52142 skanuj0007

Zasada metody:

Afetywflo^i izoform dehydrogeiliy będziemy oznaczali po elektroforezie preparatu wykorzystuj następujące reakcje:

1)    mleczan + NAD⁺ ► paSgronian + NADH -te Bf

2)    NADH + PMS* NAĘf+ PMS-H

3)    PMS-H; + INT** ► PMS-Formazan

* PMS - metylosiarczan fenazyny ** INT- fiolet p-jodonitrotetrazoliowy

INT

Kteakęla pozwalające na identyfikację naeymogramach izoenzymćw dehydrogenazy mleczanowep

PlWigWf kompleks PMS-formazan tworzy nierozpuszczalny tysatl^ barwie brązowej w miejscu, w którym na nośniku znajdują się pasma o aktywności dehślStąpśpegy mleczanowej. Intensywność barwy jest proporcjonalna do aktywności katalitycznej LDH.

Odczynniki:

1.    Bufor weronalowy Michaelisa pH 8,6 (do elektroforezy)

2.    Nośnik - płytki z żelem agarozowym

3.    IM roztwór mleczanu w buforze glicyna-NaOH pH 9,7

4.    NAD⁺- lOmg/mlwHzO

5.    INT - 4 mg/ml

6.    PMS - 0,2 mg/ml

7.    50mM bufor glicyna-NaOH pH 9.7