22731

Sporządzono próbki albuminy dodając kolejno 5,10,15,20 pi roztworu albuminy i mieszając je w stosunku 1:1 z buforem do próbek. Analogicznie postąpiono z roztworem markerów mas cząsteczkowych białek i analizowaną próbką białek.

Następnie włożono wszystkie próbki do term obłoku (97,5°C) na pięć minut. Tak przygotowane próbki wstrzyknięto do studzienek w założonym już żelu.

Podłączono aparaturę i prowadzono proces elektroforezy pod napięciem 100V aż to momentu gdy barwnik osiągnął żel rozdzielający, następnie zmieniono napięcie na 180V. Gdy barwnik osiągnął koniec żelu zakończono elektroforezę, rozmontowano aparat do elektroforezy i wyciągnięto żel.

Następnie żel utrwalono w r-r 50% metanolu i 10% kwasu octowego przez 30 minut Tak utrwalony żel barwiono w 10%roztworze kwasu octowego z dodatkiem 0,025% CBB R-250. Po dwóch godzinach odbarwiono żel i roztworze 10% kwasu octowego i zmierzono odległości poszczególnych białek.

Obraz 1 Fotografia żelu poliakrylamidowego z zaznaczonymi białkami 4. Dane pomiarowe

Tabela 1 Odległości wędrówki poszczególnych białek

Badane białka (numer na zdjęciu)		Odległość wędrówki [mm]	Masa białka [kDa]
Białka markerowe	^•galaktozydaza (1)	4	116
	Albuminy surowicy cielęcej (2)	10	66,2
	Owalbumina (3)	18	45
	Dehydrogenaza mleczanowa (4)	23	35
	REase Bsp981 (5)	33	25
	B-lartoglobulina (6)	43	18,4
Roztwory albuminy		10
Nieznane białko (8)		10

2