Student otrzymał homogenny preparat wektora pGEX-2T o stężeniu 2,5∗10³ ng/μl. W tym celu chce „trawić” 3,0 μg otrzymanego wektora w ciągu 1,0 h jednocześnie dwoma enzymami restrykcyjnymi BamHI i PstI. Aktywności specyficzne enzymów wynoszą: 10,0∗10³ U/ml (BamHI) i 2,0∗10³ U/ml (PstI). Masa cząsteczkowa pGEX-2T wynosi 4,948 kpz, masa DNA faga λ wynosi 48,502 kpz, każdy enzym „trawi” plazmid tylko w jednym miejscu. Proszę zaprojektować skład mieszaniny reakcyjnej na 1 próbkę, razem z kontrolą. Student chce nastawić 6 reakcji. Pomóż mu przygotować mix i oblicz ilości poszczególnych odczynników.

BamHI: Reaction Conditions: !! roztwory wyjściowe wszystkich buforów są stężone 10x !!

Recommended buffer

Incubation temperature

Units for  overnight  incubation, u/µg DNA

Thermal inactivation, in 20min

Enzyme activity, %

BamHI (unique)

B  (blue)

G  (green)

O  (orange)

R  (red)

Tango™  (yellow)

1X

1X

1X

1X

1X

1X

2X

Buffer BamHI

37°C

0.5

80°C (10u)

100

20-50*

100

20-50

50-100*

100*

50-100

Number of Recognition Sites in DNA Molecule: λDNA: 5 *- star activity (Fermentas)

PstI: Reaction Conditions:

Recommended buffer

Incubation temperature

Units for  overnight  incubation, u/µg DNA

Thermal inactivation, in 20min

Enzyme activity, %

B  (blue)

G  (green)

O  (orange)

R  (red)

Tango™  (yellow)

1X

1X

1X

1X

1X

2X

Buffer O

37°C

0.2

80°C(10u)

50-100

50-100

100

100

50-100

50-100

Number of Recognition Sites in DNA Molecule: λDNA: 28 *- star activity (Fermentas)

Student otrzymał homogenny preparat wektora pGEX-2T o stężeniu 2,5∗10³ ng/μl. W tym celu chce „trawić” 3,0 μg otrzymanego wektora w ciągu 1,0 h jednocześnie dwoma enzymami restrykcyjnymi BamHI i PstI. Aktywności specyficzne enzymów wynoszą: 10,0∗10³ U/ml (BamHI) i 2,0∗10³ U/ml (PstI). Masa cząsteczkowa pGEX-2T wynosi 4,948 kpz, masa DNA faga λ wynosi 48,502 kpz, każdy enzym „trawi” plazmid tylko w jednym miejscu. Proszę zaprojektować skład mieszaniny reakcyjnej na 1 próbkę, razem z kontrolą. Student chce nastawić 6 reakcji. Pomóż mu przygotować mix i oblicz ilości poszczególnych odczynników.

BamHI: Reaction Conditions: !! roztwory wyjściowe wszystkich buforów są stężone 10x !!

Recommended buffer

Incubation temperature

Units for  overnight  incubation, u/µg DNA

Thermal inactivation, in 20min

Enzyme activity, %

BamHI (unique)

B  (blue)

G  (green)

O  (orange)

R  (red)

Tango™  (yellow)

1X

1X

1X

1X

1X

1X

2X

Buffer BamHI

37°C

0.5

80°C (10u)

100

20-50*

100

20-50

50-100*

100*

50-100

Number of Recognition Sites in DNA Molecule: λDNA: 5 *- star activity (Fermentas)

PstI: Reaction Conditions:

Recommended buffer

Incubation temperature

Units for  overnight  incubation, u/µg DNA

Thermal inactivation, in 20min

Enzyme activity, %

B  (blue)

G  (green)

O  (orange)

R  (red)

Tango™  (yellow)

1X

1X

1X

1X

1X

2X

Buffer O

37°C

0.2

80°C(10u)

50-100

50-100

100

100

50-100

50-100

Number of Recognition Sites in DNA Molecule: λDNA: 28 *- star activity (Fermentas)

---