3893820016

Wysokosprawna chromatografia cieczowa (HPLC) -High Performance/Pressure Liąuid Chromało graphy

Wysokosprawna chromatografia cieczowa (HPLC) jest techniką rozdzielania składników mieszanin na podstawie różnic w szybkości ich migracji przez kolumnę zawierającą mikroziarnistą fazę stacjonarną. Substancje są przenoszone przez kolumnę w strumieniu ciekłej fazy ruchomej, poruszającej się pod wpływem ciśnienia, i są wykrywane w eluacie. Charakterystyka podstawowa HPLC

Format metody - kolumnowa

Mechanizm sorpcji (technika) - W HPLC stosowane są wszystkie mechanizmy sorpcji: podział, adsorpcja, wymiana jonowa, wykluczenie, powinowactwa i chiralna. Składniki rozdzielają się na podstawie szybkości migracji zależnej od powinowactwa do faz.

Nośnik - ściana kolumny, drobnoziarniste ciało stałe.

Faza stacjonarna - modyfikowana krzemionka, niemodyfikowana krzemionka, żywice polimerowe, żele. Fazę stacjonarną stanowi gęsto i jednorodnie upakowane złoża, dobrze odpowietrzone. W HPLC stosuje się następujące wypełnienia:

a)    tlenki nieorganiczne - np. tlenek glinu

b)    żele krzemionkowe

c) żele krzemionkowe modyfikowane łańcuchami alkilowymi (tzw. fazy związane)

1‘ °N

-i-o'' 'ot

d)    żele krzemionkowe modyfikowane łańcuchami alkilowymi zawierającymi grupę funkcyjną (tzw. fazy związane) np.: R-CN, R-NH2

e)    żele krzemionkowe modyfikowane grupami chiralnymi (tzw. fazy związane)

I

—SI—OSi(CH,J₃

0

1

— SI —o

I \

0    Si—(CHj),—NH—C —CH—CH,—CH,

1    /I    11

—SI—O OSI(CH3)3    o nh

CHO

f) anionowe i kationowe wymieniacze jonowe

Si—O    CH2CH2CH2—N(CHj)₃