Pobieranie wymazów z szyjki macicy
7 kroków Testu HPV
Wymazy z szyjki macicy majÄ… byç pobierane przy pomocy
zwalidowanych jałowych wymazówek lub szczoteczek typu
Cervical Sampler"!. Waciki zawierajÄ…ce komórki mogÄ… byç
1. JeĘli jesteĘ zainteresowany zakupem testu na wykry-
odcinane od reszty wymazówki i przechowywane w zamkni´tej
wanie wirusa HPV prosimy o kontakt z laboratorium
probówce wraz z odpowiednim buforem. Próbki nie powinny
Nucleagena. Odpowiemy na kaŻde Twoje pytanie.
byç przechowywane w temperaturze otoczenia (maksimum
2. Zestaw do pobrania materiału do badał
zakupisz
25oC) dÅ‚uÅ»ej niÅ» trzy dni. Po tym czasie analiza powinna byç
równieŻ na stronie
przeprowadzona w przeciągu 48 godzin lub próbki powinny
3. Szczegółowe informacje na temat badania zakaŻeł

byç przechowywane w temperaturze -18Ä…5oC. Próbki nie
wirusem HPV oraz wykrywania raka szyjki macicy
powinny byç przechowywane w roztworach denaturujÄ…cych
znajdziesz na stronie
lub majÄ…cych wpÅ‚yw na aktywnoĘç polimerazy DNA. Powinny
byç przechowywane z dala od Ä™ródeÅ‚ ciepÅ‚a i chronione przed
4. MateriaÅ‚ do badania naleÅ»y pobraç zgodnie
Ęrodowiskowymi zanieczyszczeniami. Wszystkie te działania
z przekazanÄ… instrukcjÄ….
majÄ… zapobiec degradacji wirusowego DNA.
5. Próbk´(i) z pobranym materiaÅ‚em odbierze kurier firmy
test
przewozowej, współpracującej z laboratorium Nucleagena.
6. W laboratorium próbka jest poddana specjalistycznym
Materiał z biopsji
badaniom w celu stwierdzenia obecnoĘci i genotypu na wykrywanie
Próbki nie mogÄ… zawieraç jodu ani kwasu octowego. W celu
wirusa HPV.
dÅ‚uÅ»szego przechowywania materiaÅ‚u naleÅ»y go umieĘciç
wirusa
7. W ciÄ…gu tygodnia dostarczymy wynik testu na obecnoĘç
w odpowiednim roztworze niezawierającym czynników
wirusa HPV priorytetowym listem poleconym.
hpv
denaturujÄ…cych lub wpÅ‚ywajÄ…cych na aktywnoĘç polimerazy
DNA lub przechowywaç w temperaturze -18Ä…5oC. ÂwieÅ»y
materiaÅ‚ z biopsji o Ęrednicy 2-5mm powinien byç dostar-
Producent:
czony do laboratorium w przeciÄ…gu 24 godzin w odpowiednim
Nucleagena Sp. z o.o. Laboratorium Genetyki Molekularnej
buforze w temperaturze 25Ä…5oC.
ul. Pawił
skiego 5a " 02-106 Warszawa
tel.: [phone] " faks: 22 668 71 89
e-mail: [e-mail]
www.nucleagena.pl
Nucleagena Sp. z o.o. realizuje projekt inwestycyjny pt.
"Genetyczne wykrywanie wirusa HPV, skorelowanego
z wyst´powaniem raka szyjki macicy" współfinansowany przez
Uni´ EuropejskÄ… z Europejskiego Funduszu Rozwoju Regionalnego
PieczÄ…tka gabinetu lekarskiego:
oraz budŻetu pał
stwa w ramach Zintegrowanego Programu
Operacyjnego Rozwoju Regionalnego.
Stosowany przez laboratorium Nucleagena test BIOPAP QTS
pozwala na identyfikacj´ najcz´Ä˜ciej wyst´pujÄ…cych genotypów
wirusa HPV: 16, 18, 31, 33, 35, 52, 58 i 67. ZakaŻenie
którymkolwiek z wyszczególnionych typów wirusa HPV
stwarza wysokie ryzyko wystÄ…pienia choroby nowotworowej.
Rak szyjki macicy
a zakażenie wirusem HPV
Zalety testu BIOPAP QTS stosowanego przez
laboratorium Nucleagena
Stosowany test został opracowany według Europejskiej
Dyrektywy Diagnostyki In Vitro 98/79/EC, zgodnie z najwyÅ»-
szymi standardami jakoĘci (ISO 9001 i ISO 13485).
BIOPAP QTS otrzymał znak CE jako zestaw do rutynowej
diagnostyki. jest pierwszym zestawem IVD do
.
Real-Time PCR z certyfikatem CE przeznaczonym do detekcji
onkogennych genotypów HPV (16, 18, 31, 33, 35, 52, 58
Amplifikacja DNA zachodzi dzi´ki aktywnoĘci termostabilnej
i 67). jest doskonaÅ‚ym narz´dziem do regularnych
Onkogenne genotypy wirusa HPV
polimerazy DNA. W obecnoĘci jonów magnezu, soli i odpowied-
badał
lekarskich i detekcji HPV w próbkach klinicznych.
Ludzki Papilloma wirus (HPV) jest wirusem atakujÄ…cym
niej siÅ‚y jonowej enzym ten wykazuje aktywnoĘç polimeryzacyjnÄ…
głównie tkank´ skórnÄ… i odbytowo-pÅ‚ciowÄ…. WywoÅ‚uje infekcj´
na matrycy DNA przy obecnoĘci starterów.
