Sprawozdanie z ćwiczenia nr 4

Temat: Dezintegracja ultradźwiękowa

Cel ćwiczenia.

Celem ćwiczenia było zbadanie i opisanie wpływu ultradźwięków na drożdże Saccharomyces cerevisiae oraz wykonanie wykresu zmian ilości białka w zależności od czasu dezintegracji ultradźwiękami w łaźni wodnej.

Przebieg ćwiczenia.

Do kolby odmierzono 10 ml drożdży. Następnie kolbę umieszczono w łaźni wodnej i poddano działaniu ultradźwięków. Wykonano 5 cykli po 1 min. Po każdym z cykli pobierano pipetą 1 cm³ dezintegrowanej zawiesiny i przenoszono do probówek. Do 6 probówki pobrano 1 cm³ drożdży, które nie zostały poddane dezintegracji. Probówka nr 7 była próbą kontrolną – z 1 cm³ wody destylowanej. Następnie do każdej z próbówek dodano po 1 cm³ NaOH i wstawiono na 10 min do wrzącej łaźni wodnej. Następnie próby odwirowano w probówkach wirnikowych. Następnie pobrano z każdej probówki po 1 cm³ supernatantu i przeniesiono do probówek szklanych. Do każdej dodano po 2,5 cm³ roztworu D i pozostawiono na 30 min. Następnie do każdej probówki dodano po 0,5 cm³ odczynnika Folina – Ciocalteu’a i odstawiono na 30 min. Następnie dokonano pomiaru absorbancji wobec próby kontrolnej. Podczas dawkowania NaOH do probówek nr 2 i nr 5 wzięto przez przypadek pipetę zanieczyszczoną fenoloftaleiną, co mogło mieć wpływ na wynik ćwiczenia.

Wyniki.

Wyniki pomiaru absorbancji przedstawiono w tabeli poniżej.

Czas t [min]	Numer probówki	Abs	Ilość białka [μg/cm^3]
1	1	0,410	256,25
2	2	0,345	215,63
3	3	0,455	284,38
4	4	0,299	186,88
5	5	0,374	233,75
0	6	0,351	219,38

Na podstawie otrzymanych wyników sporządzono wykres zmian ilości białka w zależności od czasu dezintegracji drożdży. Ilość białka obliczono ze wzoru:

y = 0,0016x, gdzie y – Abs, x – ilość białka

Na podstawie obserwacji wyników stwierdzono zmiany ilości białka w zależności od czasu dezintegracji ultradźwiękami.

Wnioski.

W procesie dezintegracji ultradźwiękami ściana komórkowa drożdży ulega uszkodzeniu. Głównym składnikiem budowy ściany komórkowej u drożdży są białka. Po uszkodzeniu ściany komórkowej w procesie dezintegracji wydziela się duża ilość białka, w zależności od czasu trwania procesu. Otrzymany wykres nie odpowiada zatem sytuacji, jaka powinna nastąpić pod wpływem działania ultradźwiękami na drożdże. Poziom białka powinien stopniowo się zwiększać, tylko w ostatniej probówce nr 6, poziom ten powinien być najniższy (ponieważ nie poddawano jej dezintegracji). Po analizie otrzymanych wyników można stwierdzić, że dodanie zanieczyszczoną fenoloftaleiną NaOH do probówek nr 2 i nr 5 nie miało większego znaczenia dla końcowych wyników. Dezintegrację ultradźwiękową stosuje się w celu wyizolowania białka z organizmu, bez zaburzania struktury białka i jego właściwości enzymatycznych.