20111206124

50 mM bufor fosforanowy (pH 7,2) z dodatkiem 3 mM EDTA, 0,4 M sacharozy, 1 mM FMSF i 1% BSA Przygotowujemy po 100 cm³ roztworów:

(a)    w 100 on³ rozpuszczamy 680,4 mg KH2PO4,

(b)    w 100 cm³ rozpuszczamy 870,7 g K2HPO4.

Dodajemy porcjami roztwór (a) do roztworu (b) aż do uzyskania pH 7,2. W małej ilości otrzymanego buforu fosforanowego rozpuszczamy 104,6 mg NagEDTA, 15,04 g sacharozy i 1 g BSA, dodajemy 0,1 cm³ 1 M PMSF, przenosimy do kolby miarowej & 100 cm³1 uzupełniamy buforem do kreski.

60 mM bufor fosforanowy (pH 7,2) z dodatkiem 0,4 M sacharozy, 1% BSA, 10 mM KCI16 mM MgCI₂ Przygotowujemy po 100 om³ roztworów:

(a)    w 100 cm⁸ rozpuszczamy 680,4 mg KH2PO4,

(b)    w 100 cm³ rozpuszczamy 870,7 g K2HPO4,

Dodajemy porcjami roztwór (a) do roztworu (b) aż do uzyskania pH 7,2. W matą ik>śd otrzymanego buforu fosforanowego rozpuszczamy 15,04 g sacharozy, 0,3 g BSA, 74,55 mg KCI i 101,68 mg MgCł2. Całość przenosimy do fcoftjy miarowej a 100 cm³ i uzupełniamy buforem do kreski.

Wskaźnik

uniwersalny

Wskaźnik uniwersalny pozwała na określanie pH w zakresie 4,Q-fM) i składa się z 2 indykatorów: czerwieni metylową i błękitu bromofymotowego.

A.    Czerwień metylowa. 0,1 g suchego wskaźnika rozpuszczamy w moździerzu w niewielkiej ilości alkoholu etylowego, przenosimy ilościowo, przepłukując moździerz kilkakrotnie alkoholem, do kolby miarowej a 500 cmi³ (alkoholu powinno być 100 cm³). Dodajemy 7,4 cm³ 0,05 N NaOH, dolewamy wody destylowanej do znaczka na szyjce kolby, zatykamy korkiem i dokładnie mieszamy.

B.    Błękit bromotymolowy. 0,1 g suchego wskaźnika rozpuszczamy w 52 cm³ alkoholu etylowego, dodajemy 3,2 cm³ 0,05 N NaOH. Roztwór przenosimy ilościowo (przepłukując naczynie wodą) do kolby miarowej a