Ęrednio u 15% naraŻonych osób. HPV jest wirusem DNA
Dodatkowo, bezpoĘrednia metoda detekcji na jaką DNA wirusowe jest z analizowanej próbki izolowane
o wielkoĘci genomu około 8 kb. Wirus ten powoduje powsta-
pozwala daje iloĘciowy wynik obrazujÄ…cy liczb´ a nast´pnie dodawane do mieszaniny reakcyjnej (reaction
wanie brodawek i transformacj´ nowotworowÄ… komórek
czÄ…stek wirusa w badanej próbce, co pomaga przy wyborze mix). W celu przygotowania próbki do analizy dodaje si´ HPV
szyjki macicy, macicy i sromu. Niektóre genotypy spoĘród
sposobu leczenia i monitorowaniu choroby. ONC zawierajÄ…cy wi´kszoĘç reagentów z wyjÄ…tkiem polime-
100 zidentyfikowanych sÄ… zwiÄ…zane z transformacjÄ… nowotwo-
razy DNA (POL), chlorku magnezu (MGCL2) i SYBR® Green
rową komórek szyjki macicy. Transformacja nowotworowa
(SYG). Na koł
cu dodawana jest jałowa dejonizowana woda
wiÄ…Å»e si´ z ekspresjÄ… genów E6 i E7. ObecnoĘç genotypów
Zasada działania testu BIOPAP QTS
w celu uzyskania Żądanej koł
cowej obj´toĘci. Gotowa do
16 i 18 wskazuje na duŻe prawdopodobieł
stwo zajĘcia
Test jest testem in vitro pozwalającym na analizy próbka zawierająca wszystkie składniki i DNA wirusowe
takiej transformacji. Analiza filogenetyczna i epidemiolo-
iloĘciowÄ… identyfikacj´ wirusowego DNA poprzez pomiar jest inkubowana w róŻnych temperaturach, tak aby startery
giczna znanych genotypów pozwoliła na wytypowanie genotypów
fluorescencji. DNA wirusa obecne w próbkach jest klono- mogÅ‚y si´ przyÅ‚Ä…czyç do komplementarnych sekwencji w obr´bie
16, 18, 31, 33, 35, 39, 45, 51, 52, 56, 58, 59, 68 i 82,
wane dzi´ki specyficznym starterom komplementarnym do matrycowego DNA wirusowego. W obecnoĘci dNTPs, polime-
które zalicza si´ do grupy wysokiego ryzyka. Genotyp 67
sekwencji wirusowego DNA. Detekcja nast´puje dzi´ki zasto- raza DNA wydÅ‚uÅ»a startery o sekwencje komplementarne do
sklasyfikowano jako wysokiego ryzyka na podstawie analizy
sowaniu fluorescencyjnego barwnika SYBR® Green. nici matrycowej. Wielokrotne powtarzanie tego cyklu pozwala
filogenetycznej. Wyodr´bniono lini´ komórek nowotwo-
na logarytmiczny przyrost produktu reakcji, jakim jest
rowych szyjki macicy zawierajÄ…cÄ… wintegrowane elementy
wybrany fragment DNA wirusowego.
genetyczne tego genotypu. RównieŻ genotypy 26, 53 i 66
Amplifikacja
sklasyfikowano jako wysokiego ryzyka na podstawie analizy
Podczas reakcji amplifikacji para starterów (ONC1 i ONC2)
filogenetycznej. Dane epidemiologiczne takŻe klasyfikują je
Detekcja
hybrydyzuje do specyficznych sekwencji wirusowego DNA
jako onkogenne. Genotypy HPV 70 i 73 są róŻnie klasy-
nast´pujÄ…cych genotypów 16, 18, 31, 33, 35, 52, 58 i 67. Detekcja w reakcji Real-Time PCR odbywa si´ poprzez pomiar
fikowane (w zaleÅ»noĘci od przyj´tego kryterium). Alternatywnie
Detekcj´ umoÅ»liwia wiÄ…zanie si´ barwnika SYBR® Green do poziomu fluorescencji po przyÅ‚Ä…czeniu si´ SYBR® Green do
hybrydyzacja do próbek z biopsji moÅ»e byç przeprowadzona
dwuniciowego DNA powstającego w wyniku reakcji amplifikacji. amplifikowanej podwójnej nici wirusowego DNA. Emisja syg-
w celu wykrycia wirusowego DNA.
Emisja fluorescencyjnego sygnaÅ‚u wskazuje na obecnoĘç naÅ‚u fluorescencyjnego pozwala na detekcj´ DNA wirusa
HPV nie moÅ»e byç hodowany w warunkach in vitro, nie istniejÄ…
wymienionych onkogennych genotypów wirusa HPV. W celu HPV w badanej próbce. W celu iloĘciowej oceny iloĘci wirusa
zatem metody immunologiczne pozwalajÄ…ce na jego detekcj´.
iloĘciowego oszacowania kopii wirusowego DNA w badanej HPV w próbce, musi byç wykonana krzywa standardowa
Wirusowy DNA w przeciwieł
stwie do całych cząstek wirusa
próbce stosuje si´ pochodnÄ… plazmidu pUC zawierajÄ…cÄ… z wykorzystaniem kontrolnego plazmidu znajdujÄ…cego si´
jest obecny we wszystkich warstwach nabłonka. W profi-
sekwencje wirusa HPV jako pozytywnÄ… kontrol´. Plazmid ten w zestawie (PC ONC). Amplifikacja do wyznaczenia krzywej
laktyce i leczeniu raka szyjki macicy wczesna i dokładna
jest równieÅ» uÅ»ywany do wyznaczania krzywej standardowej wzorcowej powinna byç przeprowadzona w taki sam sposób,
diagnostyka jest niezb´dna do wÅ‚aĘciwej terapii pacjentek.
(iloĘç kopii w próbce waha si´ od 500 do 50,000,000). jak w przypadku próbek klinicznych.