scan0189

HUGO (Humań Genom Orgęnisation 1988 r.)

KUPO (Humor. Ptoteon Organisction - badanie nad proteonem 2001 r.)

Dotychczasowe badanie ekspresji genów:

•    Analiza markerem - blotting-

•    czułe, ale półilościowe

•    pracochłonne, q tylko kilka genów jednocześnie

•    Q-PCR-(TegMan)

•    ilościowa analiza metodąPCR w czasie rzeczywistym

•    drogie sondy, kilka - kilkanaście genów na raz

•    Differential Display (porównanie ekspresji losowo namnożonych fragmentów RNA)

-    analizuje wiele genów

-    ryzyko wyników fałszywie dodatnich

•    Andiza Dot biot (macroorrays)

-    ograniczona czułość

Wszystkie metody są oparte na hybrydyzacji badanego mRNA z sondąo znanej sekwencji.

•    5AGE (sekwencyjna analiza ekspresji genów)

4

Badanie komórki 9genow lub białek) - jednoczesna analiza wszystkich jej elementów.

Od mRNA do cDNA

komórki z różnych tkanek mRNA wyizolowane -+ klony cDNA otrzymanego z cząsteczki DNA

Struktura mikromacierzy - określona liczba sond naniesionych w sposób uporządkowany i badanie wielu cenow Jednocześnie. Naniesione cDNA hybrydyzuje.

Mikromacierz: biblioteka klonów DNA, próbka testowa, próbka odniesienia.

Znakowanie fluorochromcm i hybrydyzacja:

•    po izolacji mRNA podlega odwrotnej transkrypcji w czasie której jest znakowane fluorochromcm.

•    znakowana nić DNA jest hybrydyzowcna Mikromacierz - zakres bodar.ia nowotworów.