Tom 59
2010
Numer 1–2 (286–287)
Strony
83–90
M
ichał
B. P
onczek
Katedra Biochemii Ogólnej
Wydział Biologii i Ochrony Środowiska
Uniwersytet Łódzki
Banacha 12/16, 90-237 Łódź
E-mail:
mponczek@biol.uni.lodz.pl
EWOLUCJA UKŁADU HEMOSTAZY KRĘGOWCÓW
WPROWADZENIE
Układ hemostazy odpowiada u kręgow-
ców za delikatną równowagę pomiędzy
krzepnięciem krwi z jednej strony, a rozpusz-
czaniem zakrzepów z drugiej. Wiele z białek
zaangażowanych w ten system należy do ro-
dziny proteaz serynowych — enzymów przeci-
nających wiązania peptydowe w innych biał-
kach, których aktywność zależy od obecności
w centrum aktywnym trzech blisko położo-
nych przestrzennie reszt aminokwasów – se-
ryny, histydyny i asparaginianu – zwanych
triadą katalityczną. Proteazy układu hemostazy
nie przeprowadzają całkowitego trawienia, ale
jedynie niewielkie modyfikacje innych białek,
zwykle następnych zymogenów proteaz sery-
nowych, które w ten sposób zostają aktywo-
wane. Aktywne enzymy działają na kolejne
zymogeny, w skutek czego powstaje złożona
sieć przekazywania i wzmacniania sygnału.
Niewielka ilość cząsteczek eksponowanych w
wyniku uszkodzenia tkanek uruchamia lawi-
nową odpowiedź, która prowadzi do aktywa-
cji fibrynogenu i tworzenie polimeru fibryny
(włóknika). Niemalże równocześnie urucha-
miany jest mechanizm przeciwny, obejmujący
różnorakie inhibitory oraz czynniki fibryno-
lizy, którego rolą jest zapewnienie kontro-
li krzepnięcia i ostatecznie rozkład fibryny,
wtedy gdy czop włóknika jest już zbyteczny.
W procesie hemostazy bardzo ważną rolę od-
grywają płytki krwi, bezjądrzaste u ssaków,
lub trombocyty, jądrzaste, u pozostałych krę-
gowców oraz śródbłonek naczyniowy (ł
oPa
-
ciuk
i B
iederMan
2001).
Kaskadowy mechanizm zestalania i kon-
troli płynności krwi jest niezwykłym osią-
gnięciem ewolucyjnym kręgowców, którego
wyłonienie się umożliwiło efektywną ochro-
nę przed utratą płynów ciała oraz skutecz-
niejszą obronę przed wnikaniem patogenów.
(a
ird
2003). Czy można jakoś poznać ewo-
lucję tego układu? W jaki sposób doszło do
powstania tak niezwykłego systemu kontroli
płynności i zestalania krwi u kręgowców? Na
te pytania podjęta zostanie próba udzielenia
odpowiedzi w tym artykule, w oparciu o naj-
nowsze publikacje naukowe. Wcześniej jed-
nakże zostanie omówiona budowa domeno-
wa wybranych czynników hemostazy, gdyż
znacznie ułatwi to zrozumienie problemów
związanych z badaniem ewolucji tej grupy
białek.
Wykaz skrótów i nazw angielskojęzycznych: BLAST — the Basic Local Alignment Search Tool (tłum. podstawowe
narzędzie dopasowania sekwencji); EGF — Epidermal Growth Factor (tłum. czynnik wzrostu naskórka); FRED —
Fibrinogen REleted Domain (tłum. domena „fibrynogenopodobna”); GLA — Gamma-carboxygLutamic Acid-rich
domain (tłum. domeny bogate w kwas gamma-karboksyglutaminowy); HGF — Hepatocyte Growth Factor (tłum.
czynnik wzrostu hepatocytów); HGFA — Hepatocyte Growth Factor Activator (tłum. aktywator czynnika wzro-
stu hepatocytów); NCBI — National Center for Biotechnology Information (tłum. narodowe centrum informacji
biotechnologicznej); PAN — Protein Apple domaiN (tłum. białkowa domena jabłkowa); PFAM — Protein FAMilies
Data Base (tłum. baza rodzin białkowych); PROSITE — PROtein SITE (tłum. miejsce / strona białek); SMART — Sim-
ple Modular Architecture Research Tool (tłum. proste narzędzie badań architektury modularnej); TSP1 — Throm-
boSPondin type 1 repeats (tłum. powtórzenia trombospondynowe typu 1).
