Nr ćwiczenia 6
Data wykonania ćwiczenia	Wpływ temperatury na natężenie oddychania. Aktywacja enzymów w czasie kiełkowania nasion. Fitochrom. Ruchy roślin	Zaliczenie
Data oddania sprawozdania

I. Wpływ temperatury na natężenie oddychania.

Zasada metody:

W wykorzystanej w ćwiczeniu metodzie komorowej natężenie oddychania oznacza się przez pomiar ilości CO₂ wytworzonego przez roślinę w jednostce czasu. CO₂ znajdujący się w komorze jest wiązany przez wodorotlenek baru:

Ba(OH) ₂ + CO₂ → BaCO₃+ H₂O

Nadmiar Ba(OH) ₂ , który nie przereagował z CO₂ oznacza się alkacymetrycznie poprzez miareczkowanie kwasem solnym w obecności fenoloftaleiny jako wskaźnika :

Ba(OH)₂ + 2HCl → BaCl₂ + 2H₂O

Wykonanie ćwiczenia:

Odważono cztery porcje kiełkujących nasion zboża po 5 g każda i umieszczono w woreczku z gazy. Do pięciu erlenmajerek nalano po 25 ml 10 mM Ba(OH)₂ z dodatkiem kilku kropel fenoloftaleiny i natychmiast zatkano kolbki korkami z haczykiem. Po około 10 min oddzielnej adaptacji nasion oraz kolb z roztworem Ba(OH)₂ do danej temperatury umieszczono woreczki z nasionami w środku kolbek, zawieszając je na haczykach. Jedną kolbkę wstawiono do termostatu o temp. 37^oC, drugą pozostawiono w temperaturze pokojowej (20^oC), trzecią w temp. 2^oC, a czwartą w temp. 60^oC. Kolbkę kontrolną bez nasion pozostawiono w temp pokojowej.

Po godzinie miareczkowano dwa razy po 10 ml wody barytowej z każdej kolbki roztworem 20 mM HCl. Ilość ml 20mM HCl zużytego na miareczkowanie jest równa ilości ml nie obojętnego 10 mM Ba(OH)₂.

a – 25 ml 10 mM Ba(OH)₂

Warunki	I	II	Średnia	b - Średnia w przeliczeniu na 25 ml (średnia·2,5)	Ilość ml utworzonego BaCO3 (a – b) ^1
Kontrola	8,80	8,65	8,73	21,83	3,17
2^oC	6,80	6,00	6,40	16,00	9,00
25^oC	5,60	5,65	5,63	14,08	10,92
37^oC	3,00	2,90	2,95	7,37	17,63
60^oC	4,60	4,45	4,53	11,33	13,67

Dla kontroli: ilość utworzonego BaCO₃ w wyniku wiązania CO₂ z powietrza zawartego w kolbie.

Dla temperatury 2, 20, 37 i 60^oC: ilość utworzonego BaCO₃ w wyniku związania CO₂ powstałego w czasie oddychania nasion i CO₂ zawartego w kolbie.

Ilość utworzonego BaCO₃ po uwzględnieniu poprawki na zawartość CO₂ w powietrzu znajdującym się w kolbie.

2 ^oC 9,00 - 3,17= 5,83 ml

25 ^oC 10,92 - 3,17= 7,75 ml

37 ^oC 17,63 - 3,17= 14,46 ml

60 ^oC 13,67 - 3,17= 10,50 ml

Ilość gramów CO₂ związanego w danej ilości BaCO₃

BaCO₃ — CO₂

197 g — 44 g

2 ^oC 5,83 · 0,00197g — x=0,00256 g

25 ^oC 7,75 · 0,00197g — y= 0,00341 g

37 ^oC 14,46 · 0,00197g — z= 0,00636 g

60 ^oC 10,50 · 0,00197g — v= 0,00462 g

Natężenie oddychania (ilość [mg] CO₂ wydzielonego w danej temperaturze przez 1g nasion w czasie 1 godziny)

2 ^oC (0,00256 g · 1000)/5 = 0,512 mg·g^-1·h^-1

25 ^oC (0,00341 g · 1000)/5 = 0,682 mg·g^-1·h^-1

37 ^oC (0,00636 g · 1000)/5 = 1,272 mg·g^-1·h^-1

60 ^oC (0,00462 g · 1000)/5 = 0,924 mg·g^-1·h^-1

II. Rola kwasu giberelinowego (GA₃) w aktywacji enzymów amylolitycznych podczas kiełkowania nasion.

Zasada metody:

Celem ćwiczenia było wykazanie różnic w aktywności enzymów rozkładających skrobię w nasionach będących w stanie spoczynku oraz w nasionach kiełkujących. Stopień rozkładu skrobi określano na podstawie wielkości barwnego kompleksu skrobi z jodem.

Wykonanie ćwiczenia:

Do dwóch szalek Petriego nalano agaru skrobiowego tak, aby grubość warstwy wynosiła 2-3 mm. (Przepis: rozpuszczono 2 g agaru w 90 ml wody destylowanej i zagotowano. Następnie dodano 10 ml kleiku skrobiowego uzyskanego przez rozpuszczenie 1 g skrobi rozpuszczalnej w wodzie i zagotowanie). Po ostudzeniu agaru umieszczono na jednej szalce kilkanaście połówek nasion suchych a na drugiej połówki nasion kiełkujących. Nasiona ułożono powierzchnią przecięcia do agaru. Po 1,5 godz. Usunięto nasiona z szalek a agar zalano płynem Lugola.