powyżej 1%

•

występuje szczegolnie w niekodującym DNA

•

może dotyczyć pojedynczego nukleotydu lub dłuższej sekwencji

•

większość polimorfizmow nie powoduje zmian fenotypu

Markery genetyczne mogą być wykorzystane do:

określania prawdopodobieństwa asocjacji genow choroby w rodzinie lub u pojedynczych
chorych

•

ustalania pokrewieństwa

•

ustalania genetycznej zgodności krwi, nasienia czy tkanki

•

mapowania genow w określonym regionie chromosomow poprzez analizesprzężeń

•

diagnostyce prenatalnej chorob genetycznych

•

wykrywaniu heterozygotycznych nosicieli chorob genetycznych

•

określaniu ryzyka zachorowań u osob z predyspozycjami do chorob typu:

choroby serca, cukrzyca, nowotwory

•

badaniu zygotyczności bliźniąt (monozygotyczne bliźnięta mają identyczne allele we

wszystkich badanych loci, dwuzygotycznerożnią się między sobą w znaczącej liczbie loci)

•

ustalaniu ojcostwa

•

medycynie sądowej do określania pochodzenia krwi, nasienia lub probek tkanek uzyskanych

na miejscu przestępstwa i porownaniu z materiałem pobranym od podejrzanego

•

identyfikacji osob zaginionych. Porownaniemarkerow genetycznych osoby zaginionej z

markerami rodzicow i innych członkow rodziny umożliwia ustalenie rzeczywistego
biologicznego pokrewieństwa

•

typowania tkankowego do transplantacji organow lub tkanek

STRATEGIA DIAGNOSTYKI MOLEKULARNEJ



Duże zmiany genowe: delecje, duplikacje, insercje

metodaSouthernalub PCR-Multiplex,metoda MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe
Amplification. W duplikacjach najczęściej stosuje się metody ilościowe Q-PCR.
Przykład: dystrofia mięśniowa Duchenne’a



Znane mutacje w miejscu restrykcyjnym

analiza RFLP (analiza polimorfizmu długości fragmentow restrykcyjnych), ktora może
wykazaćodmienny układ fragmentow DNA po cięciu określonym enzymem restrykcyjnym.
Przykład: fenyloketonuria, anemia sierpowata, hemofilia, trombofilia.



Znane mutacje punktowe poza miejscem restrykcyjnym

strategia wykrywania opiera się na metodzie

ASO (allele specificoligonucleotide)

lub

ASA

(Allele specificamplification)

,

czyli wykorzystaniu znajomości mutacji do skonstruowania

odpowiednichsond lub starterow, ktore wykryją zarownoallel prawidłowy, jak i zmutowany.

Przykład: mukowiscydoza



Nieznane mutacje -

techniki przesiewowe



Sekwencjonowanie



Analiza sprzężeń -

kiedy nie znamy genu związanego z występowaniem określonej

chorobygenetycznej

.

RODZAJE DIAGNOSTYKI W ZALEZNOSCI OD ZRODLA
MATERIALU GENETYCZNEGO



Preimplantacyjna

-źrodłem są komorki zarodka lub linii płciowej



Prenatalna

- komorki trofoblastu lub płynu owodniowego
- wolne komorki płodowe w surowicy matki
- MACS (ang. magnetic assisted cell sorting)

- FACS (ang. fluorescence activated cell sorting)

-

wolne płodowe DNA w surowicy matki



Postnatalna

- dowolne komorki jądrzaste

PODEJSCIA METODYCZNE W DIAGNOSTYCE
MOLEKULARNEJ CHOROB DZIEDZICZNYCH



Analiza bezpośrednia

opiera się na wykrywaniu znanych mutacji (głownie delecje, duplikacje i insercje),
jak rownież na podstawieniach pojedynczych nukleotydow lub mutacjach punktowych
Analiza bezpośrednia jest dodatkową podstawą rozpoznania klinicznego.