84
M
ichał
B. P
onczek
Domeny charakterystyczne dla czynników
hemostazy występują także w innych biał-
kach, pełniących całkiem odmienne funkcje.
Wymienić tutaj można dość powszechne do-
meny EGF i FN, ale także domenę ferroksyda-
zy zależnej od miedzi (domena F5/8 typu A),
która występuje w czynnikach krzepnięcia
krwi V i VIII, w białku osocza krwi cerulo-
plazminie oraz w białku błonowym nabłonka
jelit hefajstynie (Ryc. 1). Domena dyskoidy-
nowa, nazywana także domeną F5/8 typu C,
charakterystyczna dla czynników krzepnięcia
krwi V i VIII (J
iang
i d
oolittle
2003), wy-
stępuje również w licznych białkach błono-
wych, między innymi w neuropilinach (k
ie
-
dzierska
i współaut. 2007).
Bardzo liczną grupę czynników hemosta-
zy stanowią enzymy o charakterze proteaz
serynowych. Proteazy serynowe układu he-
mostazy charakteryzują się złożoną budową
domenową, a każde z tych białek posiada kil-
ka domen należących do różnych rodzin biał-
kowych (Ryc. 1). Największą jest, zlokalizo-
wana na C-końcu białka, domena odpowiada-
jąca za aktywność proteolityczną. Nazywana
jest zwykle domeną trypsynową, ze względu
na podobieństwo do dobrze znanego enzy-
mu trawiennego trypsyny.
Proteazy serynowe układu hemostazy po-
siadają dodatkowo różnorodne domeny, po-
dążając od N-końca. Jedną z ważniejszych
jest GLA, zawierająca reszty modyfikowane-
go aminokwasu — kwasu γ-glutaminowego.
Do prawidłowego działania białka posiada-
jącego taką domenę konieczna jest witami-
na K, gdyż związek ten jest kofaktorem en-
zymu γ-karboksylazy, odpowiadającego za
modyfikację aminokwasu glutaminianu do
γ-glutaminianu. Do białek krzepnięcia posia-
dających domenę GLA, należą: protrombina,
czynnik VII, czynnik IX i czynnik X, białko
C, białko S i białko Z. Domena trypsynowa
białka Z jest nieaktywna, z powodu braku
seryny i histydyny w miejscach odpowiada-
jących triadzie katalitycznej, a białko S takiej
domeny w ogóle nie posiada, gdyż nie jest
proteazą (J
iang
i d
oolittle
2003).
Pozostałe N-końcowe domeny, występu-
jące w proteazach układu hemostazy, to: do-
meny kringlowe, palce fibronektynowe (FN-
1, FN-2 i FN-3), domeny czynnika wzrostu
naskórka (EGF) i domeny jabłkowe (PAN).
Domeny kringlowe są charakterystyczne dla
protrombiny, czynnika XII, plazminogenu
oraz tkankowego i urokinazowego aktywa-
tora plazminogenu (t-PA i u-PA). Domeny
EGF występują we wszystkich proteazach
serynowych układu hemostazy za wyjątkiem
protrombiny, plazminogenu, czynnika XI i
prekalikreiny osoczowej. Domeny PAN wy-
stępują w czterech kopiach w czynniku XI i
prekalikreinie oraz w jednym powtórzeniu w
plazminogenie (J
iang
i d
oolittle
2003).
Ryc. 1. Budowa domenowa czynników układu
hemostazy oraz ceruloplazminy i hefajstyny.
Domeny: T — domeny trypsynowe (proteazy sery-
nowej); P — domeny jabłkowe (PAN); K — domeny
kringlowe; F — domeny fibronektynowe; E — dome-
ny czynnika wzrostu naskórka (EGF); A — domeny
ferroxydazy zależnej od miedzi (domeny F5/8 typu
A); B — domena F5/8 typu B; C – domeny dyskoidy-
nowe (domeny F5/8 typu C).
