CCF20150318010

Szczepionki rekombinowane

•    Organizm jest immunizowany białkiem drobnoustroju uzyskanym za pomocą inżynierii genetycznej:

•    wybiera się antygeny kluczowe dla życia i rozwoju drobnoustroju;

•    po wyodrębnieniu antygenu protekcyjnego konstruowane są transgeniczne bakterie , zawierające cDNA takiego antygenu;

•    bakterie konstruuje się w sposób umożliwiający jego oczyszczenie - najczęściej jest to sekwencja sześciu histydyn; •Taka konstrukcja umożliwia oczyszczenie białka metodą chromatograf ii powinowactwa, w której nikiel obecny na kolumnach wykazuje powinowactwo do histydyn.

Szczepionki zawierające DNA

• ponad 20 lat temu - pierwsze doświadczenia, w których udowodniono iż wstrzyknięcie plazmidu ONA do mięśni i skóry myszy wywołuje u niej odpowiedź immunologiczną na kodowane przez to ONA antygeny (Ferraro i wsp. 2011).

•Konstrukcja szczepionki ONA

• W plazmidzie szczepionki ONA można wyróżnić dwie główne składowe:

•    szkielet plazmidu

•    jednostkę transkrypcyjną

Szkielet plazmidu - zawiera miejsce początku replikacji ori umożliwiające amplifikację plazmidu w komórkach bakterii oraz gen oporności na antybiotyk umożliwiający selekcję komórek bakteryjnych posiadających plazmid

Jednostka transkrypcyjna - obejmuje promotor, transgen i ogon poli A -promotor jest pochodzenia wirusowego;

•    Najczęściej używa się promotorów pochodzących z wirusa cytomegalii (CMV) jako jednego z najsilniejszych

•    W sekwencji kodującej transgen istotna jest zaleta kodowania kilku białek na raz , co zwiększa potencjał szczepionki

•    Sekwencje kodujące białka znajdują się pod kontrolą jednego promotora

•    Sekwencja poli A odgrywa ważną rolę w tłumaczeniu oraz stabilizacji mRNA.