5)

- aglutynacja- liza - po co, wyniki i ich interpretacja

Aglutynacja albo odczyn zlepny – reakcja, w wyniku której antygen (aglutynogen) jest wiązany przez przeciwciało (aglutyniny), co powoduje powstanie dużych, wytrącających się kompleksów. Reakcja aglutynacji może zachodzić in vitro i być stosowana do różnego rodzaju testów diagnostycznych w serologii.

Cel- szybka diagnostyka na obecność w surowicy przeciwciał świadcząca o przebyciu lub toczącym się stanie chorobowym

Wyniki- powstanie zlepów- wynik dodatni, roztwór lub próbka szkiełkowa klarowna- wynik ujemny Powstanie zlepów informuje nas o obecności przeciwciał w surowicy zwierzęcia po dodaniu antygenu diagnostycznego

- czynniki zjadliwości Clostridium

Produkuje: egzotoksyny- neurotoksyna, neurotoksyna, toksyny letalne

-enzymy- proteazy, kolagenozy, lecytynazy

- podłoże Chapmana, Levisa, Wilson-Blaira

Chapmana– jest to pożywka typu wybiórczo-różnicującego stosowana do hodowli gronkowców. Wykorzystuje się w niej fakt, że (gronkowce są w stanie rosnąć przy wysokim stężeniu chlorku sodu, w przeciwieństwie do większości pozostałych bakterii. Poza czynnikami wzrostu (bulion, pepton) agar zawiera również NaCl (zazwyczaj w stężeniu 7,5% dla zahamowania wzrostu bakterii innych niż gronkowce), mannitol oraz czerwień fenolową.

Pożywka Levine'a– rodzaj podłoża wybiórczo-różnicującego.Czynnikami wybiórczymi są eozyna Y oraz błękit bromofenolowy (pełni również rolę indykatora pH). Czynnikami różnicującymi są laktoza i sacharoza.

Drobnoustroje fermentujące laktozę i sacharozę tworzą na tym podłożu kolonie zabarwione na kolor fioletowy. Bakterie nie fermentujące laktozy lub fermentujące ją z opóźnieniem tworzą kolonie przejrzyste lub nieco opalizujące.

Podłoże Wilson-Blaira II przeznaczone jest do izolacji i wykrywania beztlenowych bakterii przetrwalnikujących, redukujących siarczany, szczególnie z rodzaju Clostridium w badanym materiale.

Chlorek żelaza (III), wodorotlenek sodu, siarczan (IV) sodu

- jakie bakterie mogą bytować w mleku?

E.coli, Staphylococcus, Streptococcus. Brucella

- wąglik - mikroskopia i morfologia

Zmienna morfologia

- bezpośrednio z materiału chorobowego- krótkie łańcuszki (pędy bambusa), obecna otoczka wspólna dla kilku komórek;

- ze sztucznych podłóż- długie nici, bez otoczki; na podłożu z penicyliną powstają sferoplasty- ‘sznur pereł’, częściowo tracą ścianę komórkową, bardziej okrągłe.

6)

-schorzenia wywołane E.coli + ich charakterystyka

1) zatrucia pokarmowe / zakażenia jelitowe przebiegające z biegunką;

2) zakażenia pozajelitowe- zakażenia posocznicowe u zwierząt i ludzi (colisepticaemia); zakażenia układu moczowego- nerek, miedniczek nerkowych, pęcherze, cewki; kulawki u młodych cieląt i źrebiąt- stawy i nerki; syndrom MMA u świń (Mastitis, Metritis, Agalactia)- zapalenie wymienia, macicy i bezmleczność [colimastitis- zapalenie wymienia spowodowane przez bakterie coli];

Objawy chorobowe wynikają z nadmiernego gromadzenia się, ale też z toksemii- wydzielane dużo egzotoksyn (choroba obrzękowa prosiąt); też neurotoksyny powodujące zapalenie opon móżgowych u noworodków prosiąt.

0157 H7- szczep powodujący enterokrwotoczne zapalenie jelit; zyskał chorobotwórczość od Shigelli, biegunka krwotoczna, uszkodzenie nerek

3) człowiek- biegunki u dzieci, biegunka podróżnika, zakażenia dróg moczowych, głownie u kobiet, główna przyczyna zgonu po pęknięciu wyrostka.

Szczepy ze względu na mechanizm działania:

ETEC- enterotoksyczne, EPEC- enteropatogenne, EHEC- enterokrwotoczne, EIEC- enteroinwazyjne, ETEEC- enterotoksemiczne, UPEC- uropatogenne i inne.

-z jakich materiałów pobieramy próbki przy wągliku i dlaczego

Materiał: najwyższa ostrożność przy pobieraniu (kombinezon, komory laminarne- rękawy, do których wkłada się ręce), odstąpienie od sekcji zwłok, ew. uproszczone nacięcie żeby odsłonić śledzionę.

Krew- do naczyń albo nasączamy np. gąbkę, bibułę; rozmazy na szkiełkach, utrwalenie termiczne.

Fragment skóry, ucha, ogona.

Wycinek śledziony, jeśli zwłoki nacinano.

Wymazy ze zmian skórnych (człowiek).

Mączki kostne, wełna, sierść, skóry, również garbowane, gleba.

A czemu? Może dlatego ze w kontakcie z powietrzem i przy temperaturze ok. 32 stopni wytwarza przetrwalniki (ręki sobie uciąć nie dam)

-antytoksyna i jej zastosowanie

Antytoksyna (pot. surowica) - preparat leczniczy zawierający swoiste przeciwciała skierowane przeciwko egzotoksynom wytwarzanym przez niektóre drobnoustroje (np. laseczkę tężca) lub zawartymi w jadach węży. Stosuję się w przypadku podejrzenia zatrucia toksyną dowolnego mikroorganizmu, np. w przypadku podejrzenia zatrucia jadem kiełbasianym (toksyną botulinową), toksyną tężcową.

-OKAP- przebieg, zastosowanie, interpretacja wyników

Zastosowanie-skrining stad. OKAP to szybki test terenowy- odczyn kwaśnej aglutynacji płytowej, używany w celu identyfikacji przeciwciał przeciwko bakteriom z rodzaju Brucella. szybka próba jakościowa, mówi nam tylko czy są przeciwciała (+, kłaczki) czy nie ma (-); niskie pH= 3,65; sztuki, które dały (-)à zdrowe;

Przebieg-występowanie kolorowych kłaczków po dodaniu antygenu diagnostycznego do surowicy zwierzęcia.

Wynik dodatnià ich surowice do badań lab. Oznaczenie miana surowicy. Testy ilościowe: OWD i OA probówkowej. Jeśli wynik obydwu dodatni- sztuka do uboju.

Jeśli obydwu ujemny- sztuka zdrowa.

Jeśli odczyn wątpliwy- badanie powtarzamy po 3 tyg., znowu OWD i OA. Jak po 3 tyg. znowu niepewne- test Coombsa (odczyn antyglobulinowy)- do poszukiwania pc niekompletnych;

-obserwacja leptospir w ciemnym polu widzenia

obserwacja żywych preparatów w ciemnym polu widzenia (odmiana mikroskopu jasnego pola, umożliwia oglądanie struktur nieprzezroczystych np. bakterii gdyż świetnie kontrastują one z ciemnym polem obserwacji – brak potrzeby utrwalania i wybarwiania drobnoustrojów). Na mikroskop świetlny nakładamy kondensor do obserwacji w ciemnym polu widzenia,na szkiełko nakładamy kroplę płynnej hodowli bakterii, Barwienie tylko tuszem, przykrywamy szkiełkiem nakrywkowym, kropla wody pomiedzy kondensorem (kondensor uzyskuje pełną immersję wodną?) a szkielkiem, obserwacja w ciemnym polu.