BUDOWA DOMENOWA BIAŁEK HEMOSTAZY
BADANIE EWOLUCJI HEMOSTAZY
Początki poznawania podstaw bioche-
micznych układu hemostazy człowieka się-
gają XIX w., lecz sam proces ewolucji krzep-
nięcia krwi kręgowców badany jest zaledwie
od ponad pół wieku. Wkrótce po ustaleniu
sekwencji aminokwasowej niektórych czyn-
ników hemostazy zauważono, że pewne z
nich wykazują podobieństwo do innych, nie
85
Ewolucja układu hemostazy kręgowców
niu odpowiadającego składnika u człowieka
(d
oolittle
1993). Trzecia strategia możliwa
stała się dzięki rozwojowi metod genetyki
molekularnej i obejmuje klonowanie moleku-
larne oraz sekwencjonowanie DNA. Czwarte
podejście to metody bioinformatyczne, które
możliwe stały się dzięki rozwojowi informa-
tyki oraz przyrostowi mocy obliczeniowej i
pamięci komputerów. Bez trzeciej strategii
nie stałoby się to możliwe, w tym bez pro-
gramów badawczych obejmujących sekwen-
cjonowania całych genomów różnych orga-
nizmów. Metody komputerowej analizy se-
kwencji DNA i kodowanych przez nie białek
umożliwiają rekonstruowanie ewolucji ukła-
du hemostazy
in silico, ograniczając kosztow-
ne badania
in vitro czy ex vivo.
tylko w obrębie poszczególnych domen, ale
także bardzo często w kolejności ich wystę-
powania. Jako przyczynę takich podobieństw
uznano duplikację genów u dawnych przod-
ków współczesnych organizmów (d
oolittle
1993).
Odkrywanie kolejnych tajników wyłania-
nia się układu hemostazy stało się możliwe
dzięki zastosowaniu czterech strategii badaw-
czych. W dwóch pierwszych poznawane były
mechanizmy krzepnięcia krwi „prostszych”
zwierząt, z zastosowaniem metod bioche-
micznych, a wyniki porównywano z wcze-
śniej zgromadzoną wiedzą o krzepnięciu
krwi człowieka. Kolejne podejście opierało
się na oczyszczeniu każdego z czynników
układu hemostazy, określeniu jego właści-
wości chemicznych, a następnie znalezie-
PRZESZUKOWANIE SEKWENCJI GENOMOWYCH
W pełni zsekwencjonowane genomy stru-
nowców: żachwy, lancetnika, minoga, ryb —
rozdymki tygrysiej (
Takifugu rubripes) i da-
nio pręgowanego (
Danio rerio), żab (Xeno-
pus tropicalis, Xenopus laevis), zielonej jasz-
czurki amerykańskiej (
Anolis carolinensis),
kury, dziobaka (
Ornithorhynchus anatinus),
i oposa
(Monodelphis domestica) (Ryc. 2) zo-
stały użyte jako baza danych w poszukiwaniu
odpowiedników około 20 różnych genów
związanych z układem hemostazy człowieka
i myszy (J
iang
i d
oolittle
2003, d
oolittle
i współaut. 2008, P
onczek
i współaut. 2008,
d
oolittle
2009).
Procedura znajdowania homologów bia-
łek hemostazy rozpoczyna się od zlokalizo-
wania potencjalnych genów w bazach geno-
mowych za pomocą algorytmu BLAST, przy
użyciu znanych sekwencji człowieka lub in-
nych ssaków jako wzorców. Sekwencje naj-
lepszych „trafień” zostają zweryfikowane po-
przez zastosowanie ich jako matryc w prze-
szukiwaniach programem BLAST względem
bazy białek NCBI. Jeśli taka dodatkowa pro-
cedura zwróci wyjściowe białko wzięte jako
wzorzec, można przyjąć, że wynik jest prawi-
dłowy. Dodatkowym potwierdzeniem będzie
identyczność budowy domenowej szukanego
białka, co można szybko sprawdzić, na pod-
stawie sekwencji, za pomocą takich narzędzi
jak PROSITE (http://www.expasy.ch/prosi-
te/), PFAM (http://pfam.sanger.ac.uk/), czy
SMART
(http://smart.embl-heidelberg.de/).
Jeśli jednakże inne białka dają lepsze wyni-
ki, mamy do czynienia raczej z paralogiem –
spokrewnionym białkiem, ale najprawdopo-
dobniej o innej pełnionej funkcji (d
oolittle
2009).
Niestety strategia taka nie jest pozbawio-
na błędów. Nie wszystkie bazy genomowe są
kompletne i nie zawsze wszystkie fragmenty
sekwencji są prawidłowo zestawione (asem-
Ryc. 2. Związki filogenetyczne pomiędzy stru-
nowcami — dywergencja poszczególnych grup
organizmów i wyłanianie się kolejnych elemen-
tów hemostazy.
