SPRAWOZDANIE (z dn. 29.11.2012)
„OBSERWACJA ZMIAN USTROJOWYCH U KRÓLIKA PO PODANIU LPS”
1. Cel eksperymentu: obserwacja zmian ustrojowych u królika po podaniu LPS (*wstrzyknięcie badanego roztworu królikowi jest biologiczną metodą badania apirogenności leków i substancji podawanych drogą pozajelitową, jeśli suma zmian temperatur u 3 badanych królików nie przekracza 1,15°C, wtedy substancję możemy uznać za apirogenną i bezpieczną do podawania).
2. Opis postępowania:
A. grupa z godz. „0” dokonała pomiaru poszczególnych parametrów ustrojowych przed
podaniem LPS, a następnie podała królikowi LPS,
B. grupa z godz. „1” (tj. ok. 2 godz. 20 min po podaniu LPS) dokonała ponownie pomiarów:
* temperatura wewnętrzna ciała: mierzona termometrem elektronicznym w odbytnicy,
* liczba oddechów: przez obserwację ruchów klatki piersiowej i brzucha,
* pobranie krwi (z żyły brzeżnej ucha) do dalszych badań:
- wywołanie przekrwienia przez pocieranie kompresem nasączonym alkoholem w celu
lepszego uwidocznienia żyły do wkłucia,
- pobranie ok. 0,5 ml krwi do probówki z EDTA w celu uniknięcia pozaustrojowego
krzepnięcia krwi,
* LEUKOGRAM:
- kroplę krwi umieszczamy na szkiełku podstawowym,
- przy użyciu drugiego szkiełka wykonujemy rozmaz krwi,
- wyschnięcie preparatu,
- utrwalenie preparatu w alkoholu,
- barwienie preparatu,
- liczenie leukocytów z podziałem na populacje: heterofile, limfocyty, eozynofile, bazofile,
monocyty,
- procentowe przeliczenie poszczególnych populacji na liczbę wszystkich policzonych
krwinek,
* badanie poziomu glukozy za pomocą glukometru elektronicznego,
* badanie hematologiczne: leukocyty, hematokryt (maszynowo i ręcznie), białko całkowite.
C. grupa z godz. „2” (tj. ok. 4 godz. 40 min po podaniu LPS) – j.w.
3. Otrzymane wyniki:
| Parametr | Wartość wyjściowa godz. „0” | Wartość pomiaru godz. „1” | Wartość pomiaru godz. „2” |
|---|---|---|---|
| Temperatura wewnętrzna ciała | 38,83°C | 40,6°C | 38,84°C |
| Liczba oddechów | 110/min | 90/min | 80/min |
| Leukocyty | 11 500 | 6 600 | 13 400 |
| Ht | maszynowy | 41% | 39,1% |
| ręczny | 53% | 65,7% | |
| Białko całkowite | 8,2 g/dl | 8,4 g/dl | 7,6 g/dl |
| Glukoza | 120 mg/dl | 106 mg/dl | 130 mg/dl |
| Uwagi | przed podaniem LPS | ok. 2 godz. 20 min. po podaniu LPS |
ok. 4 godz. 40 min. po podaniu LPS |
4. Opis otrzymanych wyników
gr. „0” – wyniki zawierające się w normach fizjologicznych dla królika
* liczba oddechów: 110/min – zwiększona liczba oddechów (norma fizjologiczna to 60-70
oddechów / min),
gr. „1”
* objawy kliniczne:
- wyczuwalna gorączka (podwyższona ciepłota uszu),
- spadek liczby oddechów,
* temperatura: 40,6 °C – średnia gorączka,
* liczba oddechów: 90/min – spadek liczby oddechów,
* leukocyty:
- bezwzględna liczba leukocytów: 6 600 – spadek liczby leukocytów,
- limfocyty: 33% - spadek liczby limfocytów,
- neutrofile (heterofile): 61,5% - wzrost liczby neutrofili,
- eozynofile: 1,5% - spadek liczby eozynofili,
* hematokryt: 39,1% - poniżej normy (42%),
* białko całkowite: 8,4 g/dl – wzrost poziomu białka,
* glukoza: 106 g/dl – spadek poziomu glukozy we krwi.
gr. „2”
* temperatura: 38,4°C – spadek gorączki,
* liczba oddechów: 80/min – dalszy spadek liczby oddechów,
* leukocyty:
- bezwzględna liczba leukocytów: 13 400 – wzrost liczby leukocytów ponad normę
fizjologiczną,
- limfocyty: 10,66% - dalszy spadek liczby leukocytów,
- neutrofile (heterofile): 85% - dalszy wzrost liczby neutrofili,
- eozynofile: 0%,
* hematokryt: 37% - dalszy spadek wartości hematokrytu,
* białko całkowite: 7,6 g/dl – spadek poziomu białka,
* glukoza: 130 mg/dl – wzrost poziomu glukozy we krwi.
5. Interpretacja wyników – otrzymane wyniki świadczą o toczącej się reakcji zapalnej
organizmu:
* gorączka:
- szybki wzrost gorączki,
- podobnie jak po zarażeniu bakteriami, które zawierają w ścianie komórkowej LPS,
- LPS jako obce białko powoduje napływ komórek zapalnych, które go sfagocytują oraz
prowadzą do uwolnienia pirogenów egzogennych (głównie interleukiny), które w
podwzgórzu stymulują syntezę neuroprzekaźników, co powoduje przestawienie ośrodka
termoregulacji na wyższy poziom i wywołuje gorączkę,
- spadek gorączki może świadczyć o zneutralizowaniu LPS – organizm wygrał walkę z
„chorobą”,
* neutrofilia - wzrost liczby neutrofili: uwolnienie większej liczby neutrofili z puli szpikowej
do krwi pod wpływem IL-1, IL-6 i TNF (które są mediatorami zapalenia) świadczy o
początku stanu zapalnego, jest to charakterystyczne dla I fazy przebiegu zakażenia
(stanu zapalnego) – tzw. neutrocytarna faza walki,
* limfopenia – spadek liczby limfocytów: migracja limfocytów do narządów chłonnych,
w których mogą rozpoznawać obce antygeny, limfopenia występuje w „fazie ostrej” walki
przy jednoczesnej neutrofilii,
* eozynopenia – spadek liczby eozynofili do 0% jako następstwo uwalniania endogennych
glikokortykostreoidów w wyniku stresu fizycznego i psychicznego spowodowanego
odczynem zapalnym (gorączka, spadek liczby oddechów, prawdopodobnie u królika
występuje złe samopoczucie, objawy bólowe itp.),
* poziom białka całkowitego: podwyższenie poziomu białka świadczy o pojawieniu się w
organizmie jakiegoś antygenu (w tym przypadku LPS), białka krwi są odpowiedzialne za
neutralizację i/lub wiązanie LPS z krwi.
6. Wnioski: dożylne podanie LPS u królika powoduje odczyn zapalny organizmu.