11.

- modyfikacja Ziehl – Neelsena

modyfikacje stosuje się dla bakterii Brucella Abortus, bez modyfikacji dla bakterii kwasoopornych np. Dla prątka gruźlicy.

Etapy:

1- utrwalanie termiczne

2- dodanie fuksyny karbolowej (3 min)

3- odbarwia się preparat 0,5% kwasem octowym

4- dobarwiamy błękitem metylenowym przez 2 minuty

Brucele pozostają czerwone!

E. coli - podłoża, morfologia itp.

Morfologia:

pałeczka G-, średniej wielkości

urzęsiona

posiada otoczkę

może wytwarzać fimbrię(jedna może przekazać mat.genetyczny drugiej)

Podłoża

na agarze z krwią

podłoża słabo wybiórcze z laktozą( Mc.Conkeya, Levina, Endo)

podłoża chromogenne- Chromocoult,Fluorocoult,TBX) tylko E.coli w 44 C rozkłada laktozę i daje niebieskie kolonie.

co to znaczy, że drobnoustrój jest warunkowo chorobotwórczy?

Drobnoustrój normalnie występuje we florze jelitowej, ale przy sprzyjających warunkach np.przy immunosupresji staje się patogenny.

Pasterella - co się bada (?)

Tok postępowania rozpoznawczego:

Materiał: krew,wycinki narządów(śledziona,wątroba,serce, płuca) Tylko w materiale od pacjenta posiada charakterystyczną otoczkę- główny czynnik zjadliwości.

clostridium perfringens

Gatunek chorobotwórczy jest jedną z laseczek zgorzeli gazowej, powoduje zgorzel gazową oraz enterotoksemie. Jest szczególnie groźna dla przeżuwaczy. Można wyróżnić 5 serotypów (od A do E) egzotoksyn. Typ A – odpowiada za zakażenia egzogenne, zmiany matwicze w tkance podskórnej i mięśni z wytworzeniem gazu- zgorzel gazowa – konieczne chirurgiczne opracowanie zmian

Typ B-E -odpowiedzialny za enterotoksemie, dyzenterie, choroba miękkiej nerki.

12.

Salmonella - hodowla itp.

Morfologia:

pałeczka G-,średniej wielkości

-urzęsiona, z wyjątkiem S.gallinarum i pulorum- patogeny drobiu są nagie

-brak otoczki

Właściwości hodowlane:

-nie daje śluzowych kolonii

nie jest wrażliwa na żółć i selenian sodu

dodatek tryptofanu wzmaga wzrost

Właściwości biochem;

indol, laktoza, mocznik -

podłoże Klieglera: słupek żółty(glukoza), skos różowy, czarny H2S

Clostridium botulinum - powinowactwo do narządów, wikłanie infekcji

Cl.botulinum jest nieinwazyjna,jej działanie chorobotwórcze za sprawą toksyny botuliny- ciepłowrażliwa, jest neurotoksyną. U ludzi powoduje porażenie wiotkie, zakażenie zstępujące –atakuje najpierw nn.czaszkowe- blokuje uwalnianie acetylocholiny w synapsach w płytce nerwowej- mięśnie są cały czas rozluźnione.

Następstwa: Zaburzenia widzenia,mowy, ślinotok, możliwość uduszenia lub zatrzymania akcji serca.

camp - po co, wyniki i ich interpretacja – tego nie mam.

- co to znaczy pasożyty warunkowo wewnątrzkomórkowe – pasożyt taki może żyć poza śroowiskiem zewnątrzkomórkowym np.na agarze. Wirusy są bezwględnymi pasożytami wewnątrzkomórkowymi.

podłoże Baird - Parkera, Wrzoska, tryptofan z peptonem (?)

podłoże Wrzoska- podłoże wzbogacone- zawiera bulion,kawałki wątroby, zalewane parafiną – do hodowli beztlenowców

podłoże tryptofan z peptonem- wykorzystywane do zdolności rozkładania tryptofanu do indolu. Po odpowiednim czasie inkubacji dodaje się do podłoża kilka kropli odczynnika Kovacsa i wstząsa próbowką. Obecność indolu w górnej warstwie – wiśniowy pierścień. Jeśli badane drobnoustroje nie wytwarzają indolu-pierścienia nie ma.

podłoże Baird – Parkera – używane do hodowli gronkowców. Zawiera chlorek litu żeby zapobiec wzrostowi innych bakterii, posiada jeszcze glicyne i pirogronian dla łatwiejszego wzrostu gronkowców. Kolonie gronkowca są czarne, wokół koloni przejaśnienia (to jest z neta)

13)

- clostridium tetani - morfologia itp.

- smukła, przetrwalniki terminalnie, pałeczka dobosza;

-w przewodzie pokarmowym koni i glebie;

- nieinwazyjna, wnika do rany (warunki beztlenowe);

- 2 egzotoksyny- tetanolizyna, tetanospasmina- działanie chorobotwórcze, porażenie spastyczne, powinowactwo do rdzenia kręgowego i nn; działa na płytkę ruchową blokując hamowanie synaptyczne- silny, ciągły skurcz, bardzo napięte mięśnie.

Chorobotwórczość:

- u człowieka możliwy tężec miejscowy lub obejmujący mm. głowy;

- tężec uogólniony (wstępujący lub zstępujący)- najczęściej; - najwrażliwsze konie- postawione uszy, głowa do tyłu, wytrzeszcz oczu, wypada III powieka, silny szczękościsk, odsłonięte zęby (u człowieka tzw. uśmiech sardoniczny), kręgosłup ku dołowi, rozstawione kończyny, postawiony ogon; śmierć przez uduszenie- blokada przepony, mięśni międzyżebrowych.

Natychmiast podać surowicę przeciwtężcową.

Leczenie: opracowanie chirurgiczne, antytoksyna, anatoksyna, penicylina, leczenie podtrzymujące. Spokój, cisza, zasłonięte okna, leki uspokajające, zwiotczające mięśnie.

Surowica!

Profilaktyka: szczepienia (anatoksyna)- ludzie, konie; zapobiegawczo- antytoksyna.

- zmodyfikowana metoda Loefflera

Loeffler- normalnie utrwala się preparat termicznie, w zmodyfikowanej metodzie następuje utrwalanie alkoholem metylenowym na 5 min, pozniej barwi się błękitem metylenowym przez 10 min

- Staphylococcus aureus - podłoża, hodowla, czynniki wybiórczo – różnicujące

Posiew na agar z krwią- zwracamy uwagę na barwę kolonii i obecność hemolizy.

Posiew na agar zwykły- żółta barwa kolonii- gronkowiec złocisty, biała- gronkowiec biały.

Posiew na podłoże Chapmana- wybiórczo- różnicujące dla gronkowców; czynnik wybiórczy- dodatek 10% NaCl, będą się rozwijały tylko gronkowce. Czynnik różnicujący- mannitol. Pozwala odróżnić gronkowca złocistego od białego. Mannitol jest rozkładany przez gronkowca złocistego (podłoże zmienia barwę na żółtą).

Podłoże Bard Parkera- gronkowce złociste tworzą czarne kolonie (też obserwowana zdolność wytwarzania fosfolipazy- wokół kolonii tworzy się strefa przejaśnienia).

Test na koagulazę- do plazmy króliczej posiewamy gronkowca i po kilku godzinnej inkubacji- jeśli gronkowiec jest dodatni- następuje ścięcie plazmy.

