Skan
97

3.2.2. .Jj&t oda probówkowa

W

pośrednio przed rozlaniem faga szczepem wskaźnikowym, tj. szczepem wrażliwym na działanie poszukiwanego faga. Po ponownym przesuszeniu inkubować płytki w temp. 57° przez noc. Odczytać wynik próby na podstawie obecności lub braku lizy albo pojedynczych łysinek na posiewach.

Do.10 ml bulionu odżywczego dodać 0,05 ml młodej hodowli szczepu wskaźnikowego i 0,d ml badanego przesączu. Identyczna hodowla bakteryjna bez dodątku badanego przesączu służy jako kontrola. Obie próby inkubować w temp. 37° i porównywać stopień zmętnienia hodowli badanej w stosunku do hodowli kontrolnej. Jeżeli w badanej próbie znajdują sie fąfii_T w miarę nosta-

* z^li2SwTfrSyli tzw. l i’g_ą t_ Ą a g O * z.

przesączyć przez pączek bakteryjny. Przesącz poddać kontroli metodą płytkową, w celu wykazania pojedynczych łysinek.

2 pojedynczej łysinki należy izolować cz-ysty szczeg faga. W tym celu pobrać ze środka łysinki materiał przez dotknięcie ezą i rozsiać posiewem redukowanym na płytce agarowej, posianej szczepem fagowraźliwym. Posiew inkubować w temp.-3%° przez _| ^4..h. Postępowanie takie należy ^-krotnie -nowtór^-yć. Odczyszczony w ten sposób fag służy do założenia wstępnej czystej hodowli faga.

*

3.3,

Hodowlę fagów prowadzi się zarówno w celu utrzymania danego szczepu faga przy życiu, jak i w celu uzyskania określonych ilości faga potrzebnych do prac badawczych. Hodowla fagów wymaga posługiwania się podłożami

nego cyklu reproćuj nych uwalnia się dt tomnych fagów (jed: wirionów). Zakażajc można prowadzić rai

Wstępną hodowlę Do probówki z buii< z pojedynczej łysir obwodzie łysinki. 2 kubowana przez ncc miano faga.

Otrzymanie hodc wania odmiennej met ninę inkubacyjną (i *7 doprać odpowrc wych komórek w hodo twórczych (biologie wieslnie. Proporcje ozenie miana hodewi cia hodowli baktery nostce objętości w i minimalnym odsetku . micznej fazie wzres^-wane na martwych ko; nich, nie tworzą ?y. ności, co prowadzi : uzyskania możliwie ^ wać określoną metod; nia. Istnieją specj< wysokim mianie.

3»3."l. Hodowlo e

Hozlać do próbód ności od potrzeb) j żywczego i pozostawi wkroplić po 1 ml hoć nej fazie wzrostu (c

ża zarówno płynne, jak i stałe zakażaniu fagiem komórek s: