1. ELISA sandwich.

Jest to technika immunoenzymatyczna. Metoda wykorzystuje enzym jako znacznik. Jest metodą II generacji. Heterogenna. Zasada metody polega na dwóch etapach:

I: reakcja Ab-Ag

II: wykrywanie kompleksów immunologicznych powstałych w etapie I poprzez reakcje enzymatyczną

W etapie I jeden ze składników ulega wcześniejszemu związaniu z fazą stałą np. z powierzchnią polistyrenową płytki serologicznej.

W etapie II produkt jest barwny, oznaczamy go metodami spektrofotometrycznymi. Metody te charakteryzują się wysoką czułością i brakiem stosowania pierwiastków promieniotwórczych.

Technika Sandwich - metoda bezpośrednia - wykrywanie antygenu, nie używamy surowicy antyglobulinowej.

Przeciwciała przeciwko Ab ulegają zaadsorbowaniu na powierzchni polistyrenowej płytki serologicznej. Po dodaniu próbki zawierającej antygeny powstaje kompleks. Wykrywa się go za pomocą przeciwciała skierowanego przeciwko poszukiwanemu antygenowy, które sprzężone jest z enzymem. Dodajemy substrat i związek chromogenny(?) / Nie mam pojęcia co to w ogóle jest i czemu tutaj /

Technika Sadwich - metoda pośrednia - wykrywanie antygenu, używamy surowicy antyglobulinowej.

w odróżnieniu od metod omówionych powyżej, enzym jest sprzężony z tzw. II przeciwciałem, którym jest surowica antyglobulinowa uzyskana w wysniku immunizacji zwierzęcia. Surowica antyglobulinowa wykrywa wszystkie przeciwciała, bez względu na to przeciwko jakiemu antygenowi są skierowane. Dodajemy substrat + zw. chromogenny

 

2. Awidność (w jakim celu się bada i jak)

Badanie awidności przeciwciał używane jest w serodiagnostyce toksoplazmozy. Test ten pozwala na ustalenie fazy zarażenia na podstawie oznaczenia siły wiązania przeciwciał IgG i /IgM - kazała chyba tylko IgG/ z antygenami pasożyta. Badanie polega na przemyciu badanego materiału buforem zawierającym mocznik. We wczesnej fazie mocznik rozrywa kompleksy Ag-Ab. Po pewnym czasie przeciwciała zyskują wysoką awidność i ich wiązania są odporne na działanie mocznika.

/Jest to badanie referencyjne, wykonujemy je dopiero po stwierdzeniu wysokiego stężenia IgG i IgG dla toksoplazmy./

Wysoka awidność igG świadczy o fazie przewlekłej zarażenia, gdy cysty pasożyta znajdują się już w tkankach gospodarza.

Niska awidność świadczy o aktywnej toskoplazmozie

 

3. PAP APAAP (jak i co tym wykryć)

Wykrywamy antygen.

Do badanej próbki dodajemy swoistych przeciwciał

W drugim etapie dodajemy nieznakowanych przeciwciał reakgujących z przeciwciałem pierwotnym oraz kompleksem enzym - antyenzym

Dodajemy Ab znakowanych enzymem peroksydaza-antyperoksydaza lub fosfataza alkaliczna-antyfosfataza alkaliczna.

Dodajemy H2O2 i związek chromogenny

Odczytujemy wynik reakcji. Wynik dodatni dla PAP - kolor brązowy po reakcji, dla APAAP - kolor czerwony po reakcji

 

4. BIOCHIP

Wycinki tkanek, hodowle komórek lub rozmazy bakterii są umieszczane na płytkach szklanych, które są dzielone na milimetrowej wielkości fragmenty (BIOCHIP'y). Na płytkach zaadsorbowane są antygeny (?). Płytki są przyklejane automatycznie do szkiełek mikroskopowych. Technologię tą można wykorzystać do wykrywania w jednej próbce przeciwciał przeciwko kilku antygenom.

 

5. Biotyna - Awidyna

W metodzie tej wykorzystuje się wysokie powinowactwo biotyny do awidyny.

Do badanej próbki dodajemy przeciwcial znakowanych biotyną swoistych dla poszukiwanego antygenu. Dodajemy awidyny (lub streptawidyny) znakowanej fluorescencyjnie. Biotyna i awidyna łączą się w większe kompleksy uwidaczniające reakcję.