A — 1 pojawienie się czynnika tkankowego, trom-
biny i prostej odpowiedzi komórkowej; — 2 wyło-
nienie się fibrynogenu oraz czynników X i VIII; B
— duplikacje prowadzące do powstania czynnika IX
z X i VIII z V; C — pojawienie się czynnika XII i pre-
kalikreiny; D — wykształcenie aktywacji krzepnięcia
krwi poprzez czynniki kontaktu — duplikacja prowa-
dzi do oddzielenia czynnika XI od prekalikreiny.
86
M
ichał
B. P
onczek
twe jest często odróżnienie, badając bazy ge-
nomów, ortologów, faktycznych odpowiedni-
ków szukanych białek, od paralogów, białek
homologicznych, ale wyspecjalizowanych do
pełnienia odmiennych funkcji w organizmie
(d
oolittle
2009).
blowane). Łatwiej stwierdzić występowa-
nie jakiegoś genu niż udowodnić jego brak.
Szybkość utrwalania mutacji, i co za tym
idzie ewolucji po duplikacji genu, nie zawsze
jest taka sama względem genów potomnych.
Trudno jest więc czasami ustalić relacje po-
krewieństwa między białkami. Dlatego nieła-
OBECNY OBRAZ EWOLUCJI UKŁADU HEMOSTAZY
Poczynając od gromady kręgoustych, a
kończąc na ssakach, krzepniecie krwi zacho-
dzi, gdy proteaza serynowa trombina prze-
kształca rozpuszczalny fibrynogen w nieroz-
puszczalną fibrynę (Ryc. 3). Sama trombina
jest produktem proteolitycznego przekształ-
cenia protrombiny, co możliwe jest po akty-
wacji kaskady czynników krzepnięcia (B
loM
-
Back
1996).
Obecność trombiny i jej aktywację przez
proteazy serynowe zależne od witaminy K,
stabilizację fibrynogenu przez czynnik XIII
oraz fibrynolizę stwierdzono nawet u bez-
żuchwowców (minóg morski
Petromyzon
marinus) — najbardziej prymitywnych przed-
stawicieli kręgowców (d
oolittle
1965)
. Opi-
sanych
mechanizmów brak jest u prostych
strunowców, takich jak lancetnik (na przy-
kładzie gatunku
Branchiostoma floridae) czy
żachwa (na przykładzie gatunku
Ciona inte-
stinalis) oraz u bezkręgowców (d
oolittle
1993).
Badania genomów prostych strunowców
na przykładzie lancetnika i żachwy wykazały,
mimo występowania genów zawierających
domeny analogiczne do fibrynogenu (FRED)
oraz kilku proteaz bardzo podobnych do
protrombiny, że żadne z nich nie są praw-
dziwym fibrynogenem i prawdziwą, funkcjo-
nalną protrombiną (d
oolittle
2009). Białka
„trombinopodobne” cechuje dość duże, oko-
ło 40% podobieństwo sekwencyjne w obrę-
bie domeny trypsynowej, ale brak jest typo-
wych domen N-końcowych, w szczególności
domeny GLA. Obecna jest także u lancetnika
proteaza serynowa z dwukrotnie powtarza-
jącymi się N-końcowymi domenami kringlo-
wymi, z domeną trypsynową w około 43%
podobną do domeny proteazowej plazmino-
genu (5 domen kringlowych) i do niefunk-
cjonalnej domeny trypsynowej apolipoprote-
iny A (50 domen kringlowych) u człowieka
(d
oolittle
2009). Podobieństwo do czynni-
ka IX, protrombiny i czynnika wzrostu he-
patocytów (HGF) wynosi odpowiednio 39%,
34% i 33%. Na uwagę zwracają pewne podo-
bieństwa do plazminogenu ssaków, takie jak:
miejsce aktywacji przez tkankowy aktywator
plazminogenu
in silico i aktywacja rekombi-
nowanego białka przez urokinazowy aktywa-
tor plazminogenu człowieka
in vitro. Opisa-
ne białko lancetnika posiada dwie domeny
kringlowe zawierające miejsca wiążące lizynę
(cecha typowa dla plazminogenu, choć biał-
ko kręgowców posiada o trzy domeny krin-
glowe więcej), nie ma domeny PAN i praw-
dopodobnie pełni nieco odmienną funkcję
niż plazminogen kręgowców (brak fibryno-
Ryc. 3. Schematyczne przedstawienie układu
hemostazy człowieka.