Test lateksowy- test na zdolność wytwarzania czynnika clumping factor. Na cząsteczce lateksu zaadsorbowane są przeciwciała z fr. Fc i fibrynogen. Jeśli to gronkowiec to jego białko A wiąże się z fr. Fc przeciwciała. Wydzielając clumping factor ścina fibrynogen- obraz aglutynacji (wykłaczanie).

- które bakterie wytwarzają egzotoksyny?

Bakt z rodzaju: Escherichia , Salmonella, Staphylococcus, BACILLUS, Clostridium

- wskaźnik E. coli - co to jest i do czego

Obecność E. coli w wodach powierzchniowych (tzw. miano Coli) jest często stosowanym wskaźnikiem ich zanieczyszczenia. Bakterie E. coli mogą kolonizować skórę i błony śluzowe jamy ustnej oraz układu oddechowego. E. coli w badaniach sanitarnych: żywność i woda- miano coli oznaczane metodą fermentacyjno- probówkową , wskaźnik coli oznaczany metodą filtrów membranowych.

3)

1. co to MRSA

MRSA (ang. methicyllin-resistant Staphylococcus aureus)[1], gronkowiec złocisty oporny na metycylinę – lekooporne szczepy gronkowca będące częstą przyczyną zakażeń wewnątrzszpitalnych oraz stanowiące poważny problem finansowy dla służby zdrowia[2]. Wykształcony przez drobnoustroje typ oporności oznacza brak wrażliwości na wszystkie antybiotyki z grupy beta-laktamów – w tym penicyliny, cefalosporyny, monobaktamy czy karbapenemy. Szczepy MRSA są jedynymi bakteriami Gram-dodatnimi, na które nie działają karbapenemy.

Oporność nie polega na syntezie enzymów rozkładających lek, ale nowego białka wiążącego antybiotyk – tzw. PBP. Zmienione białko PBP nie wykazuje powinowactwa do beta-laktamu. Opisano pięć genów syntetyzujących różne nowe białka PBP, dlatego ten typ oporności charakteryzuje się heterogennością. Szczepy MRSA są oporne na wszystkie antybiotyki ß-laktamowe, a w 90% występuje ponadto krzyżowa oporność z makrolidami oraz fluorochinolonami. Jeżeli bakteria jest częściowo oporna na tę grupę antybiotyków, ale można je leczyć podając maksymalne dawki, używa się terminu MISA.

(takich informacji na temat MRSA udziela net- ile z tych informacji jest dobrych/przydatnych do udzielenia pełnej odpowiedzi? – nie wiem)

2. co to jest enterotoksemia? jaka bakteria ja wywołuje?

Enterotoksemia jest ostrą chorobą wywoływaną przez toksyny bakteryjne (Clostridium perfringens typ D). Choroba najczęściej dotyczy　zwierząt utrzymywanych w dobrych warunkach　i dobrze żywionych. W stadzie zachorowania dochodzą do 10%, ale śmiertelność jest bardzo wysoka.

U młodych zwierząt choroba przebiega bardzo szybko, zwierzęta padają nagle lub w ciągu kilku godzin. Objawy mogą ograniczyć się do utraty apetytu, objawów nerwowych, podniecenia lub apatii. W przypadku gdy choroba ma dłuższy przebieg, towarzyszy　jej biegunka, ślinotok,　zaburzenia koordynacji ruchów, anemia, występowanie cukru w moczu.　Enteretoksemia u kóz może mieć postać chroniczną

Typy B- E- enterotoksemie, dyzenterie, choroby miękkiej nerki;

- laseczki w jelicie grubym- nadmierne namnażanie- zakażenie endogenne (błędy żywieniowe);

- możliwe egzogenne- pasza, woda zanieczyszczona kałem.

3. paciorkowce ropotwórcze- czynniki zjadliwości

- otoczka zbudowana z kwasu hialuronowego, identycznego z kwasami hialuronowymi organizmu (paciorkowce niewidoczne dla układu immunologicznego);

- powierzchniowe białko M- właściwości antyfagocytarne; cytotoksycznie na neutrofile; właściwości immunogenne;

- wydziela hemolizyny, tzw. streptolizyna O; streptolizyna S nie ma właściwości immunogennych;

- toksyna erytrogenna- odpowiada za wysypkę przy płonicy ( wytwarzana przez paciorkowca beta- hemolizującego z grupy A wg Lancefield); podwyższone ASO;

- szereg enzymów: hialuronidaza, nukleazy (streptodornaza, DNA-aza), proteinazy.

4. streptococcus pneumonis - morfologia i mikroskopia

Morfologia Dwoinki zapalenia płuc:

- G+, układają się w dwoinki lub łańcuszki

- komórki potomne zostają obok siebie

- ma kształt kulisty lub zbliżony do kuli, średnicę około 1µm i jest zaliczana do ziarniaków. Bakterie układają się zazwyczaj w pary, a kolonie mogą przyjmować obraz łańcuszków różnej długości.

- nie wytwarza przetrwalników, ale posiada otoczkę zarówno podczas infekcji w organizmie, jak i na podłożach hodowlanych. Szczepy przechodzą w formy bezotoczkowe (forma R) w niesprzyjających warunkach, jednak po przeniesieniu do sprzyjającego środowiska ponownie wytwarzają otoczkę (forma S). Opisywane są również formy przejściowe – RS, SR.

Mikroskopia:

- Rozróżnienie pneumokoków od pozostałych bakterii z rodzaju Streptococcus jest możliwe dzięki dwóm próbom. Pierwsza z nich polega na próbie rozpuszczeniu drobnoustroju w żółci – pneumokoki w przeciwieństwie do innych bakterii ulegają rozpuszczeniu, co objawia się przejaśnieniem płynu w ciągu 10–40 minut.

- Druga próba polega na dodaniu do hodowli optochiny. Hamuje ona wzrost dwoinki zapalenia płuc, nie wpływając na pozostałe bakterie.

- Pneumokoki, w odróżnieniu od enterokoków nie rosną przy podwyższonym stężeniu chlorku sodu lub przy pH 9,5. Są oporne na bacytracynę, co odróżnia je od Streptococcus pyogenes.

5. salmonella - serologia

Identyfikacja serologiczna

Schemat Kaufmanna- White’a: różnice w antygenach somatycznych O były podstawą do podziału na grupy serologiczne (65 grup) najpierw A-Z, później 0,51- 0,67. Przy podziale bierzemy pod uwagę różnice w budowie antygenów rzęskowych oraz antygen wirulencji Vi.

Salmonelle identyfikujemy w odczynie aglutynacji szkiełkowej. Na szkiełko podstawowe dajemy kroplę surowicy oznaczoną literkami HM (multi H), która ma przeciwciała dla wszystkich typów antygenów rzęskowych, jest surowicą jakichkolwiek Salmonelli rzęsa tych .

Jeśli nic się nie wytrąci, kropla mętnaà wynik ujemny.

Jeśli to Salmonella pullorum albo gallinarum to roztwór staje się klarowny, wynik + .

Jeśli aglutynacja dodatnia to Salmonella urzęsiona- czyli z każdej innej grupy. Trzeba wykonać kolejne aglutynacje z surowicami grupowymi AO, CO, BO, EO.

[np. z surowicą H-M wyszła aglutynacja dodatnia- wiemy od razu że urzęsiona; dodajemy surowicę BO- r-r jednolicie mętny, mleczny, czyli wynik ujemny; próbujemy surowicę DO – wyszła aglutynacja dodatnia, czyli jest to Salmonella z grupy D- sprawdzamy w tablicach White’a Kauffmanna- S. enteritidis].

W przypadku ujemnego wyniku z surowicami grupowymi dla grup AO, BO, CO, DO i EO wykonuje się odczyn z surowicą Vi.

