Immunologia 13.05
Aglutynacja - zlepianie się komórek przez przeciwciała, antygen na powierzchni komórek
Precypitacja - reakcja antygen-przeciwciało, antygen rozpuszczalny
Precypitacja w środowisku płynnym - pierscieniowa
Prec w środ stałym-immunodyfuzyjnym - pojedyncza, podwójna
Antygen co najmniej 2-wartościowe (2 determinanty antygenowe):
przeciwciało wiąże się z 2 cząst antygeny
struktury siatkowe- w odpowiednich warunkach ulegają wytrąceniu, precypitaty widoczne gołym okiem
ilościowe stężenie pomiedzy antygenem- przeciwciałem - najwięcej 1:1 jest to strefa ekwiwalencji czyi równowagi miedzy antygenem a przeciwciałem
temperatura, pH, stęż soli (fizjolog)
nieporządana jest obecność dopełniacza - trzeba inaktywować dopełniacz (inkubacja w 56stopniach), bo dopełniacz może doprowadzić do rozpuszczenia precypitatu
Odczyny precypitacji:
-odczyny jakościowe - p pierscieiowa - odczyn flokulacyjny
-odczyn ilościowe - immunodyfuzyjna
Surowica odpornościowa - oczyszczony antygen(białko), mieszamy go z aiuwantem i podajemy zwierzęciu, 2 tygodniowe odstępy czasu, pobieramy od królika krew i wyciągamy surowice i już
W testach elisa - monoklinalne - wobec jednej determinanty antygenu
Na dno pprobowki swoista surowica odpornościowa i na to nalewamy roztwór, w którym szukamy antygenu i powstaje pierścień
Odczyn flokulacyjny - kiłę (skętek blady)- antygen kardiolipinowy ; pobieramy krew od pacjenta na surowice, nalewamy na szkiełko krople i dodajemy antygen i mieszamy, jeżeli są przeciwciała powstają kłaczki i oglądamy pod mikroskopem
Odczyn immunodyfuzyjnym - swobodna dyfuzja rozpuszczalnego antygenu i przeciwciała w żelu; w miejscu optymalnych stezen reagentow wytwarza się precypitat
Pojedyncza immunodyf plytkowa:
-surowice odpornosciową miesza się z zelem i wylewa na płytki petriego
wycinanie zbiorniczków
wypełianie ich roztworem antygenu (surowica, w której chcemy zbadać poziom IgG)
przeciwciało pelni role antygenu
mierzymy średnice pierścieni - im wiekszy pierścień tym wieksze stężenie
potrzebne są próby standardowe - żeby móc porównać pierścień i określić stężenie IgG
Odczyn Manciniego = ilościowe określanie zawartości Ig różnych klas w surowicy
Immunodyfuzja podwójna - dyfunduja oba skladkini wolno, łuki i linie precypitacyjne
Immunoelektroforeza = elektroforeza + immunodyfuzja
1.immunoelektroforeza jakościowa - prosta, zastosowanie w diagnostyce niedoborów odpornościowych
2.immunoelektroforeza ilościowa - rakietowa
brak białka odpornościowego; dodatnia próba dodatnia, przeciwciała przeciwko białku,
I etap - rozdzielanie białek surowicy pacjenta (antygenow ) w polu elektycznym
II etap immunodyfuzja rozdzielonych elektof bialek; dyfunfuja swobodnie we wszystkich kierunkach
Linie precypitacyjne w strefie ekwiwalencji w postaci
III etap - porównujemy ilość łuków z próbą
ilościowa ocena stężenia danego białka surowicy
plutka z agarem zmieszaym z Igs przeciwko poszukiwanego antygenowi
w studzienkach badany plyn ustrojowy - poszukujemy w nim antygenu- poddaje się elektroforezie
rakietka= strefa ekwiwalencji