F — czynniki krzepnięcia krwi, FBG — fibrynogen,
FBN — fibryna, FBX — fibryna stabilizowana przez
czynnik XIII, FDP — produkty degradacji fibryny,
FDPX — produkty degradacji fibryny stabilizowanej,
KNG — wielkocząsteczkowy kininogen, PK — preka-
likreina osoczowa, PL — fosfolipidy, PLG — plazmino-
gen, PLN — plazmina, t-PA — tkankowy aktywator pla-
zminogenu, u-PA — urokinazowy aktywator plazmino-
genu. Procesy związane z krzepnięciem linie ciągłe,
procesy związane z fibrynolizą linie przerywane.
87
Ewolucja układu hemostazy kręgowców
Ryby kostnoszkieletowe mają już wyod-
rębnione dwie pary czynników, odpowied-
nio IX i VIII oraz X i V (J
iang
i d
oolittle
2003).
Omówione wcześniej grupy kręgowców
nie posiadają w ogóle tzw. układu kontaktu,
czyli czynnika XII, XI i prekalikreiny osoczo-
wej oraz wielkocząsteczkowego kininogenu.
U ryb występuje jednakże gen białka homo-
logicznego do aktywatora czynnika wzrostu
hepatocytów (HGFA), który jest paralogiem
czynnika XII u człowieka (P
onczek
i współ-
aut. 2008). Znaleziono także u ryb kininogen
podobny do białka ssaków, jednakże bez seg-
mentu bogatego w histydynę, który jest nie-
zbędny do aktywności w układzie kontaktu.
Sekwencja taka pojawia się po raz pierwszy
dopiero u płazów (z
hou
i współaut. 2008).
Gen czynnika XII jest obecny u płazów, ga-
dów, ssaków łożyskowych i oposa (przed-
stawiciela torbaczy), natomiast brak go u
kury. Paralogi — czynnik XII i HGFA — po-
łożone są u ssaków na odrębnych chromo-
genu u prymitywnych strunowców), mimo
że dla gatunku lancetnika
Branchiostoma
belcheri tsingtauense zostało sklonowane i
zapisane w bazach danych pod nazwą „pla-
zminogen” (l
iu
i z
hang
2009). Osłonice,
do których należą żachwy, zostały ostatnio
uznane, na podstawie badań genetycznych,
za bliżej spokrewnione z kręgowcami, niż
strunogłowe (bezczaszkowce), do których
zalicza się lancetnik (P
utnaM
i współaut.
2008). Także w tej grupie zwierząt nie udało
się wykryć fibrynogenu i trombiny, chociaż
wiadomo, że organizmy te utraciły wiele ge-
nów przechodząc do osiadłego tryby życia
(genom lancetnika 540 MB — genom żachwy
330 MB). U żachwy
Ciona intestinalis wy-
stępuje jednakże, jak u lancetnika, dwukrin-
glowe białko „plazminogenopodobne” (J
iang
i d
oolittle
2003). Białko to w odróżnieniu
od plazminogenu kręgowców, zamiast do-
meny PAN na N-końcu, posiada powtórzenia
trombospondynowe typu 1 (TSP1), a dome-
na trypsynowa podobna jest w 39% do ana-
logicznej domeny plazminogenu. Niestety
brak jest obecnie danych na temat funkcji
biologicznej białek podobnych do plazmino-
genu u prymitywnych strunowców.
Od dawna wiadomo, że minóg, którego
dywergencja nastąpiła przed pojawieniem
się kręgowców żuchwowych, posiada fi-
brynogen i trombinę (c
ottrell
i d
oolittle
1976). Badania bioinformatyczne zsekwen-
cjonowanego genomu minoga umożliwiły
ustalenie, że u tego bezżuchwowca kaskada
krzepnięcia wydaje się być nieco prostsza
(d
oolittle
i współaut. 2008). Minóg posia-
da czynnik tkankowy oraz czynnik VII, ale
czynniki V i VIII mają u tego organizmu tyl-
ko jeden odpowiednik funkcjonalnie odpo-
wiadający czynnikowi V, choć aż w trzech
homologicznych kopiach. Odpowiednio dla
czynnika IX i X występuje jeden prekursor,
czynnościowo odpowiadający czynnikowi X,
choć w dwóch wariantach (d
oolittle
2009).
