CHROMATOGRAFIA (wielokrotna sorpcja na nośniku)

Rozdział składników w wyniku różnego ich podziału między fazę ruchomą C_R i nieruchomą układu chromatograficznego Cs.

Faza nieruchoma ciało stałe lub ciecz

Faza ruchoma gaz, ciecz, fluid nadkrytyczny

Równowaga dynamiczna – wielokrotne przechodzenie tych cząsteczek z jednej fazy do drugiej.

Przenoszenie wzdłuż układu chromatograficznego, gdy znajdują się w fazie ruchomej.

Gdy K_A > K_B

Pole pod pikiem jest wprost proporcjonalne stężeniu

B – wychodzi szybciej, ma mniejsze powinowactwo do nośnika

CHROMATOGRAFIA JONOWYMIENNA

• Rozdział składników na zasadzie różnic w ładunku

• Nośniki:

  • aktywowane policukry: celuloza, agarowa np. z Sepharoza

  • Z grupami ujemnymi, np. karboksymetylowy (CM)

  • Z grupami dodatnimi, np. dietylohydroaminoetylową (DEAE)

Kolumna z wypełnieniem ujemnym

Wymywanie buforami o wysokim stężeniu soli (siła jonowa)

Związki z wypełnieniem ujemnym wypływają pierwsze

CHROMATOGRAFIA POWINOWACTWA

• Specyficzne oddziaływanie

  • substraty

  • inhibitory dla enzymu

  • koenzymy

  • jony

• Elucja – duże stężenie ligandu w roztworze

  • zmiana pH

  • zmiana siły jonowej

CHROMATOGRAFIA ŻELOWA

• nie oparta o proces sorpcji

• filtracja żelowa, sączenie molekularne

• na kolumnie spolimeryzowany cukier o wysokim stopniu uwodnienia

Siła grawitacji

• separuje po wielkości

• duże cząstki nie wnikają w żel i wypływają jako pierwsze.