histologia wyk�ad4

Chondriom komórkowy

Enzymatycznym markerem dla chondriomu komórkowego biorącego (ze względu właśnie na enzymy w nim zawarte) bezpośredni udział w procesach oksydoredukcyjnych i w tlenowej fosforylacji , enzymy dehydrogenaza kwasu bursztynowego i adenozynofosfataza mitochondrialna biorą tu udział.

Teoretycznie, oznacznikami enzymatycznymi dla tej organelli mogą być prawie wszystkie enzymy biorące udział w tych przemianach (m.in. prawie wszystkie wchodzące w tzw cyki Krebsa), praktycznie metodami histochemicznymi Wykrywane jest kilkanaście, a wśród nich najczęściej w tym celu stosowane są właśnie metody na wyżej wymienione enzymy.

Podstawa odczynu histochemicznego metody Nachłasa i współpracownika na dehydrogenazę kwasu bursztynowego jest odłączenie przez enzym (dehydrogenazę) z substratu (sól sodowa kwasu bursztynowego) dwóch atomów wodom, które łączą się z tetrazolową Nitro BT dając produkt końcowy w postaci barwnych złogów formazanu w .reakcjach występowania (aktywności) tego enzymu, „konturowanie” chondriomu komórkowego przez dehydrogenazę jest wyjątkowo precyzyjne ze względu na umiejscowienie enzymu w błonach bądź w samych błonach tej organelli.

Istnieją tez możliwości barwienia mitochondriów zielenią Janusową lub hematoksyliną żelazistą.

Specjalne techniki badawcze-mrożeniowa

Techniki mrożeniowe polegają na utwardzeniu materiału biologicznego poprzez jego zamrożenie.

Zalety: są krótkotrwałe, zachowują wszystkie składniki w materiale biologicznym, procedura przebiega w niskiej temperaturze co zapobiega denaturacji białek.

Materiał zamraża się:    <cy

a)w ciekłych gazach: azot (-196°C), hel (-26(rC),

b)za pomocą zestalonego dwutlenku węgla- tzw. „suiMy lód^ (=£8.(5 Krioprojekcja^ ^polega na przepojeniu materiału roztworem sacharozy (15-30%) lub glicer^y-wgelu uniknięcia krystalizacji wody podczas zamrażania.

Materiał zamrożony kroi się w mikrotomie mrożeniowym, kriostacie.

Liofilizacja- szybkie zamrażanie materiału biologicznego w próżni oraz w obniżonej temperaturze na drodze sublimacji wody. Metoda ta pozwala na zachowanie w tkankach wszystkich substancji chemicznych.

Badanie cytoenzymologiczne

Reakcje histochemiczne przeprowadza się na skrawkach kriostatowych lub parafinowych rzadziej na niewielkich fragmentach tkanek (głównie w technice cytochemicznej i do mikroskopowania elektronowego), skrawki poddaje się inkubacji w środowisku zawierającym odczynnik reagujący wybiórczo z poszukiwaną ąubstancją. Ostateczny produkt reakcji, w celu uwidocznienia go w tkance, musie byćfrozpuszczalny i barwny lub elektrycznie gęsty, w przypadku oglądania materiału w mikroskopie elektronowym.

Reakcja histoenzymatyczna: substrat»»enzym»»produkt barwny

Reakcja enzymatyczna złożona (metoda j ono wymienników chemicznych): substrat»»enzym»»produkt»»reakcj a wi ązania^ >

»»barwnik

5