4)

1. chorobotwórczość wąglika

· Chorobotwórczość:

Czynnik zjadliwości- inwazyjna i toksyczna; otoczka (kwas D- Glu), egzotoksyny (letalna i powodująca obrzęki u chorego);

Najwrażliwsze są przeżuwacze i inne roślinożerne. Ptaki oporne.

Przeżuwacze:

- posocznica, przebieg nadostry do podostrego, zawsze kończy się śmiercią;

b. wysoka temperatura ciała, trudności w oddychaniu, obrzęki tkanek, zwł. w okolicy szyi;

szybka śmierć, charakterystyczny wygląd zwłok (nie otwiera się zwłok, bo w warunkach beztlenowych powstają przetrwalniki);

wzdęte zwłoki, bo obrzęk narządów wewn., tkanki podskórnej, obrzęknięta, rozmiękła śledziona, czerwono- czarna, gęsta smołowata krew na przekroju śledziony; ze wszystkich otworów ciała wycieka gęsta, ciemna, lakowata, nie krzepnąca na powietrzu krew.

Świnie:

Możliwy przebieg przewlekły, często angina wąglikowa- gardło, krtań, silny obrzęk.

Człowiek- 3 postacie:

- miejscowa, skórna -> karkunbuł, czarna krosta- miejscowa martwica, bardzo silny obrzęk tkanek wokół;

- jelitowa- najrzadsza, przetrwalniki dostały się do przewodu pokarmowego- wymioty, biegunka krwawa, nieleczona- zawsze śmierć;

- płucna- choroba gałganiarzy, krwotoczno- martwicowe zapalenie śródpiersia, zapalenie opon mózgowych; przetrwalniki dostały się drogą oddechową.

2. zakażenia endogenne

zakażenie endogenne (samozakażenie, autoinfekcja) – zakażenie wywołane przez florę rezydentną (bytującą w organizmie człowieka); większość z nich to zakażenia oportunistyczne

Clostridium perfringens typy B- E- enterotoksemie, dyzenterie, choroby miękkiej nerki;

- laseczki w jelicie grubym- nadmierne namnażanie- zakażenie endogenne (błędy żywieniowe);

- możliwe egzogenne- pasza, woda zanieczyszczona kałem.

3. miano E. coli - co to i po co?

E. coli w badaniach sanitarnych: żywność i woda- miano coli oznaczane metodą fermentacyjno- probówkową , wskaźnik coli oznaczany metodą filtrów membranowych.

§ Obecność E. Coli w wodzie lub żywności świadczy o zanieczyszczeniu ich kałem. Dla oznaczenia zawartości E. Coli w tych materiałach wykonuje się miano coli.

4. morfologia i identyfikacja Leptospir

Rodzaj: Leptospira (leptus- cienki, spira- sprężyna)

Morfologia:

- ich rozmiary poprzeczne tak małe, że niewidoczne pod zwykłym mikroskopem w jasnym polu widzenia; b. długie, ale mała średnica, więc specjalne met. obserwacji;

- 2 gatunki: L. biflexa (wolnożyjące) i interrogans (chorobotwórcze).

Bad. serologiczne:

- OA z formalizowanym antygenem;

- odczyn aglutynacji- lizy z żywym antygenem- ilościowy (do wyznaczenia miana surowicy),

kilka szkiełek, na każde krople kolejnego rozcieńczenia surowicy, do każdego taką samą ilość żywych leptospiry, inkubacja 2h, obserwacja pod mikroskopem (jak są pc- aglutynacja z częściową lizą)

(+)- odczyn u ludzi > 1:200, u zwierząt >1:400;

- IF.

5. piątego pytania ktoś nie zapamiętał

9).

1. Metody hodowlane Brucella – warunki, podłoża itp.

- trudna hodowla, wolny wzrost (5-7 dni, do 15);

- warunki tlenowe lub mikroaerofilne (5-10 % CO2);

- podoża wzbogacone, Br. agar, Br broth, ew. TSA;

- niewrażliwe na fiolet krystaliczny, zieleń malachitową (barwniki) i chemioterapeutyki- bacytracynę, aktidion, polimyksynę B;

- fazy S, R. Morfologia zmienna w zal od wieku hodowli.

2. Schemat Kaufmana-White’a – schemat podziału pałeczek Salmonella na gatunki, podgatunki oraz typy serologiczne: różnice w antygenach somatycznych (O) i rzęskowych (H) były podstawą do podziału na grupy serologiczne (65 grup); najpierw A-Z, później 0,51- 0,67. Przy podziale bierzemy pod uwagę różnice w budowie antygenów rzęskowych oraz antygen wirulencji Vi.

3. Podłoże Howartha, Kliglera, Chromocult.

- Chromocult - szybkie, proste i wiarygodne metody wykrywania specyficznej aktywności enzymatycznej różnych organizmów, np. Salmonella, E. coli lub bakterii grupy coli, bakterii Enterobacter sakazakii lub Clostridium perfrigens. Chromogenne substraty zawarte w pożywkach Chromocult umożliwiają różnicowanie barwne różnych rodzajów kolonii, a tym samym ich jednoznaczną identyfikację oraz ograniczenie błędów przy określaniu liczby.

- Kligler - to podłoże diagnostyczne dla pałeczek G- o małych wymaganiach, bada zdolność rozkładu glukozy,laktozy i wytwarzanie siarkowodoru, samo w sobie jest czerwone,ale przy rozkładzie laktozy robi się żółte, zawartość glukozy:laktozy = 1:10 + tiosiarczan i jony żelaza.

4. Barwienie (a nie podłoże!) Schaeffer – Fultona.

Służy do barwienia bakterii, a przede wszystkim ich przetrwalników (z rodzaju Bacillus i Clostridium), ich kształtu i rozmieszczenia, ale Mała na ćwiczeniach powiedziała, że przetrwalniki się NIE BARWIĄ, albo bardzo trudno. Sama metoda przebiega tak:

Etapy barwienia

1. Wykonujemy posiew bakterii na szkiełku podstawowym i utrwalamy (najczęściej w płomieniu).

2. Przemywamy zielenią malachitową (barwnik).

3. Ponieważ przetrwalniki mają wiele warstw ochronnych, należy podgrzać preparaty, aby komórki się zabarwiły.

4. Należy podgrzewać preparaty tak długo, aż zaczną one parować, wtedy przetrwalnik rozluźniają swoje otoczki i barwnik może do nich wniknąć.

5. Czekamy aż preparaty wystygną - w czasie tego procesu przetrwalniki zamykają swoje otoczki i barwnik pozostaje wewnątrz.

6. Płuczemy preparaty - zabarwione są tylko przetrwalniki, reszta komórek – nie.

7. Aby zabarwić pozostałą część komórek, używamy safraniny.

5. Sterptococcus pyogenes – opis i choroby.

- występuje jako flora jamy ustnej, skóry,

- zaliczany do ziarniaków,

- nazywany paciorkowcem ropnym

- barwi się dodatnio metodą Grama, ale starsze kolonie łatwo ulegają odbarwieniu stając się G-,

- kształt kulisty i wykazuje tendencje do łączenia się w łańcuszki składające się z kilku(dziesięciu) komórek,

- nie wytwarza rzęsek ani przetrwalników,

- część szczepów ma otoczkę,

- zaliczany do tlenowców lub względnych beztlenowców,

- w przypadku zakwaszenia podłoża ginie stosunkowo szybko,

- jest wrażliwy na środki dezynfekcyjne, nawet w niskich stężeniach,

Właściwości biochemiczne:

- katalazoujemny,

- białko M - chroni przed fagocytozą, działaniem dopełniacza,

- białko F – czynnik adhezyjny, umożliwia kolonizację błony śluzowej,

- białko G – łączy się z FC przeciwciał,

- wielocukier C – antygen podobny do naszego (wsierdzia i stawów),

- enzymy – hialuronidaza, fibro lizyna,

- hemolizyny:

> streptolizyna O – niszczy krwinki białe, makrofagi, ma właściwości antygenowe,

> streptolizyna S

- egzotoksyny:

> erytrogenne – odpowiadają za wysypkę przy szkarlatynie,

> egzotoksyny A (zespół wstrząsu toksycznego) i B (niszczy tkanki),

> toksyna sercowo – wątrobowa – uszkadza tkanki.

