biolab

A) BADANIE METABOLIZMU GLUKOZY VV KOMÓRKACH WĄT KOBY

Wykonanie:

Do dwóch probówek odważyć po 2g zhomogenizowanej wątroby i wprowadzić po 3 ml wody destylowanej. Następnie do 1 probówki wprowadzić 2 ml 5% cytrynianu sodu (u o alaniny), a do 2 probówki 2 ml wody. Do obu probówek dodać 2 ml 10 % glukozy i zaraz umieścić je w łaźni wodnej o temp. 37°C z systemem napowietrzania. Po 20 minutach od rozpoczęcia glikolizy do obu probówek dodać po 2 ml 10% roztworu kwasu trichlorooctowcgo. wymieszać i odwirować (10 min.. 4000 obrotów/min.).

TEST Z 2.4-DI\’ITROFE\'YL()tIYDRAZYNA NA OBECNOŚĆ PIROGRONIAtylL do krótkich probówek (na 10 ml) odmierzyć po 1 ml uzyskanych klarownych supernatantów. dodać po ).-ml nasyconego roztworu 2.4-dinitrofenylohydrazyny* (DNPH) i wymieszać. Następnie z ta uzyskanych roztworów pobrać po 1 ml i przenieść do nowych probówek zawierających po 1 m 10% NaOH. Jeżeli w mieszaninie reakcyjnej obecny jest pirogronian to tworzy się czerwone zabarwienie.

kwas    2.4-dinitrofcnylohydrazyna    2.4-dinitrofcnylohydrazon

pirogronowy    kwasu pirogronowego

• 0.02% roztwór 2.4-dinitrofenylohydrazyny (dinitrophenylhydrazinc - DNPII) w I M roztworze HCI

TEST Z DNS NA OBECNOŚĆ GLUKOZY: W zastosowanej metodzie wykorzystywane są właściwości redukujące sacharydówy które w środowisku zasadowym redukują grupy nitrowe kwasu 3,5-dinitrosalicylowego do grup aminowych, a same utleniają się do kwasów onowych. Powstające aminowe pochodne kwasu 3,5-dinitrosalicylowego mają barwę pomarańczową. Intensywność zabarwienia zależy od ilości sacharydów redukujących w próbie.

kwas 3.5 dwunitrosaIicylowy    kwas 3,5 dwuaminosalicylowy

Żółto pomarańczo w>'    czerwonobrunatny

Wykonanie: do probówek skalowanych na 20 ml odmierzyć po 100 pl klarownych supematan-lów. Do kolejnej probówki odpipetować 100 pl roztworu glukozy otrzymanego przez zmieszanie 2 ml glukozy 10% i 7 ml wody destylowanej (odpowiada to wyjściowemu stężeniu glukozy - kontrola dodatnia).

Do wszystkich probówek (właściwych i kontroli) dodać po 2 ml roztworu kwasu 3,5-dinitrosalicylowego. wymieszać i umieścić we wrzącej łaźni wodnej na 5 min. Następnie próby oziębić i uzupełnić wodą destylowaną do kreski. Zmierzyć absotbancję przy długości lali 550 nm. Na podstawie uzyskanych wyników omówić intensywność przebiegu glikolizy w różnych warunkach.

TEST Z JODEM NA OBECNOŚĆ G U KOG EN U

Wykonanie:

Do szklanych probówek odmierzyć po Iml klarownych supernatantów. Do wszystkich probówek dodać po 0.5ml roztworu jodu w jodku potasu i obserwować powstałe zabarw ienie. W obecności glikogenu powstaje ezerwono-pomarańczowe zabarwienie.

2