Analiza pośrednia

śledzenie sposobu dziedziczenia zmutowanych i prawidłowych genow w obrębie
rodzinyna podstawie analizy sprzężeń - zestaw markerow polimorficznych
sprzężonych z locuschoroby i dziedziczących się łącznie z chorobą -

haplotyp

markerowy choroby

.Analiza pośrednia bazuje na rozpoznaniu klinicznym, nie służy

więc do jego weryfikacjiInformacyjny wynik badania umożliwia określenie
nosicielstwa zmutowanego genu i diagnostykę prenatalną choroby.

TYPOWA DLA GENU MUTACJA



Rdzeniowy zanik mięśni (SMA)

delecja eksonu 7 genu SMN1 (5q13)
dziedziczenie autosomalne recesywne



Choroba Huntingtona (HD)

ekspansja kodonu CAG w genie HD (4p16.3)
dziedziczenie autosomalne dominujące



Anemia sierpowata

mutacja punktowa Glu_Val (11p15.5) w genie łańcucha β (HBB) hemoglobiny
dziedziczenie autosomalne recesywne



Zespół Nijmegen

delecja 5 nukleotydow 657-661 (8q21) w genie NBS1

ETAPY RUTYNOWEJ ANALIZY DNA



izolacja DNA



amplifikacja PCR



przesiewowe metody wykrywania mutacji



sekwencjonowanie

DZIEDZICZENIE AUTOSOMALNE RECESYWNE



mukowiscydoza



rdzeniowy zanik mięśni



fenyloketonuria



galaktozemia



homocystynuria



wrodzony przerost kory nadnerczy



zespołSmitha, Lemlego i Opitza



niedobor α1-antytrypsyny (α1-AT)

DZIEDZICZENIE AUTOSOMALNE RECESYWNE

•

zespołAperta

•

zespoł Marfana

•

achondroplazja

•

choroba Huntingtona

•

ataksje rdzeniowo-możdżkowe

DZIEDZICZENIE RECESYWNE SPRZEZONE Z
CHROMOSOMEM X



dystrofia mięśniowa Duchenne’a/Beckera



hemofilia A i B



zespoł Huntera



daltonizm



zespoł niewrażliwości na androgeny

DZIEDZICZENIE DOMINUJACE SPRZEZONE Z
CHROMOSOMEM X

•

zespołRetta

•

krzywica hipofosfatemiczna

•

zespoł kruchego chromosomu X

•

zespoł Blocha-Sulzbergera

MUKOWISCYDOZA CF

•

choroba uwarunkowana autosomalnie recesywnie

•

częstość występowania 1:2500 żywo urodzonych

•

częstość nosicieli zmutowanego genu 1:25

•

zmiany morfologiczne cechują się dużym polimorfizmem występują przede wszystkim w o

obrębie narządowzawierających gruczoły wewnątrzwydzielnicze

•

spowodowana mutacjami w genie CFTR

(ang. Cystic Fibrosis Transmembrane Regulator)

ROZPOZNANIE CF
- podwyższone stężenie sodu (powyżej 60 mmol/l) oraz chloru (powyżej 70 mmol/l0 w pocie)
- brak trypsyny w treści dwunastniczej

-

pomiar przeznabłonkowejrożnicypotencjałow w nosie

ROKOWANIE CF

- niewydolność wewnątrzwydzielnicza trzustki (ok. 85-90%) chorychnawracające infekcje
drog oddechowych - przyczyną przewlekłej choroby płuc
- wypadanie błony śluzowej odbytu oraz niedrożność smołkowa (5-10%)
- marskość wątroby (1-5%)
- męska niepłodność (95-98%)
- średni wiek przeżycia 30 lat
- zrożnicowany stopień ekspresji klinicznej choroby

GEN CTFR

•

lokalizacja - chromosom 7q31-32

•

wielkość - 250kb

•

zbudowany z 27 eksonow

•

koduje białko CFTR (masa cząsteczkowa ok. 170 kDa) - pełni w komorkach rolę kanału

chlorkowego, aktywowanego przez cAMP

•

wykryto ponad 1600 rożnych mutacji

- mutacje punktowe (missens i nonsens) - 57% wszystkich mutacji
- względnie małe delecje lub wstawki w sekwencji genu - 25%
- mutacje składania RNA - 17%.

DYSTROFIA MIESNOWA DUCHENNE’A

•

Częstość 1:3500

•

objawy w 90% przypadkow poniżej 5 roku życia, opoźnienie samodzielnego chodzenia,

postępujące osłabienie mięśni proksymalnych kończyn

•

7-13 lat utrata zdolność chodzenia, rzekomy przerost mięśni łydek

•

wiek nastoletni, niewydolność oddechowa, kardiomiopatia, skolioza

•

podwyższone stężenie kinazy kreatynowej w surowicy krwi

•

brak specyficznego białka w mięśniach - dystrofiny

rokowanie
•

u 25% chorych cechy upośledzenia umysłowego

•

ok. 90% chorych traci zdolność samodzielnego poruszania się przed 20 rokiem życia

DYSTROFIA MIESNIOWA BECKERA

•

Częstość 1:18000

•

(defektywna dystrofina o częściowo, w rożnym stopniu, zachowanej funkcji)

rokowanie

•

chorzy często dopiero po 25 latach od wystąpienia objawow poruszają się na wozkach

•

czas przeżycia może być prawidłowy

GEN DMD

•

lokalizacja - chromosom Xp21

•

wielkość - 2.5 mln par zasad, 79 eksonow

•

koduje glikoproteinę - dystrofinę (DMD)

wykryto następujące mutacje:

•

rożnej wielkości delecje 65% („hot spots”: egzony 44 - 52 i 3 -10)

•

duplikacje 5% -10%

•

mutacje punktowe 30-35%

Mutacje naruszające fazę odczytu prowadzą do DMD, mutacje nie naruszające
fazy odczytu prowadzą do BMD

Diagnostyka prenatalna w rodzinach dotkniętych DMD/BMD

•

ustalenie płci płodu (amplifikacja genu amelogeniny (PCRamel)

•

u płodow płci męskiej poszukiwanie wykrytej wcześniej u chorych członkow rodziny

mutacji

•

lub śledzenie dziedziczenia się zmutowanego allelu.

TERAPIA DMD

•

terapia sterydami we wczesnych etapach może opoźniać postęp choroby

•

nowoczesne metody rehabilitacji, połączone z zabiegami ortopedycznymi, mogą wydłużyć

zdolność do utrzymywania pozycji stojącej.

•

modyfikacja składania mRNA i syntezy dystrofiny. Podejście to zwane „exonskipping”

polega na ingerencji w proces składania mRNA, w taki sposob, aby przywrocić fazę odczytu i
tym samym zamienić ostrą postać choroby DMD w typ łagodniejszy – a więc w BMD

•

zastosowanie preparatu nazwanego ataluren(uprzednio PTC124™), powodującego

pomijanie podczas translacji przez rybosomy powstałego na skutek mutacji, kodonu stop.

ZESPOL RETTA

typowe objawy

•

prawidłowy rozwoj od urodzenia do 6 -18 miesiąca życia

•

utrata sprawności manualnej i zdolności mowienia

•

ataksja (zaburzenia

•

niski wzrost, małe ręce i głowa (wtorna mikrocefalia)

•

stereotypowe ruchy rąk (klaskanie, stukanie, wkładanie do ust, przypominające mycie),

zgrzytanie zębami, napady śmiechu lub płaczu

•

problemy z kontaktami społecznymi, ataki paniki, unikanie kontaktu wzrokowego,

nadwrażliwość na dźwięki, napady gniewu

•

napady padaczkowe w 81%

•

problemy żołądkowo-jelitowe i oddechowe

•

boczne skrzywienie kręgosłupa

•

przykurcze mięśniowe

DIAGNOSTYKA MECP 2

•

gen MECP2 z locus Xq28 (75 tyś. par zasad, 4 eksony)

•

białko MECP2 (methylCpG- binding protein 2) o funkcji represora transkrypcji

innych genow

•

mutacje najczęściej de novo(w ok. 99%) najczęściej na chromosomie ojcowskim,

rodzinne występowanie rzadkie

•

mutacje punktowe genu MECP2 ( u 80% dziewcząt manifestujących postać

klasyczną zespołu i u ok. 40% postaci nietypowych)

•

w ok. 8% przypadkow postaci klasycznej i ok. 3% postaci nietypowej wykrywana

jest duża delecja części lub całości genu.

•

nietypowe mutacje, w innych regionach genu, lub mutacje innych genow,

zwykle nie badane rutynowo, np. CDKL5 (ang.cyclin-dependent kinase-like 5)
w postaciach atypowych)

•

zespołRetta w klasycznej postaci dotyczy wyłącznie kobiet, dla większości

mężczyzn mutacja genu MECP2 jest wadą letalną i prowadzi do śmierci na etapie
rozwoju płodowego

•

w nielicznych przypadkach chłopcy z mutacjami MECP2 mogą dożyć wieku

dorosłego wykazując niepełnosprawność intelektualną, bez okresu względnie
prawidłowego rozwoju wczesno niemowlęcego

•

zespołRetta często jest mylnie rozpoznawany jako autyzm, porażenie mozgowe

czy ogolne zaburzenia rozwoju intelektualnego

•

aktualnie nie istnieje żadna sprawdzona metoda leczenia przyczynowego; dzięki

intensywnej rehabilitacji (opieka logopedy i psychologa dziecięcego, odpowiednia
dieta) 2% - 15% pacjentek może samodzielnie funkcjonować

FRA-X – ZESPOL LAMLIWEGO CHROMOSOMU X

•

po zespole Down’a najczęstsza przyczyna upośledzenia umysłowego

•

obecność tzw. łamliwego chromosomu X - fra(X)(q27.3)

•

częstość występowania u płci męskiej wynosi 1:1250

•

mutacje w genie FMR1- ekspansja niestabilnej sekwencji CGG w końcu 5’

pierwszego eksonu i metylacja pobliskiej wyspy CpG
6 - 52 powtorzeń (średnio 30) - u osob zdrowych
60 - 200 powtorzeń u mężczyzn (nosicieli) z premutacją
powyżej 200 - pełna mutacja

•

częstość premutacji 1:500-1500 u mężczyzn i 1:255-510 u kobiet

•

zjawisko antycypacji



Diagnostyka cytogenetyczna

Wykazanie achromatycznego przewężenia lub złamania chromatyd w regionie q27.3
w specyficznych warunkach hodowli. Nie identyfikuje negatywnych cytogenetycznie
nosicieli zmutowanego genu tj. ok.70% bezobjawowych nosicielek i 100% bezobjawowych
nosicieli premutacji płci męskiej.



Diagnostyka molekularna

•

analiza DNA metodą PCR, jako wstępne badanie przesiewowe na obecność

prawidłowych alleli

•

analiza mutacji metodą hybrydyzacji (np. technika Southern’a); metoda ta pozwala na

precyzyjne określenie defektu molekularnego, identyfikując pełne mutacje i premutacje,
jak rownież ostatecznie weryfikuje wynik nieinformacyjny uzyskany w badaniu
przesiewowym.


PIETNOWANIE GENOMOWE – GENOMIC IMPRINTING

Zróżnicowana ekspresja genów w zależności od ich
rodzicielskiego pochodzenia

•

dotyczy fragmentowchromosomow lub pojedynczych alleli genow zaangażowanych

w proces rożnicowania i rozwoju na poziomie zarodkowym

•

w komorce diploidalnej tylko jeden gen z pary alleli ulega ekspresji, ekspresja drugiego

z pary alleli jest hamowana na skutek metylacji; do metylowango nukleotydu nie mogą
się przyczepić czynniki transkrypcyjne, co powoduje wyciszenie genu

•

dotyczy 01-1% genow

CHOROBY Z NIEPRAWIDLOWEGO IMPRINTINGU

•

zaśniad groniasty nowotwor embrionalny; 2n pochodzi tylko od ojca, materiał genetyczny

od matki jest eliminowany

•

potworniak jajnika - 2n pochodzi tylko od matki, brak zapłodnienia

•

zespół Prader’a- Williego i zespół Angelmana - zaburzenia imprintingu 15(q11q13) - brak

imprintingu ojcowskiego powodujezespołPradera-Williego, a brak imprintingu matczynego
zespołAngelmana

•

zespół Beckwitha-Wiedemanna - mikrodelecja w obrębie chromosomu 11 pochodzenia

ojcowskiego

ZESPOL PRADERA-WILLIEGO



70% delecja regionu 15q11-q13 pochodzenia ojcowskiego

kariotyp: 46,XX lub 46,XY,del(15)(q11-q13)pat



25% matczyna disomia jednorodzicielska chromosomu 15 (UPD)



do 5% zaburzeniaimprintingu ((ID-Imprinting defect

•

okres przedurodzeniowy: obniżenie napięcia mięśniowego, słabe ruchy płodu

•

okres noworodkowy/wczesnoniemowlęcy: słaby odruch ssania, trudności w karmieniu,

opoźnionyrozwoj psychoruchowy

•

1-6 r. życia: nienasycony apetyt / otyłość, dysmorfia twarzy (wąskie czoło, migdałowate

szparypowiekowe, wysokie podniebienie), labilność emocjonalna, opoźnienie rozwoju mowy

•

kilkunastoletni pacjenci:

- niski wzrost, małe dłonie i stopy, otyłość -cukrzyca, nadciśnienie,
- hipogonadyzm zmieniający się z wiekiem
- rożnego stopnia upośledzenie umysłowe, bezpłodność

ZESPOL ANGELMANA

65-75% delecja regionu 15q11-q13 pochodzenia matczynego

kariotyp: 46,XX lub 46,XY,del(15)(q11-q13)mat

3-7% ojcowska disomia chromosomu 15
2-3% zaburzenia imprintingu (ID-Imprinting defect)
5-11% mutacje UBE3A
5-11% delecje w centrum piętnowania(IC-Imprinting center)
5-11% inne mechanizmy

•

trudności w ssaniu, słaby przyrost masy

•

małogłowie i krotkogłowie

•

dysmorfia twarzy (głęboko osadzone gałki oczne, duże usta z wąską wargą gorną, duża

żuchwa, duże zęby)

•

wystający język, jasna karnacja skory, blond włosy , jasnetęczowki

•

upośledzenie umysłowe, zaburzenia mowy

•

padaczka

•

zaburzenie chodu

•

częsty śmiech i ekscytacja

DIAGNOSTYKA PWS/AS

•

wzór metylacji (delecje, UPD & ID)

- testy metylacji (MS-PCR, RFLP-PCR, MLPA)

•

delecje

- FISH (Fluorescence in situ Hybridization
- CMA (Chromosomalmicroarrays)
- southern hybrydyzacja

•

disomia jednorodzicielska

- analiza mikrosatelitarna

•

mutacje

- sekwencjonowanie

46 XY DYSGENEZJA GONAD

•

żeński fenotyp

•

niedorozwoj zewnętrznych narządow płciowych

•

obustronnie szczątkowe gonady

•

prawidłowy lub wysoki wzrost

•

pierwotny brak miesiączki

•

niepłodność wynikająca z niedorozwoju gonad.

•

czasami: powiększenie łechtaczki, hirsutyzm

•

geny zaangażowane w proces rożnicowania płci:

SRY, RSPO1, SOX9, NR5A1, WT1, NR0B1 and WNT4

•

gen SRY (Yp11.3) indukuje rożnicowanie gonady pierwotnej w kierunku jądra

•

w przypadku mutacji lub nieobecności genu SRY dochodzi do rozwoju zarodka

w kierunku żeńskim

DIAGNOSTYKA

•

badanie kariotypu - metody cytogenetyczne

•

potwierdzenie obecności genu SRY (PCR, elektroforeza, FISH)

•

poszukiwanie mutacji w SRY, SOX9, NR5A1(SF1), WT1, DHH

•

poszukiwanie duplikacji: NROB1 (DAX1) i WNT4

qRTPCR (guantitative Real Time PCR)
MLPA (Multiple Ligation dependent Probe Amplification)
aGH (arrayGenomeHybridization)

ZESPOL NIEWRAZLIWOSCI NA ANDROGENY

•

choroba recesywna sprzężona z X

•

częstość 1 / 65000

•

kariotyp 46,XY i niepłodność

•

płeć gonadalna męska ale żeńskie narządy płciowe

•

występuje w trzech postaciach

-CAIS Complete AIS

komorki są całkowicie niewrażliwe na androgeny (fenotyp żeński)

-PAIS Partial AIS

komorki są częściowo niewrażliwe (fenotyp niecałkowicie męski)

-MAIS Milde AIS

łagodna postać (prawidłowo zbudowani niepłodni mężczyźni)

•

mutacje w genie AR receptora androgenowego

CAIS

•

żeński fenotyp, dobrze rozwinięte piersi

•

budowa ciała typu kobiecego

•

skąpe owłosienie pachowe i łonowe

•

krotka ślepo zakończona pochwa

•

brak macicy i jajowodow

•

jądra umiejscowione w wargach sromowych większych, kanałach pachwinowych lub jamie

brzusznej

•

pierwotny brak miesiączki

Często pierwszym objawem zespołu może być obecność przepuklin
pachwinowych, sromowych lub kroczowych

METODY DIAGNOSTYKI PRENATALNEJ

Diagnostyka inwazyjna:
- biopsja kosmowki (CVS) – 11-14 hbd
- amniopunkcja (AC) – (15)16-18(20) hbd
- kordocenteza (przy niepowodzeniu w/w lub w poźniejszym etapie ciąży)
- biopsja tkanek płodu (obecnie rzadko, zastąpiona przez badania molekularne)
Diagnostyka nieinwazyjna:
- badania ultrasonograficzne (I lub II trymestr)
- badania biochemiczne markerow w surowicy matki
- analiza komorekplodowych w krwiobiegu matki

ALFA FETO PROTEINA



wzrost stęzenia AFP w płynie owodniowym w przypadku otwartych wad OUN płodu



wzrost stęzeniaAFP w surowicy krwi kobiety cięzarnej w przypadku otwartych wad

OUN płodu



niski poziom AFP w surowicy krwi matki w przypadkach trisomii płodu

hCG- GONADOTROPINA KOSMOWKOWA



wzrost stęzeniahCG i obu jej wolnych podjednostek α i β w surowicy krwi

matki w przypadku ciąz z zespołem Downa (Bogart i wsp;1987)



test podwojny - jednoczasowe oznaczanie stęzenia AFP i hCG

(DR 55% przy FPR 5%)

TEST POTROJNY

_

AFP, hCG i uE3 + wiek matki

_

15-20 hbd

_

wiek ciązy według badania USG

(BPD-wymiar dwuciemieniowy, FL-długość kości udowej)

_

około 70% przypadkow ZD u płodu, przy około 5% wynikowfałszywie pozytywnych

_

czułość oraz odsetek wynikowfałszywie pozytywnych rosną wraz z wiekiem cięzarnej

_

kwalifikacja cięzarnej do grupy wysokiego lub niskiego ryzyka

TEST PAPPA

11,0 – 13,6 hbd
Uwzględnia:

_

wiek matki

_

PAPP-A,

_

wolne β-hCG (fβ-hCG),

_

przezierność karkowa NT (NuchalTranslucency)

Czułość dla ZD około 85% przy FPR 5%.
Czułość dla ZE wynosi około 90% przy FPR 2%.
Czułość oraz odsetek wynikow fałszywie pozytywnych rosną
wraz z wiekiem cięzarnej.

Badanie materiału z poronienia samoistnego

_

badanie kariotypu

_

QF-PCR badanie aneuploidii chromosomowych

_

test aneuploidii MLPA

_

test subtelomerowy MLPA

_

test mikrodelecyjny MLPA

_

detekcja mutacji (PCR, sekwencjonowanie)