AGLUTYNACJA
Zlepianie się elementow upostaciowanych (aglutynogenow pod wpływem swoistych przeciwciał (aglutynin)
Zastosowanie:
-agl limfocytow - określanie antygenów zgodności tkankowej
-agl bakterii - diagnostyka mikrobiologiczna
-agl erytrocytow - grupy krwi
Aglutynogeny:
1.kom-noszące na swojej powierzchni naturalny antygen
2.sztuczne nośniki antygenu - niosace antygen obcy uprzednio opłaszczony na ich powierzchni
IgM - 10 wartosciowe, pentamery
IgG - 2 wartościowe
Aglutynacja
1.bezpośrednia - przeciwciała reaguja bezpośrednio z naturalnymi antygenami powierzchniowymi
pośrednia - przeciwciała reaguja z antygenem rozpuszczalnym uprzednio opłaszczonym na nośniku
Aglutynacja H - rzeskowa obłoczkowa u bakterii z antygenem rzęskowym H - delikatna strat - opadające obłoczki
Aglutynacja O -zwarte grudki opadające na dno probówki
Aglutynacja Vi - związana z obecnościa antygenu powierzch Vi (endotoksyna) - zbite aglutynanty
Odczyn Widala - wykrywanie aglutynin przeciwko paleczkom Salmonella w surowicy chorych
Badanie wykonuje się kilkukrotie by uchwycic narastanie miana przeciwciał
Szereg rozcieńczeń surowicy od pacjenta, do każdej probowki dodajemy 2 krople zawiesiny salmonelli i odstawiamy na 2 -3 godziny,
Miano - odwrotność największego rozcieńczenia przeciwciał, w której jeszcze dochodzi do reakcji
Aglutynacja pośrednia - hemaglutynacja, odczyn lateksowy
1hemaglutynacja - erytrocyty ludzkie O RH- lub baranie; uprzednio opłaszczonych danym antygenem rozpuszczalnym swoiste przeciwciała to hemaglutyniny
jeden z najbardziej czułych odczynw di wykrywania w badanym marale przeciwciał
Hemaglutynacja - wykrywanie przeciwciał przeciwko antygenom rozpuszczalnym
Układy grupowe
U człowieka 29, oznaczamy tylko 2, bo antygeny tych układów SA najbardziej antygenie
Na wszystkich są ABO z wyjątkiem neuronów
Moja transportowac czasteczki przez błony
ABO - polisacharydy
Lektyny - białka wiążące się z cukrami
Przeciwciała IgM powoduja aglutynacje krwinek
Oznaczanie pogrup A1 i A2; do tego służa lektyny rośliny
Nasiona zawieraja fitoaglutyniny, w przeciwieństwie do swoistych Igs nie wywołują
ABO - występują w osoczu przeciwciała alloaglutyniny = izoaglutyniny - pomimo braku wcześniej immunizacji
To przeciwciała naturalne zwykle klasy IgM i nie przechodza przez łożysko
Układ Rh - antygen D
IgG może przechodzić przez łożysko, aktywuja dopełniacz droga klasyczna
Próba krzyżowa
-krew dawcy i biorcy pobrać surowicę
-krew dawcy i biorcy pobrać na antykoagulant
-krwinki przemyć r-r NaCl, 3-4% zawiesina erytrocytów
1.kropla surowicy biorcy + kropla krwinek dawcy = wykrywanie alloprzeciwciał u biorcy
2. kropla surowicy dawcy + kropla krwinek biorcy = próba dodatkowa - miejsze znaczenie gdyż steżenie Igs w surowicy dawcy ulega natychmiastowemu rozcieczeniu po przetoczeniu i zwykle nie powoduje klinicznych skutków
Kropla surowicy biorcy + kropla krwinek biorcy - autokontrola
Próba jest zgodna jeśli nigdzie nie wystąpiła aglutynacja ani hemoliza
Rulonizacja - układanie się krwinek w rulony , znika po dodaniu NaCl