Chorobotwórczość:

- duża różnorodność jednostek chorobowych,

1. zwierzęta – mastitis,

2. człowiek

- zakażenie dróg oddechowych

- płonica (szkarlatyna) – choroba wieku dziecięcego, gorączka, wysypka, ból gardła,

- zakażenie skóry i tkanki podskórnej – różne liszajce,

- posocznica (gorączka połogowa),

- zakażenia narządowe (zapalenie wsierdzia),

- gorączka reumatyczna,

- zapalenie kłębuszków nerkowych - choroba wiążących kompleksów immunologicznych –>

1. kompleksy trafiają do nerek,

2. dołącza się dopełniacz,

3. zostaje zniszczony kompleks, ale także nerki.

10)

-różnice między rodzajami brucella i clostridium,

Rodzaj: Brucella.

G-, tlenowa pałeczka lub ziarniakopałeczka.

względne pasożyty wewnątrzkomórkowe.

Kwasooporna, jej hodowla jest trudna, nie wytwarza przetrwalników

Rodzaj: Clostridium.

- ok. 100 gatunków, powszechnie w środowisku;

- niektóre w przewodzie pokarmowym ludzi i zwierząt;

- beztlenowe, G+, urzęsione (wyjątek- Cl. perfringens- ma otoczkę);

- w preparatach pojedynczo, parami lub krótkie łańcuszki;

- katalazo ujemne;

- przetrwalnikujące (różnie położone, grubsze, wyraźnie deformują komórkę- ‘osełkowce’).

Beztlenowe.

Wymagają podłóż wzbogacanych.

Wrzosek, Wilson- Blaire, Willis- Hobbs, Schaedler.

-jaki materiał przy podejrzeniu leptospirozy

Materiał: krew, mocz, wycinki narządów- nerki, wątroba, płód.

-anatoksyna - co to, zastowanie

Anatoksyna (toksoid)- inaktywowana toksyna (formaldehydem); niezjadliwa, ale właściwości immunogenne- powstają pc w organizmie, czyli używane są w szczepionkach.

-Pasteurella multocida - morfologia i mikroskopia

Mikroskopia:

od razu preparaty mikroskopowe, bo tylko w materiałach od pacjenta Pasteurella ma otoczkę; zmienna morfologia;

robimy dużo preparatów- jednocześnie rozmaz krwi i po 2 preparaty odciskowe z każdego narządu;

G-, zmodyfikowana metoda Loefflera:

stosuje się błękit, nie widać otoczki, ale w zmodyfikowanej metodzie Pasteurella wchłania barwnik Loefflera nierównomiernie;

P. wyglądają jak agrafki, z hodowli jednolite zabarwienie;

Utrwalanie chemiczne: alkohol metylowy na 5 minut, dalej błękit na 10 minut;

- gdy obecne wyłącznie w tkance płucnej- saprofity, niechorobotwórcze, czyli nie było to zakażenie.

-podział e.coli ze wględu na mechanizm działania - wymień, krótko scharakteryzuj

ETEC- enterotoksyczne - w jelitach, wydzielają enterotoksynę

EPEC- enteropatogenne - uszkadzają enterocyty, biegunka spowodowana złym wchłanianiem

EHEC- enterokrwotoczne - wytwarzają Shigotoksynę; krwawe biegunki

EIEC- enteroinwazyjne - nie działają za pomocą toksyn, wnikają do enterocytów, biegunka (może być z domieszką krwi)

ETEEC- enterotoksemiczne - produkują toksyny wchłaniane do krwi

UPEC- uropatogenne - zakażają drogi moczowe

Zestaw 1

Inwazyjność E.coli

-otoczka- zwiększa zjadliwość, trudność dla fagocytów i leków

-fimbrie adhezyjne- przyczepienie się do komórek błon

- mucynaza (zapora)

- ściana komórkowa ma białka adhezyjne

Badanie serologiczne Leptospiry

- OA z formalizowanym antygenem

- odczyn aglutynacji- lizy z żywym antygenem- ilościowy

inkubacja 24h potem obserwacja- tam gdzie SA przeciwciała jest aglutynacja

miano dla ludzi- 1:200, dla zwierząt- 1:400

- Immunofluorescencja

Podłoża SS, Zebovitz, wrzosek

SS- dla Salmonelli i Shigelli, silnie wybiórczo różnicujące. Zawiera czynniki wzrostu-agar, bulion mięsny, pepton, ale też chlorek sodowy i tiosiarczan, barwniki i laktozę. Salmonelle czarne, Shigelle żółte

Zebovitz- wybiórczo- różnicujące dla gronkowców ( tak jak Chapman). Dodatek 10% NaCl- rosną tu tylko gronkowce. Czynnik różnicujący- mannitol- jest rozkładany przez złocistego, który przyjmuje żóltą barwę. Gronkowiec biały jest biały (wow!)

Wrzosek- pożywka płynna, dla beztlenowców, ma wyciąg mięsny i wątróbkę oraz pepton. Wątroba ta obniża potencjał oksydoredukcyjny

Co powoduje szkarlatynę, budowa morfologia

Streptococcus pyogenes barwi się dodatnio metodą Grama, jednak starsze kolonie łatwo ulegają odbarwieniu stając się Gram-ujemne.

Pojedyncza bakteria ma kształt kulisty oraz wykazuje tendencję do łączenia się w łańcuszki składające się z kilku-kilkudziesięciu komórek. Nie wytwarza rzęsek oraz przetrwalników, część szczepów ma otoczkę.

Drobnoustrój jest zaliczany do tlenowców lub względnych beztlenowców.

5. Brucella abortus- morfologia i mikroskopia

G-, pałeczka lub ziarniakopałeczka, nie barwi się jednak metodą gramma- są kwasoodporne, więc trzeba je potraktować ze zmodyfikowanego Ziehl- Nielsena (tak samo robimy prątkowi gruźlicy). 1. Utrwalanie termiczne 2.Zalanie fuksyną 3. Preparat odbarwia się 0,5 % CH3COOH 4. Dobarwienie błękitem metylenowym. Efektem SA czerwone brucelle, reszta niebieska. W preparacie materiału – w skupiskach

Zestaw 2

McConkey, Schaedler, Karthof

Agar MacConkeya –służący do hodowli bakterii Gram-ujemnych. Zawiera sole kwasów żółciowych, fiolet krystaliczny (hamuje wzrost bakterii Gram-dodatnich), neutralną czerwień (barwi drobnoustroje fermentujące laktozę), laktozę i peptony.

