CCF20081011013

I

II

ninhydryna

o

II

c

•c

li

o

\ /°^h /\ *

COOH H N-i-H

OH

•c ^    \

Yl ^OH

o

o

C0₂⁺ NH,

aminokwas ninhydryna zredukowana

ninhydryna ₊ ninhydryna + nh, zredukowana ’ ’    3

+ 3 H₂0

fioletowo-niebieski kompleks barwny

Wydzielający się w czasie reakcji CO2 można mierzyć manometrycznie w aparacie van Sly-ke'a, zaś natężenie barwy kompleksu można mierzyć kolorymetrycznie. Reakcja ta daje więc podstawy do ilościowego oznaczenia badanego aminokwasu, a także jest podstawow-ą analizą jakościową (identyfikacja aminokwasów).

Wykonanie:

1 cm badanego aminokwasu i 0,5 cm" ninhydryny wymieszać w probówce i ogrzewać nad palnikiem do wTzenia. Po chwili pojawia się fioletowe zabarwie-nie, a w przypadku proliny i hydroksyproliny zabarwienie żółte.

2. Reakcja biuretowa na wykrywanie wiązania peptydownuo

W środowisku zasadowym wiązanie peptydowe łatwo przechodzi w formę enolową. Jon Cu** łączy się w' tych warunkach wiązaniami głównymi z grupami karboksylowymi, zaś wiązaniami koordynacyjnymi z azotem. Powstaje kompleks o barwie fioletowej. Nazwa tej reakcji pochodzi od biuretu ( produkt kondensacji dwóch cząsteczek mocznika), który posiada wiązanie -CO-NH- i tworzv również z miedzią fioletowy kompleks.

1/°^ ^{0 1}

O

O

II

2 -C-N-

NaOH

2 -C=N - + Cu

I

H

+ +

c

i

H-N ⁺

Cu

C

N+h

fioletowy kompleks

Wykonanie:

✓

Do dwóch suchych probówek wsypać po ok. 0.2 g mocznika. Jedną probówkę ogrzać nad palnikiem aż do momentu stopienia mocznika i w\dzielenia amoniaku. Po ostudzeniu do obu probówek dodać po 2 cny wody. Do i rzec i ej pr hówki odmierzyć 2 cm³ roztworu kazeiny.

i