CCF20150918002 (4)

barwnika do wnętrza komórki i utworzeniu barwnego kompleksu z cytoplazmą. Do barwienia stosuje się zasadowe barwniki (błękit metylenowy, zieleń

malachitowa, fuksyna zasadowa, czerwień obojętna, fiolet krystaliczny, goryczkowy i metylowy), wykorzystując ich powinowactwo do kwaśnej cytoplazmy komórkowej. Rzadziej używane są barwniki kwaśne (fuksyna kwaśna, eozyna, erytrozyna, barwnik Kongo i nigrozyna) lub obojętne mieszaniny barwników kwaśnych i zasadowych (np. barwnik Giemsy).

W zależności od sposobu barwienia wyróżniamy barwienia przyżyciowe i barwienie preparatów utrwalonych.    -

1 . Przygotowanie preparatów przyżyciowych

Preparaty przyżyciowe siużą do obserwacji ruchliwości, żywotności, sposobu rozmnażania, a czasami do wykrywania substancji zapasowych.

2. Wykonanie preparatów utrwalonych Preparaty utrwalone możemy podzieli ć na:

•Trwałe - mogą być używane wielokrotnie przez długi czas,

•Półtrwałe - jednorazowego użytku.

2.1.    Preparaty półtrwałe

Preparaty półtrwałe uzyskuje się po utrwaleniu i wybarwieniu na szkiełku podstawowym. Nie zatapia się ich w balsamie.

Utrwalanie preparatów

Utrwalenie przerywa zachodzące w komórkach procesy fizjologiczne i pozwala

zachować strukturę komórek, zapobiegając zmianom pośmiertnym. Ma na celu:

zabicie komórek , przyklejenie się komórek do powierzchni szkiełka - nie spłukuje ich barwnik ani

woda:

Utrwalanie możemy wykonywać metodą:

termiczną- wyschnięty preparat przeprowadzamy 3-krotnie w pozycji poziomej

(rozmazem do góry) przez płomień palnika

chemiczną-do Padania struktur komórkowych, przy użyciu SC—70% alkoholu, 10%

*:    =--y. ołynu _a cya

Preparaty utrwalone barwi się , cc pczwaia na określenie kształtu, a także obserwację układów komórek i struktur komórkowych.

Barwienia preparatów utrwalonych sposoby barwienia:

barwienie proste - gdzie używamy jednego roztworu barwnika, barwnik ziewa się , spłukuje wodą , alkoholem lub acetonem i osusza bibułą ; stosowane w celu ustalenia kształtu i układu komórek, np. barwienie fioletem krystalicznym lub błękitem metylenowym

barwienie złożone - z użyciem co najmniej 2 roztworów barwników, barwienie albo w ściśle określonej kolejności albo ich mieszaniną .W zależności od stosowanych barwników, można wyróżnić 3 sposoby barwienia:

barwienie pozytywowe - polegające na zabarwieniu komórek, podczas gdy tło zostaje bezbarwne; może by ć proste lub złożone,

barwienie negatywowe - uzyskanie kontrastu między ciemnym tłem a nie zabarwionymi komórkami;

barwienie pozytywowo-negatywowe - połączenie powyższych metod, najpierw wykonuje się barwienie negatywowe, a po wyschnięciu dobarwia się barwnikiem pozytywowym.

2.2.    Preparaty trwałe

Przygotowanie preparatów trwałych obejmuje kilka etapów, z których najistotniejsze to: utrwalenie, barwienie i zatopienie preparatu.

Utrwalenie materiału na szkiełku podstawowym można dokonać za pomocą

czynników fizycznych (ogrzewanie szkiełka z rozmazem w

płomieniu palnika) lub chemicznych (etanol, metanol, formalina, kwas pikrynowy,

dwuchromian potasu). Po wyschnięciu preparat barwi się, a następnie pokrywa balsamem

kanadyjskim. Po przykryciu szkiełkiem nakrywkowym, lekko ogrzewa do rozpuszczenia

balsamu, dociska szkiełko i usuwa nadmiar balsamu. Tak przygotowany preparat może być

orzechowywany przez długi czas.    _