U ssaków czynniki IX i VIII oraz X i V two-
rzą kompleksy, zatem u bezżuchwowców
jest tylko jedna taka para. U bezżuchwow-
ców istnieje prawdopodobnie uproszczony
system aktywacji krzepnięcia krwi (Ryc. 4),
odpowiadający mechanizmom występującym
u wyższych kręgowców, dawniej zwanym ze-
wnątrzpochodnym szlakiem aktywacji krzep-
nięcia krwi. Począwszy od minoga, pojawiają
się elementy układu fibrynolizy — „pełnodo-
menowy” plazminogen, oraz prawidłowe ak-
tywatory tego białka – tkankowy i urokinazo-
wy (d
oolittle
i współaut. 2008).
Ryc. 4. Hipotetyczny prostszy układ hemostazy
minoga.
F — czynniki, FBG — fibrynogen, FBN — fibryna, FBX
— fibryna stabilizowana, FDP — FDPX — produkty
degradacji fibryny, FDPX — produkty degradacji fi-
bryny stabilizowanej, PL — fosfolipidy, PLG — pla-
zminogen, PLN — plazmina, t-PA — tkankowy akty-
wator plazminogenu, u-PA — urokinazowy aktywator
plazminogenu. Procesy związane z krzepnięciem li-
nie ciągłe, procesy związane z fibrynolizą linie prze-
rywane.
88
M
ichał
B. P
onczek
Tabela 1. Występowanie genów wybranych proteaz hemostazy i ich paralogów wśród kręgow-
ców.
Organizm
Czynnik IX
Czynnik X
Czynnik XI
Prekalikreina
Czynnik XII
HGFA
Człowiek
Opos
Dziobak
Kura
Jaszczurka
Żaba
Danio
Fugu
Minóg
+
+
+
+
+
+
+
+
–
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
–
–
–
–
–
–
–
+
+
+
+
+
+
–
–
–
+
+
+
–
+
+
–
–
–
+
+
+
+
+
+
?
+
+
PODSUMOWANIE
somach, a u żaby
Xenopus znaleziono je na
odrębnych fragmentach sekwencjonowanego
DNA. W przypadku ptaków doszło do utraty
genu dla czynnika XII (P
onczek
i współaut.
2008). Jest to w zgodzie z ponad stuletnimi
obserwacjami wydłużonego czasu krzepnię-
cia krwi na drodze kontaktu u kury oraz z
niedawnymi badaniami biochemicznymi u
sępa i strusia (F
rost
i współaut. 1999, W
eir
i współaut. 2004).
Jeśli chodzi o pozostałe proteazy kontak-
tu, pojedynczy gen, odpowiadający przodko-
wi czynnika XI i prekalikreiny, znaleziono u
żaby, kury i dziobaka. Białko to przypomina
prekalikreinę ssaków łożyskowych, ponie-
waż w czwartej domenie PAN posiada dwie
zachowane reszty cysteinowe (321 i 326
wg. numeracji człowieka), które tworzą we-
wnątrzłańcuchowe
wiązanie
disulfidowe.
Czynnik XI w pozycji odpowiadającej Cys
326 prekalikreiny posiada glicynę, a obec-
ność niesparowanej Cys 321 daje nową ewo-
lucyjnie własność formowania przez to biał-
ko homodimerów. Co więcej, podobnie jak
w prekalikreinie, w trzeciej domenie PAN
brakuje sekwencji koniecznych do wiązania
z płytkami krwi, kolejnej cechy charaktery-
stycznej dla czynnika XI. Opos posiada po-
dobnie do ssaków łożyskowych zarówno pre-
kalikreinę jak i czynnik XI. Identycznie jak u
człowieka, geny paralogów PK i FXI położo-
ne są jeden za drugim na tym samym chro-
mosomie, wskazując na duplikację lokalną
(P
onczek
i współaut. 2008).
Niezwykle skomplikowane układy białek
są efektem wielu serii duplikacji, mutacji i ta-
sowania domen w obrębie genomów przod-
ków współcześnie istniejących organizmów.
