099

Przyłączenie linkerńw

•końce dwuniciowego cDNA są wyrównywane na “tępo'¹ DNA polimcrazą/yw •do tępych końców rJ)NA przyłączane są linkery EcoR\

3 ’-CCCGTGCTCCp-5 ’ 5’- Ol IA ATT CGGC ACG A GG-3 ’

•koniec 5* krótszej nici liukera. ma przyłączoną grupę fosforanową co umożliwia ligację z innymi tępymi końcami

•koniec 5* dłuższej nici liukera jest pozbawiony grupy fosforanowej co uniemożliwia ligację z innymi lepkimi końcami •po zakończeniu ligacji i dezaktywacji ligazy koniec 5^T dłuższej nici liukera jest fosfotylowany •ostatnim etapem jest odcięcie enzymem Xhol pierwszego primera i rozdzielenie obu fragmentów na scpharosic CL-2B. cDNA następnie wytrąca się i liguje / wektorem