KOMPLEKSY
KOMPLEKSY
IMMUNOLOGICZNE
IMMUNOLOGICZNE
Ćwiczenie nr 3
Immunopatologia
2009/2010
KOMPLEKSY
KOMPLEKSY
IMMUNOLOGICZNE
IMMUNOLOGICZNE
Ćwiczenie nr 3
Immunopatologia
2009/2010
Kompleks immunologiczny (KI)
Kompleks immunologiczny (KI)
(łac. complexio - połączenie,
wyrównanie) - kompleks powstały
przez związanie
antygenu
przez
swoiste
dla niego
przeciwciało
Kompleksy immunologiczne
Kompleksy immunologiczne
Cechy nadwrażliwości
Cechy nadwrażliwości
typu III
typu III
Reakcja typu III
- wynik odkładania się KI
w tkankach, co indukuje proces zapalny:
Aktywację i wiązanie układu dopełniacza
Stymulację granulocytów i makrofagów;
uwalnianie cytokin prozapalnych
Interakcje z bazofilami i płytkami krwi
(receptory FcR); uwalnianie amin
naczynioruchowych
NADWRAŻLIWOŚĆ
NADWRAŻLIWOŚĆ
TYPU III wg Coombsa
TYPU III wg Coombsa
Postacie kliniczne:
choroba posurowicza
odczyn Arthusa
reumatoidalne zapalenie stawów
toczeń rumieniowaty układowy
paciorkowcowe kłębuszkowe zapalenie nerek
guzkowe zapalenie tętnic
zewnątrzpochodne alergiczne zapalenie
pęcherzyków płucnych: płuco farmera, płuco
hodowcy pieczarek, płuco hodowcy gołębi
przewlekłe kłębuszkowe zapalenie nerek w
przebiegu tocznia rumieniowatego
Hipotetyczny model rozwoju
Hipotetyczny model rozwoju
nefropatii z udziałem
nefropatii z udziałem
przeciwciał przeciw C1q
przeciwciał przeciw C1q
Kompleksy immunologiczne
Kompleksy immunologiczne
Cechy:
Są usuwane przez układ fagocytów bądź
erytrocyty
Mogą tworzyć się w krwiobiegu i
miejscowo
Dopełniacz ułatwia rozerwanie połączenia
Ag-Ab i utrzymuje KI w stanie płynnym:
- hamowanie ich precypitacji
- rozpuszczanie wytrąconych
- indukcja usuwania przez fagocyty
Kompleksy immunologiczne
Kompleksy immunologiczne
Czynniki sprzyjające odkładaniu KI:
Wielkość
– średniej wielkości są patogenne
Powinowactwo i klasa przeciwciał
–
IgG1/3
Dopełniacz
– niedobory C powodują
powstawanie patologicznych KI
Miejscowe warunki mikrokrążenia
-
zwiększona przepuszczalność naczyń, wzrost
ciśnienia, zapalenie
Specyfika tkanki
- antygeny kationowe,
receptory dla CR1 (kłębuszki nerkowe)
OZNACZANIE KOMPLEKSÓW
OZNACZANIE KOMPLEKSÓW
IMMUNOLOGICZNYCH
IMMUNOLOGICZNYCH
1. METODY FIZYCZNE
1. METODY FIZYCZNE
Wykrywanie krioglobulin
Wykrywanie krioglobulin
-
-
tj
tj
. globulin precypitujących w +4
. globulin precypitujących w +4
0
0
C
C
Precypitacja glikolem polietylenowym
Precypitacja glikolem polietylenowym
(PEG) wg
(PEG) wg
Creightona
Creightona
-
-
wytrącanie białek o dużej masie cząsteczkowej
wytrącanie białek o dużej masie cząsteczkowej
Wiązanie składowej C
Wiązanie składowej C
1
1
q -
q -
wykrywanie dużych KI
wykrywanie dużych KI
Hamowanie aglutynacji cząsteczek lateksu opłaszczonych
Hamowanie aglutynacji cząsteczek lateksu opłaszczonych
agregowaną IgG -
agregowaną IgG -
lateks aglutynuje w obecności C
lateks aglutynuje w obecności C
1
1
q, a w
q, a w
obecności KI nie dochodzi do aglutynacji
obecności KI nie dochodzi do aglutynacji
Pomiar aktywności antykomplementarnej
Pomiar aktywności antykomplementarnej
-
-
związanie C
związanie C
1
1
q
q
przez KI hamuje właściwości hemolityczne układu dopełniacza
przez KI hamuje właściwości hemolityczne układu dopełniacza
Wiązanie C
Wiązanie C
1
1
q met. radioimmunologiczną -