Fibrynogen, kluczowe białko krzepnięcia wy-
stępuje tylko u kręgowców. Nie udało się go
wykryć u pierwotnych strunowców takich
jak lancetnik, czy żachwa zarówno w bada-
niach biochemicznych jak i bioinformatycz-
nych. Można zatem przyjąć, że polimeryzacja
fibrynogenu, zapoczątkowana trombiną po-
jawiła się w okresie około 50-100 milionów
lat pomiędzy pojawieniem się prymitywnych
strunowców a wyodrębnieniem się bezżu-
chwowców (d
oolittle
2009). Cały skompli-
kowany system regulacji układu hemostazy
człowieka i innych ssaków zaczął się kształto-
wać około 450 milionów lat temu (d
avidson
i współaut. 2003). W pełni ukształtowana
aktywacja przez kontakt (dawniej wewnątrz-
pochodny szlak aktywacji krzepnięcia krwi)
jawi się jako najmłodsze ewolucyjnie osią-
gniecie ssaków (Ryc. 1). W prostszym syste-
mie minoga jest mniej potencjalnych miejsc
regulacji hemostazy. W złożonym układzie
ssaków, występują nowe szlaki aktywacji i
hamowania krzepnięcia oraz fibrynolizy. Być
może u wspólnego przodka bezżuchwow-
ców i żuchwowców istniał jeszcze prostszy
system w którym ortolog trombiny bezpo-
średnio aktywował trombocyty, a te zlepiając
się hamowały krwawienie (d
oolittle
2009).
Pojawienie się fibrynogenu umożliwiło, poza
interakcjami międzykomórkowymi, tworze-
89
Ewolucja układu hemostazy kręgowców
hemostazy jest doskonałym przykładem wyła-
niania się coraz większej złożoności w wyni-
ku ewolucji, a jego pełniejsze poznanie przy-
czyni się do lepszego zrozumienia formowa-
nia się coraz bardziej skomplikowanych me-
chanizmów zachodzących w żywych istotach.
Praca ta nie powstałaby bez krótkotermi-
nowego programu stypendialnego Europej-
skiej Organizacji Biologii Molekularnej (ang.
EMBO Short-Term Fellowship) oraz opieki
Russela Doolittle’a, w trakcie odbywania trzy-
miesięcznego stażu po-doktorskiego ASTF
83.00–2008 na UCSD (ang. University of Ca-
lifornia, San Diego).
nie dodatkowej „stałej masy” czopującej ranę.
Dalsza komplikacja systemu doprowadziła do
wykształcenia obecnego systemu hemostazy
ssaków (Ryc. 5). Badania
in silco genomów
strunowców dostarczyły interesujących in-
formacji na temat pojawiania się kolejnych
elementów układu hemostazy, lecz nie są w
stanie całkowicie zastąpić badań
in vitro i
in vivo. Brak jest nadal dokładnej wiedzy na
temat różnic w funkcjonowania tego układu
u niższych i wyższych kręgowców. Nielicz-
ne badania biochemiczne dostarczają jedy-
nie ogólnych danych na ten temat. Nowe
informacje, uzyskane metodami bioinforma-
tycznymi, pozwalają zaplanować kolejne do-
świadczenia laboratoryjne. Powstanie układu
Ryc. 5. Ewolucja układu hemostazy z uwzględ-
nieniem udziału wyspecjalizowanych komórek.
U hipotetycznego przodka ortolog trombiny w obec-
ności czynnika tkankowego, uwalnianego z uszko-
dzonych tkanek, działa na jądrzaste komórki podob-
ne do trombocytów. Aktywacja i agregacja komórek
prowadzi do utworzenia czopu hemostatycznego
bez udziału fibrynogenu. U minoga występuje pro-
sta kaskada krzepnięcia, prowadząca od czynnika
tkankowego do aktywacji protrombiny. Trombina,
pobudza trombocyty i dodatkowo uruchamia prze-
kształcanie fibrynogenu w fibrynę. Monomery fibry-
ny stanowią mostki dodatkowo spajające agregujące
trombocyty, a fibryna wzmacnia skrzep. U ssaków,
na przykładzie człowieka, występują silnie wyspecja-
lizowane, bezjądrzaste płytki krwi, bardziej złożona
kaskada krzepnięcia, prowadząca od czynnika tkan-
kowego do aktywacji protrombiny, oraz dodatkowo
pojawia się jeszcze szlak aktywacji krzepnięcia krwi
poprzez czynniki kontaktu.