Agar MacConkeya różnicuje bakterie Gram-ujemne na fermentujące (Lac+) i niefermentujące laktozę (Lac-). Te drobnoustroje, które posiadają zdolność fermentacji laktozy zawartej w agarze (np. Escherichia coli, Klebsiella) zakwaszają podłoże do pH < 6,8. Prowadzi to do powstania czerwonych/różowych kolonii. Bakterie Lac- takie jak Salmonella czy Shigella zużywają peptony. Wytworzony podczas reakcji amoniak podwyższa pH podłoża – powstają białe/bezbarwne kolonie

Poprzez selekcjonowanie bakterii Gram-ujemnych i różnicowanie pomiędzy patogenami jelitowymi, takimi jak Escherichia coli i Salmonella, agar MacConkeya jest wykorzystywany do diagnostyki przyczyn biegunki.

Wariant podłoża, agar MacConkeya z sorbitolem, umożliwia izolację i różnicowanie enteropatogennych serotypów E. coli.

Schaedler- do hodowli beztlenowców, zawiera dodatek 5% krwi z barana, obecność czynników wzrostu i witaminy K !!!

Karthoff- płynne, wzbogacone, dla Leptospir- ze względu na ich powolny wzrost. Nie mogę nic więcej znaleźć

Morfologia krętków

- długie i cienkie

-G-, cylindryczne o spiralnie skręconych komórkach

-kilkuwarstwowa osłona zewnętrzna- pod nią włókna osiowe- aparat ruchu ( to są takie rzęski)

-są tak małe i cienkie, że nie widać je w zwykłym mikroskopie, tylko w ciemnym polu widzenia

Morfologia i mikroskopia Clostridium Perfringens

-brak rzęsek, ma otoczkę, charakterystyczna morfologia, bardzo aktywne biochemicznie, wytwarza egzotoksyny, hemolizyny, kolagenozę. Sporulacja- enterotoksyna- zatrucie pokarmowe

-przetrwalnikująca (osełkowato, różnie)

-katalazoujemna

-pojedynczo, parami, krótkie łańcuszki

C. perfringens wytwarza 14 toksyn, które zostały oznaczone kolejnymi literami alfabetu greckiego. Cztery spośród nich: α, β, ε i ι to toksyny letalne. Główną rolę odgrywa toksyna α (fosfolipaza C), która powoduje lizę erytrocytów, leukocytów, płytek krwi i komórek śródbłonka, co wpływa na zwiększenie przepuszczalnośći naczyń krwionośnych.

Inwazyjność wynika z bogatego zestawu enzymów: kolagenazie, proteinazom, hemolizynom, hialuronidazie, deoksyrybonukleazie oraz neuraminidazie.

Mikroskopia-

Buri – Gins- na otoczki

Na brzeg szkiełka- hodowla i tusz kreślarski, rozmaz suszymy, utrwalamy nad palnikiem, dobarwiamy fuksyna. Tło jest ciemne, bakterie czerwone, otoczki przeświecaja i tworzą strefę halo wokół bakterii

Scheffer- Fulton-na przetrwalniki

Preparat na 1 min zielenią malachitową, preparat nad płomień aż pokaże się obłoczek pary ( 3x). Przetrwalniki barwią się na zielono. Ostudzićpreparat, spłukac woda, na 30 sek zalewamy safraniną (czerwona). Mamy czerwone komórki i zielone przetrwalniki

4. Przegląd stad- co to i odnośnie jakiej bakterii

Skrining stad robimy odnośnie Brucelli abortus. Wykonujemy OKAP, OWD, OA próbówkowej, Coombs

ABR- w mleku- odmiana aglutynacji próbówkowej. Mleko + Brucellognost- różowy pierścień. Zakażenie- zlepy na wierzchu (tłuszcz mleka wynosi je na powierzchnię)

OKAP- odczyn kwaśnej aglutynacji płytowej. Na płytki kładziemy surowicę, dodajemy antygen w pH kwaśnym (3,65). Jeśli są przeciwciała- są kłaczki-oddajemy do dalszych badań laboratoryjnych ( OWD i OA)Jak oba są dodatnie- ubój z konieczności. Jak są niepewne- test powtarzamy po 3 tygodniach. Jak dalej są niepewne- robimy Coombsa- aby wykryć przeciwciała niekompletne

5. Czynniki zjadliwości gronkowca złocistego

-koagulaza

-clumping factor

-białko A- wiąże fragment Fc przeciwciała

-enzymy- hialuronidaza, fibrynolizyna, hemolizyny, B-laktonaza

-egzotoksyny: pirogenne(enterotoksyny, TSST-1- toksyna zespołu wstrząsu toksycznego)

leukocydyna- zabija krwinki białe; toksyny eksfoliatywne- łuszczą warstwę ziarnistą skóry

-zdolność do wytwarzania biofilmu (rozwija się na sztucznych tworzywach)

-antybiotykooporność

ZESTAW 7

1. ASO (ODCZYN ANTYSTREPTOLIZYNOWY)

-wykorzystywany w badaniu serologicznym Streptococcus pyogenes

-odczyn określa poziom antystreptolizyny (przeciwciał przeciwko toksynom) w surowicy pacjenta

-Streptococcus pyogenes wytwarza toksyny zwane streptolizynami. Są dwie „O” oraz „S”. „O” jest immunogenna i tylko przeciwko niej organizm wytwarza przeciwciała czyli antystreptolizyny

-powikłania po Streptococcus pyogenes: uszkodzenie m. sercowego, kłębuszkowe zapalnenie nerek, reumatoidalne zapalenie stawów

Metodyka ASO:

-szereg rozcieńczeń badanej surowicy

-do każdej probówki dodajemy po 1 j.m. streptolizyny

-dodać 5 % erytrocyty królicze, które hemolizują pod wpływem streptolizyny O

-inkubacja w cieplarce (37 st. C, 45 min.)

+wynik dodatni- dobra ilość antystreptolizyn do neutralizacji strespotlizyny, erytrocyty nie rozpadają się, a opadają na dno, roztwór klarowny

-wynik ujemny-niewystraczająca ilość antystreptolizyn, erytrocyty rozpadają się, gdyż nadmiar streptolizyny, roztwór stał się czerwony

-miano fizjolog. Mniejsze niż <1:200

-miano świadczące o wcześniej przebytym proc. Chorobowym- ASO=1:200

- miano świadczące o niedawno toczącym się proc. Chorobowym- ASO>1:200

2. BRUCELLA- TOK POSTĘPOWANIA ROZPOZNAWCZEGO

Lab. Referencyjne. Najwyższa ostrożność.

Materiał: fragment łożyska (liścienie), podwiązany żołądek płodu; mleko, sperma, wydzielina z pochwy, krew, wycinki narządów

Mikroskopia

Małe G-, pałeczki/ ziarniakopałeczki,

kwasooporne- normalnie kwas jest dobrym odbarwiaczem, ale nie u Brucelli: stosujemy zmodyfikowaną metodę Ziehl- Neelsena:

proste utrwalenie, zalanie fuksyną karbolową na 3 minuty, odbarwianie 0,5% kwasem octowym, dobarwianie błękitem metylenowym- 0,5 minuty; po fuksynie wszystko czerwone, po kwasie wszystko oprócz Brucelli się odbarwia, po błękicie wszystko niebieskie, Brucella czerwona;

w preparacie z materiału w skupiskach.

Badanie hodowlane:

Izolacja:

- trudna hodowla, wolny wzrost (5-7 dni, do 15);

- warunki tlenowe lub mikroaerofilne (5-10 % CO2);

- podoża wzbogacone, Br. agar, Br broth, ew. TSA;

- niewrażliwe na fiolet krystaliczny, zieleń malachitową (barwniki) i chemioterapeutyki- bacytracynę, aktidion, polimyksynę B;

- fazy S, R. Morfologia zmienna w zal od wieku hodowli.

Identyfikacja:

- biochemiczna: typowanie fagowe;

- serologiczna (aglutynacja szkiełkowa, próba Holta).

