Morfologia drobnoustrojów.

Metody stosowane w

diagnostyce

mikrobiologicznej – metody

barwienia.

Techniki przygotowania preparatu

• Przyżyciowe (preparat natywny)

– służą do oceny:

• ruchliwości

• żywotności

– zawiesina drobnoustrojów w wodzie lub soli

fizjologicznej

• w kropli spłaszczonej – na szkiełku podstawowym

• w kropli wiszącej – na szkiełku z komorą Lindnera

• Preparaty przyżyciowe

Techniki przygotowania preparatu

Techniki przygotowania preparatu

• Przyżyciowe (preparat natywny)

– Barwienie:

• barwienie błękitem metylenowym - pozwala ocenić

żywotność drożdży; barwnik przenika do wnętrza

martwej komórki, która barwi się na ciemnoniebiesko

• barwienie płynem Lugola umożliwia wykrycie w

komórce drożdży substancji zapasowych – glikogenu,

który barwi się na brunatno, a cytoplazma komórki

jasnożółto

Techniki przygotowania preparatu

• Preparaty utrwalone

Metody utrwalania preparatu

• Fizyczne:

– temperatura

• Chemiczne:

– etanol

– metanol

– formalina

– pary kwasu osmowego

Techniki przygotowania preparatu

Metody utrwalania preparatu

• Cel utrwalenia:

– zabicie drobnoustrojów

– ułatwienie wniknięcia barwnika do wnętrza

komórki

– zwiększenie przylegania drobnoustrojów do

powierzchni szkiełka

– denaturacja białek – zapobieganie autolizie

struktur wewnątrzkomórkowych

Techniki przygotowania preparatu

Cel barwienia

 Wykazanie obecności bakterii w badanym

materiale

 Określenie kształtu i układu przestrzennego

komórek

 Zabicie drobnoustrojów – bezpieczeństwo pracy

Techniki przygotowania preparatu

Metody barwienia

Metody barwienia

Proste

Pozytywne

Negatywne

Złożone

Pozytywne

Pozytywno-negatywne

Metody barwienia

• Proste - pozytywne:

• Metoda Löfflera z błękitem metylenowym

(niebieskie)

• Safranina (czerwone)

• Proste - negatywne

• Nigrozyną / tuszem chiński

Metody barwienia

• Złożone pozytywno – negatywne

• barwienie (uwidocznienie) otoczek

wg Burri –

Ginsa

• barwienie przetrwalników

wg Dornera

Metody barwienia

 Złożone - pozytywne

 Metoda Neissera
 Metoda Waysona
 Metoda Wirtza-Conklina

do barwienia przetrwalników

 Ziehl – Neelsena

- barwienia bakterii kwasoopornych

 Kinyoun – Gabett’a

- barwienie bakterii kwasoopornych

 Metoda Grama

Bakterie

Gram-dodatnie

Bakterie

Gram-ujemne

Schemat barwienia bakterii metodą Grama

Utrwalenie

preparatu

Fiolet krystaliczny

Płyn Lugola

Odbarwienie

roztworem

alkoholu

Fuksyna zasadowa

2-3’

1-2’

30-60’’

30-60’’