3582469133

Hodowle drobnoustrojów, techniki posiewania, otrzymywanie czystych kultur.

Celem ćwiczenia było sporządzenie różnego rodzaju podłoży i posiewanie na nich drobnoustrojów różnymi technikami wraz z otrzymaniem czystych kultur.

1.    Sposób: przeszczepienie kultury płynnej do podłoża płynnego:

Drożdże o nazwie Debaryomyces hansenii (lml) przenosiliśmy do podłoża płynnego YM, za pomocą pipety ze sterylną końcówką w aseptycznych warunkach przy płomieniu palnika.

2.    Sposób: Przeniesienie materiału z mikroorganizmami ze skosu na skos:

Pichia ohmeri przenosiliśmy sterylną ezą, wcześniej opalając wylot probówki z materiałem biologicznym. Drożdże wprowadzaliśmy zygzakiem do podłoża, zaczynając od dołu probówki.

Wszystkie operacje z ezą wymagały jej wcześniejszego wyżarzenia w płomieniu palnika przed i po wprowadzeniu materiału.

3.    Posiew redukcyjny metodą płytek rysowych:

Po uprzednim przygotowaniu i opisaniu płytek, 3 z nich posłużą do wykonania płytek rysowych, każdy członek zespołu wykonuje ją innym sposobem. Drożdżem wykorzystanym w tym posiewie jest Pichia ohmeri z hodowli na podłożu stałym. Niezależnie od sposobu, postępowanie jest analogiczne:

Za pomocą wyjałowionej ezy rozprowadzamy zygzakiem materiał biologiczny w pierwszym sektorze. Ezę wyżarzamy, po ostygnięciu przykładamy na końcu pierwszego sektora i jednym płynnym ruchem przenosimy do sektora drugiego. Nie odrywając ezy od płytki, rozprowadzamy pobrany materiał zygzakiem. Operację kontynuujemy do końca czwartego sektora.

4.    Posiew redukcyjny metodą płytek mazanych:

W metodzie wykorzystywane są trzy opisane płytki z podłożem agarowym, a wykorzystaną w posiewie kulturą jest Debaryomyces hansenii z hodowli płynnej.

Głaszczkę moczymy w denaturacie i podpalamy w celu wyjałowienia. Na 1. płytkę nanosimy pipetą (sterylną) niewielką ilość hodowli płynnej i rozprowadzamy za pomocą głaszczki. Później BEZ ponownej sterylizacji głaszczki, wykonujemy rozmaz na płytce drugiej i trzeciej.

5.    Hodowla rysowa na płytce z agarem kukurydzianym:

Płytkę wykonujemy poprzez poprowadzenie na jej powierzchni trzech równoległych rys. Każdą rysę wykonujemy z użyciem ezy i na każdą nanosimy inną kulturę drożdży. W naszej płytce jest to: Pichia ohmeri, Debaryomyces hansenii oraz Yarrowia lipolytica.