q met. radioimmunologiczną -
jodowany
jodowany
C
C
1
1
q
q
poddaje się
poddaje się
reakcji z badanym płynem, powstałe KI precypitują za
reakcji z badanym płynem, powstałe KI precypitują za
pomocą PEG pomiar radioaktywności w strącie
pomocą PEG pomiar radioaktywności w strącie
Test z komórkami Raji
Test z komórkami Raji
-
-
kom. Raji (linia chłoniaka Burkitta)
kom. Raji (linia chłoniaka Burkitta)
posiadają receptor dla C3, wiąże KI. Wiązanie mierzy się za
posiadają receptor dla C3, wiąże KI. Wiązanie mierzy się za
pomocą jodowanego odczynnika anty- Ig - ocena ilościowa
pomocą jodowanego odczynnika anty- Ig - ocena ilościowa
OZNACZANIE KOMPLEKSÓW
OZNACZANIE KOMPLEKSÓW
IMMUNOLOGICZNYCH
IMMUNOLOGICZNYCH
2. METODY OPARTE NA
2. METODY OPARTE NA
INTERAKCJACH ZE SKŁADOWYMI
INTERAKCJACH ZE SKŁADOWYMI
DOPEŁNIACZA
DOPEŁNIACZA
Test z przeciwciałami anty–C3b
Test z przeciwciałami anty–C3b
-
-
opłaszczone
opłaszczone
przeciwciała wiążą KI, które wykrywane są za pomocą
przeciwciała wiążą KI, które wykrywane są za pomocą
odczynnika anty-Ig techniką radioimmunologiczną lub ELISA.
odczynnika anty-Ig techniką radioimmunologiczną lub ELISA.
Test wiązania konglutyniny
Test wiązania konglutyniny
-
-
(składowa surowicy wołu)
(składowa surowicy wołu)
ma zdolność reagowania z kompleksami C3bi i C3d, które
ma zdolność reagowania z kompleksami C3bi i C3d, które
wykrywane są za pomocą odczynnika anty-Ig techniką
wykrywane są za pomocą odczynnika anty-Ig techniką
radioimmunologiczną lub ELISA
radioimmunologiczną lub ELISA
Test odchylenia (dewiacji C1q)
Test odchylenia (dewiacji C1q)
-
-
zahamowanie wiązania
zahamowanie wiązania
jodowanego C1q
jodowanego C1q
OZNACZANIE KOMPLEKSÓW
OZNACZANIE KOMPLEKSÓW
IMMUNOLOGICZNYCH
IMMUNOLOGICZNYCH
2. METODY OPARTE NA
2. METODY OPARTE NA
INTERAKCJACH ZE SKŁADOWYMI
INTERAKCJACH ZE SKŁADOWYMI
DOPEŁNIACZA c.d.
DOPEŁNIACZA c.d.
Czynnik reumatoidalny
Czynnik reumatoidalny
to przeciwciała klasy IgM,
to przeciwciała klasy IgM,
rzadziej IgG powstające u chorych z RZS. Czynnik ten
rzadziej IgG powstające u chorych z RZS. Czynnik ten
wiąże się z KI, które można wykryć w podwójnej
wiąże się z KI, które można wykryć w podwójnej
dyfuzji w agarze
dyfuzji w agarze
Hamowanie aglutynacji cząsteczek lateksu
Hamowanie aglutynacji cząsteczek lateksu
opłaszczonych agregowaną IgG -
opłaszczonych agregowaną IgG -
cząsteczki
cząsteczki
lateksu reagują z surowicą zawierającą KI, a następnie
lateksu reagują z surowicą zawierającą KI, a następnie
z czynnikiem reumatoidalnym i nie dochodzi do
z czynnikiem reumatoidalnym i nie dochodzi do
aglutynacji
aglutynacji
OZNACZANIE KOMPLEKSÓW
OZNACZANIE KOMPLEKSÓW
IMMUNOLOGICZNYCH
IMMUNOLOGICZNYCH
3. METODY OPARTE NA REAKCJI
3. METODY OPARTE NA REAKCJI
Z CZYNNIKIEM
Z CZYNNIKIEM
REUMATOIDALNYM
REUMATOIDALNYM
Precypitacja glikolem
Precypitacja glikolem
polietylenowym wg
polietylenowym wg
Creightona
Creightona
1. H
2
O
dest.
2. NaOH
1. Bufor
fosforanowy
1. Surowica
badana
2. Bufor boranowy
3. PEG
INKUBACJA
ODCZYT NA
SPEKTROFOTOMETR
ZE
ELEKTROFOREZA
Spektrofotometr
Norma:
0,084 mg/ml
0,1 jednostki odczytu = 0,07 mg/ml białka
Precypitacja glikolem
Precypitacja glikolem
polietylenowym wg
polietylenowym wg
Creightona
Creightona