EVOLUTION OF VERTEBRATE HEMOSTATIC SYSTEM
S u m m a r y
The extremely complicated systems of proteins
are a result of many series of duplications and shuf-
fling of domains in genomes of predecessors of
nowadays living creatures. Fibrinogen, a key blood
clotting protein, is characteristic only for verte-
brates. The protein could not be found in chordates
like lancelet or sea squirt by biochemical nor bioin-
formatic methods. It can be supposed that fibrin po-
lymerization triggered by thrombin occurred within
the 50–100-million-year time between the appear-
ance of protochordates and vertebrates. The whole
complicate system of haemostasis and its regulation
started to form about 450 million years ago. The
fully developed contact phase of blood coagulation
seems to be the latest evolutionary achievement of
mammals.
LITERATURA
a
ird
W. C., 2003.
Hemostasis and irreducible com-
plexity. J. Thromb. Haemost. 1, 227–230.
B
loMBack
B., 1996.
Fibrinogen and fibrin — pro-
teins with complex roles in hemostasis and
thrombosis. Thromb. Res. 83, 1–75.
c
ottrell
B. A., d
oolittle
R. F., 1976.
Amino acid
sequences of lamprey fibrinopeptides A and B
and characterizations of the junctions split by
lamprey and mammalian thrombins. Biochim.
Biophys. Acta 453, 426-438.
90
M
ichał
B. P
onczek
tional diversity of eukaryotic discoidin-like do-
mains. Biochim. Biophys. Acta 1774, 1069–1078.
l
iu
M., z
hang
S., 2009.
A kringle-containing prote-
ase with plasminogen-like activity in the basal
chordate Branchiostoma belcheri. Biosci. Rep.
29, 385–95.
ł
oPaciuk
S., B
iederMan
A., 2001
. Zakrzepy i zatory.
Wydawnictwo lekarskie PZWL, Warszawa.
P
onczek
M. B., g
ailani
D., d
oolittle
R. F., 2008.
Evolution of the contact phase of vertebrate
blood coagulation. J. Thromb. Haemost. 6, 1876-
1883.
P
utnaM
N. h., B
utts
t., F
errier
d. e., F
urlong
r. F.,
h
ellsten
u., k
aWashiMa
t., r
oBinson
-r
echavi
M.,
s
hoguchi
e., t
erry
a., y
u
J. k. i współaut., 2008.
The amphioxus genome and the evolution of
the chordate karyotype. Nature 453, 1064–1071.
W
eir
M. J., a
curero
z., s
alas
a. r., a
rteaga
-v
izcaino
M., 2004.
Blood coagulation factors in the black
headed vulture (Coragyps atratus), a potential
animal model for the study of haemostasis.
Thromb. Res. 113, 269–73.
z
hou
L., l
i
-l
ing
J., h
uang
h., M
a
F., l
i
Q., 2008.
Phy-
logenetic analysis of vertebrate kininogen genes.
Genomics 91, 129-141.
d
avidson
C. J., t
uddenhaM
e. g., M
cvey
J. h. 2003.
450 million years of hemostasis. J. Thromb. Ha-
emost. 1, 1487–1494.
d
oolittle
R. F., 1965.
Differences in the clotting
of lamprey fibrinogen by lamprey and bovine
thrombins. Biochem. J. 94, 735–741.
d
oolittle
R. F., 1993.
The evolution of vertebra-
te blood coagulation: a case of Yin and Yang.
Thromb. Haemost. 70, 24-28.
d
oolittle
R. F., J
iang
Y., n
and
J., 2008.
Genomic
evidence for a simpler clotting scheme in jaw-
less vertebrates. J. Mol. Evol. 66, 185–196.
d
oolittle
R. F., 2009.
Step-by-Step Evolution of Ver-
tebrate Blood Coagulation. Cold Spring Harb.
Symp. Quant. Biol. (w druku).
F
rost
C. L., n
aude
r. J., o
eloFsen
W., J
acoBson
B.,
1999.
Comparative blood coagulation studies in
the ostrich. Immunopharmacology 45, 75–81.
J
iang
Y., d
oolittle
R. F., 2003.
The evolution of
vertebrate blood coagulation as viewed from
a comparison of puffer fish and sea squirt ge-
nomes. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 100, 7527–
7532.
k
iedzierska
A., s
Mietana
k., c
zePczynska
h., o
tleW
-
ski
J., 2007.
Structural similarities and func-