Próba Holta= OWD, gdzie materiałem do odczynu jest treść żołądka płodu.

Próba biologiczna: obecnie rzadko, czeka się kilka tygodni, wynik + brucele w narządach, aglutyny we krwi (miano > 1:10).

Badanie serologiczne:

materiał- surowica, mleko, sperma, śluz z pochwy;

ABR (próba pierścieniowa)- do wykrywania pc w mleku; odmiana aglutynacji probówkowej- barwna surowica przy wyniku dodatnim odbarwia się i zlepy opadają na dno, w mleku surowica też się odbarwia, ale zlepy na tłustym mleku wynoszone są do góry- barwny pierścień; do probówki wlewamy mleko, do niego brucelognost (antygen diagn, różowo- fioletowy), mieszamy- różowe mleko, różowy pierścień na powierzchni;

skrining stad- OKAP, OWD, OA probówkowej, Coombs; OKAP to szybki test terenowy- odczyn kwaśnej aglutynacji płytowej, szybka próba jakościowa, mówi nam tylko czy są pc (+, kłaczki) czy nie ma (-); niskie pH= 3,65; sztuki, które dały (-)à zdrowe;

(+)à ich surowice do badań lab. Oznaczenie miana surowicy. Testy ilościowe: OWD i OA probówkowej. Jeśli wynik obydwu dodatni- sztuka do uboju.

Jeśli obydwu ujemny- sztuka zdrowa.

Jeśli odczyn wątpliwy- badanie powtarzamy po 3 tyg., znowu OWD i OA. Jak po 3 tyg. znowu niepewne- test Coombsa (odczyn antyglobulinowy)- do poszukiwania pc niekompletnych;

ludzie- test aglutynacji wg Wrighta.

Próba alergiczna- skórny test nadwrażliwości z bruceliną.

3. SALOMONELLA (OBSTAWIAM, ŻE DOT CHOROBOTWÓRCZOŚCI)

- mogą powodować u ludzi i zwierząt dwojakiego rodzaju zakażenia :

o charakterze durowym- zakażenia ogólnoustrojowe, najczęściej drogą pokarmową, Salmonella namnaża się w całym organizmie; ostre, enteroinwazyjne, do światła jelita, przełamują barierę jelitową, potem do krwi i innych narządów;

ludzie:

S. typhi- chorobotwórcza tylko dla człowieka, powoduje dur brzuszny (wysoka gorączka, silne bóle głowy, brzucha, osłabienie, wymioty, leukopenia, wysypka na brzuchu);

S. paratyphi- typy A, B i C, wywołuje paradury, głównie u człowieka;

zwierzęta

S. dublin- paratyfus cieląt;

S. choleraesuis- paratyfus świń, ciężarne maciory ronią;

S. gallinarum- tyfus kur, biała biegunka piskląt;

S. pullorum- puloroza, biała biegunka piskląt, gorsza rzeźność, zarażone jaja, śmiertelność nawet do 100% .

Reszta Salmonelli nie cechuje się swoistością w stosunku do gatunków zwierząt. Są przyczyną miejscowego zakażenia przewodu pokarmowego (Gastroenteritis). U ptaków też zakażenia układu rozrodczego.

jelitowe- u ludzi najczęściej powodują toksykoinfekcje pokarmowe (zatrucia pokarmowe); najczęściej po spożyciu produktów spożywczych pochodzenia zwierzęcego, w których namnożyły się Salmonelle w dużych ilościach;

w I etapie endotoksyna, później bakterie wydzielają też egzotoksyny (entero);

nieinwazyjne;

Salmonellozy u ludzi to zoonozy, bo źródłem zakażenia dla człowieka są produkty

pochodzenia zwierzęcego ;

S. enteritidis,

S. typhimurium.

Po przechorowaniu nosicielstwo pochorobowe.

Tatar, ciasta, niedopieczony drób, pasty jajeczne, sałatki, majonez.

Surowe jajka trzeba sparzyć wrzątkiem.

W Polsce najczęstsza przyczyna zatruć.

Gastroenteritis- zapalenie żołądka i jelit- biegunka, wymioty, podniesiona temperatura, po zachorowaniu ten człowiek przez pewien czas jest nosicielem.

Czasami nosicielstwo Salmonelli jest w woreczku żółciowym (Salmonelle są niewrażliwe na żółć, namnażanie w woreczku).

4. JAKIE BAKTERIE SĄ NIEINWAZYJNE

-produkujące tylko toksyny

-Clostridium botulinum-laseczka jadu kiełbasianego

-Clostridium tetani-laseczka tężca

5. PODŁOŻE FLUROCULT, BAIRD-PARKERA, WILLIS-HOBBS

FLUROCULT- chromogenne, do izolacji Enterobacteriaceae, siarczanem laurylowym

BAIRD-PARKERA inaczej zwane ZEBOVITZA (TG)- zawiera TELLURYN POTASU I GLICYNĘ; gronkowce koagluzaododatnie mają postać czarnych kolonii , a kolagulzaoujemne- wzrost zahamowany albo nieliczne, małe, szare kolonie

WILLIS-HOBBS- obecność lub brak enzymwó u Clostridiów; zawiera laktozę, żółtko jaja I wskaźnik pH;

- gatunki rozkladające laktozę—barwa staje się czerwona

- gat produkujące proteazy—przejaśnienie wokół kolonii

- gat produkujące lipazę – perłowy połysk kolonii

-gat produkujące lecytynazę – strąty wokół kolonii

ZESTAW 8

1. W JAKIM CELU POBIERA SIĘ MATERIAŁ Z CLOSTRIDIUM PERFRINGENS

- egzotoksyny (5 serotypów (A-E), różniących się chorobotwórczością; A- odpowiada za zgorzel gazową, pozostałe- enterotoksemie;

Tok postępowania rozpoznawczego- Cl. perfringens:

Materiał: wymazy, wysięki, tkanki martwicze (zgorzel);

Wymiociny, kał, krew, pasze (enterotoksemie).

Mikroskopia: metoda Grama, metoda Burri- Ginsa na otoczki, metoda Schaeffer- Fultona na przetrwalniki.

[Burri- Gins- na brzeg szkiełka kropla płynnej hodowli i tuszu kreślarskiego, robimy rozmaz, suszymy na powietrzu, utrwalamy nad płomieniem palnika, dobarwiamy fuksyną; ciemne tło, komórki bakteryjne czerwone, niezabarwione otoczki (stanowią strefę „halo”).

Schaeffer- Fulton: preparat zalewa się zielenią malachitową, mniej więcej na minutę; nad płomień palnika 3 razy aż pokaże się para; ostudź, spłucz wodę, zalej safraniną (czerwona) na 30 s, czerwone komórki, zielone przetrwalniki; albo komórka z pustym środkiem, obokzielone przetrwalniki].

Badanie hodowlane:

- Wilson- Blaire- zaczernienie;

- Willis- Hobbs- lecytynaza;

- hemoliza na agarze z krwią;

- ścięcie mleka- wykazuje obecność enzymów proteolitycznych; skrzep kazeinowy.

TEst sporulacji: 70- 80 stopni C. Posiew na Wrzoska- C. perfringens wytwarza gaz pod parafiną.

Identyf. biochemiczna: API, ANA.

Wykrywanie toksyn (enterotoksemie)

- próba biologiczna (myszy), SN;

- test aglutynacji lateksowej.

