20110324196

WyiMMiila (MhcMwnut

•    kAr«MMm^r t NoiMM: 10mM (PTA, 10 tr-M TrW-HO (pH-0)

•    «Mr pmOMwii H o ttflsniu 20

•    eeswór fcwłu bufttrowany 0,5 M TH04ICI (pM 9.0) Rortwfr uwiera 0,1%

drip* lai jesr. prwdwuOenłae wbi, oąfcirwwyw mh**or«m *Hu,

Mby wmpi wmwmw mnmm nOonwwma parwga»M w oórśśrtuntu friy nadmj ad

“Pfcwft

•    MMMM fiw^/cfttooferTn/aftoftol izoamytowy (v/v/V; 25:24:1)

•    WWW cfUcrurbrtw/uaoho< ueorwyiowy (v/v, 49' 1)

•    WlWlWĆMttWlU

•nodnip

•    OPdPMRDttmMr

laotowMiii OMA;

1)    Hnwee wgpdoao kumaj w Mu 20-29 mg mruiat w homoporttMon*, m*mx w •4 mi aaModbonago Wit i modmbmć (no łoddo).

2)    0* iMMMiiy Mi( n*»«>rst 790 pi Mont akaMcyjnago (uprzednio mmNAaomy I M Mr do 10 mM i JMjimy 0>29 g 9P9 tafc aby Jago m$mm ketem* wynodfe 0J%) l 5 <4, ęmmm Ł Gdbfc wymłaaa < > inkubów*i w taln! Mtiafwinp. 99*C fnm 00 mani

I) NaaMpmo dodać do adOManmy 700 m1 Nnokt bidbrawonipa, wymUfć l oMrowoć pmy UOOOipmpraa l9oonutwMop. pokojowe)

4) ZaM aupomatant i nM 790 pi maamopany IMfcNorafcom/abtohai ttoamytowy (v/v/v 25:24 1), C4o4ć mmmt fcgadmo «t do utyHionto emutejł, o rastąprita mHwd przy 13000 rp pr» 19 mami m lamp. pokojom).

9) zabrać aupornatant do no«m| prabdwll i dodać 900 pi ndananiny cNorafomt/ofcohoi imomyaowy (v7* 40:1). Cbość wymaoaaać t wdrmwć przy 13000 rpm pmz 19 minut w temp, poMo-gj

6)    Zabrać aupomocant przenieść I dodać 2,5 obi 90% etanolu. Calotó wymlatrać i mkubować no lottóe 30 minut o rawgpnie wlrtmeć przy 13000 rpm praż 1$ minut w temp. pokojami.

7)    (Jungi aupomoiant o do osadu dodać 900 pL 75% etanołu I łagodnie irymlonoi* CjMĆ wirowoć przy 13000 rpm przez 10 minut w tamp. pokojowej.

i) Usunąt supmedwt Oaad wysuszyć w tamporaturzo pokojowej Ok. 10*20 mmuL

9)    Wysuszony oood rozpuldć w 20 pi HjO dapec.

10)    Zmierzyć spekirofotomeerycznte nwartodć ONA.

2