2. ENDO- I EGZOTOKSYNY-PRZYKŁADY, PO CO?

ENDOTOKSYNY- toksyny wydzielane w małych ilościach z komórki bakteryjnej dośrodowiska (uwalniają się po rozpadzie komórki); występują u bakterii G-; mniej toksyczne; ciepłostałe (1-2 h gotowanie nie pozbawia ich toksyczności); mniej gwałtowne dzialanie (po wprowadzeniu do przewodu pokarmowego wywołują leukopenię, trombocytopenię, hiperglikemię, martwicę skóry i nerek, ale gł zatrucia pokarmowe), np. Enterobacetriaceae

EGZOTOKSYNY (jady pozakomórkowe)- wydzielane w dużych ilościach przez żywe komórki, wytwarzane przez G+ i niektóre G-, większa toksyczność, są białkami, więc ulegają degradacji po wpływem 60-100 st. C przez pół godz; do nich zaliczamy ENTEROTOKSYNY np. Staphylococcus ureus, E.coli, Shigella, Clostridium perfrinegns

3.BAKTERIE WYWOŁUJĄCE RONIENIA:

-Brucella abortus- pałeczka ronienia bydła (szybko namnaża się w liścieniach ciężarnej macicy, gdzie wytwarzany jest ERYTRYTOL- ich składnik odżywczy)

-Brucella suis- świnie

-Brucella canis – suki

- Leptospira

4. GRONKOWIEC ZŁOCISTY – CHOROBY

a) zwierzęta:

- ropowica jagniąt

- mastitis przeżuwaczy

- botriomykoza (ogólne ropne zakażenie)

- drób – infekcje woreczka żółciowego u zarodków, posocznica, zapalenie stawów u dorosłych

-czyraki, ropnie

b) człowiek

-posocznice, ropowica (niemowlęta, dzieci)

-zatrucia pokarmowe

-zakażenia skóry – ropnie, czyraki, trądzik, jęczmień liszajec

-zapalenie złuszczające skóry (toksyna eksfoliatywna)

-zakażenia układu oddechowego, moczowego, stawów, kości, opon mózgowych

-TSS(zespół wstrząsu toksycznego)-wysoka gorączka, wysypka na ciele, wstrząs

5. LEPTOSPIRY – HODOWLA

Materiał: krew, mocz, wycinki narządów- nerki, wątroba, płód.

Izolacja: warunki tlenowe, płynne podłoże wzbogacone- Korthoffa, 30 stopni C, do 8 tygodni; jak coś się rusza to leptospiry.

Zestaw 15

1. Co to jest LPS?

LPS-lipopolisacharyd-jest to fragment błony zewnętrznej ściany komórkowej zbudowany z:

-lipidu A (warunkuje aktywność endotoksyny)

-oligosacharydu rdzeniowego

-O-swoistego łańcucha bocznego (antygen somatyczny O)

2. Clostridium-metody hodowli, morfologia, czynniki wybiórczo-różnicujące.

-morfologia:

-laseczki

-urzęsione (wyj. C. perfringens-otoczka)

-w preparacie parami, pojedynczo lub krótkie łańcuchy

-przetrwalnikujące (kształt osełki)

-metody hodowli:

-beztlenowe (płytka Fortnera, anaerostat, gazpaki)

-podłoża wzbogacone, np. Wrzoska (bulion+wątroba, zalane parafiną)

-czynniki wybiórczo-różnicujące

-podłoże Willis-Hobbs-wykrywa enzymy-lecytynazę, zawiera laktozę, żółtko jaja kurzego, wskaźnik pH

-enzymy proteolityczne-przejaśnienia wokół kolonii

-rozkład laktozy-zmiana barwy

-lipazy-kolonie o perłowym połysku

-lecytynaza –stronty wokół koloni

-hemoliza na agarze z krwią

-ścinają mleko (enzymy proteolityczne)

3. Bakterie przy których wyst. Różnice morfologiczne w hodowli i w materiale.

a) Bacillus anthracis (laseczka wąglika)

-bezpośrednio z materiału: krótkie łańcuszki (jak pędy bambusa), obecność otoczki

wspólnej dla kilku komórek

-z hodowli- długie nici, pozbawione otoczki, na podłożu z penicyliną powstaje

sferoplast-„sznur pereł”

b) Pasteurella

-bezpośrenio z materiału: przy barwieniu zmodyfikowaną met. Loefflera przypomina agrafki

-z hodowli:przy barwieniu tą samą metodą jest jednolicie zabarwiona

4. Leptospiry-droga wnikania, rozprzestrzeniania, objawy.

a)źródła

-mocz chorych zwierząt i nosicieli (zakaźny aerozol)

-zbiorniki wodne-droga alimentarna

-droga pionowa (z matki na płód)

b)drogi wnikania

-uszkodzona skóra

-błony śluzowe

c)objawy

-żółtaczka (niewydolność wątroby)

-niewydolność nerek

-martwica nerek

-objawy nerwowe

Zestaw 14

1. Brucella abortus-droga wnikania, obraz kliniczny, powinowactwo do narządów, chorobotwórczość.

a) drogi wnikania:

-alimentarna

-płciowa

-spojówki

-pionowa

b)powinowactwo:

-do ww. chłonnych

-wymion

-stawów

c)obraz kliniczny:

-obj. Grypopodobne

-falująca gorączka

-zapalenie stawów

-zapalenie jąder

-zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych

d)chorobotwórczość:

bakterie wewnątrzkomórkowe, na miejscu wniknięcia pożerane przez kom. żerne, które nie mogą jej zabić, przemieszcza się w nich i namnaża w związku z tym trudna do leczenia, powoduje głównie poronienia i zaburzenia w rozwoju płodu

2. Metoda Burri-Ginsa

-na szkiełko podstawowe nanosimy zawiesinę hodowli drobnoustrojówi mieszamy z tuszem kreślarskim. Za pomocą drugiego szkiełka robimy rozmaz.

-po wyschnięciu preparat utrwalamy nad płomieniem

-barwimy fuksyną fenolową przez 1-2 min

-spłukujemy wodą i suszymy bibułą

Tło=ciemna, bakterie=czerwone, otoczki=białe

3. Laseczka wąglika-metody hodowli, podłoża, wygląd, czynniki wybiórczo-różnicujące.

Bacillus anthracis (laseczka wąglika)-morfologia:

-bezpośrednio z materiału: krótkie łańcuszki (jak pędy bambusa), obecność otoczki wspólnej dla kilku komórek

-z hodowli- długie nici, pozbawione otoczki, na podłożu z penicyliną powstaje

sferoplast-„sznur pereł”

hodowla:

-zwykłe podłoża

-war. tlenowe, 37C

-brak hemolizy na podłożu z krwią

-formy S mniej zjadliwe od R

-w hod. Bulionowej kożuszek (może opadać na dno)

4. Bakterie powodujące zatrucia pokarmowe

-Escherichia

-Salomnella

-Shigella

-Proteus

-Yersinia

-Staphylococcus

-Streptococcus

ja praktycznie przy każdej bakt. mam jakiś dopisek, ze powoduje zatrucia, czy bóle brzycha itd. : (

5. Podłoża z żółcia, Chapmana, Mc Conkeya

a)podłoże Chapmana-podłoże różnicujące np. dla gronkowców. Czynnikiem różnicującym jest mannitol (gronkowiec złocisty od białego). Gronkowiec złocisty rozkłada mannitol-zmiana koloru podłoża

b)Mc Conkey-do hodowli bakt. G-, zawieta sole kwasów żółciowych, fiolet krystaliczny (który hamuje wzrost G+), neutralną czerwień (barwi drobnoustroje fermentujące laktzę i pepton. Używanie do hodowli m. in. Salmonelli czy E. Coli

c) podłoża z żółcią używane są w hodowli E. Coli. Żółć jest w niej czynnikiem wybiórczym-wiecej nie znalazłąm.