skanuj0009

Do 5 probówek odmierzyć podaną w tabeli I objętość ekstraktu z ziemniaka, benzydyny,

KCN i H2O. Do probówki nr 4 dodać zagotowany ekstrakt. Zawartość probówek wymieszać i postawić na 20 min. w temperaturze pokojowej Obserwować zachodzące zmiany i zanotować wyniki.

Tabela I. Wykrywanie aktywności peroksydazy

Próba nr	Wyciąg ml	Woda ml	Benzydyna ml	KCN ml	H202 ml
1	2,5	0	0,1	0	0,1
2	2,5	0,1	0	0	0,1
3 4	2,5	0	0,1	2 krople	0,1
	2,5	0	0,1	0	0,1
5	2,5	0,1	0,1	0	0

Wykrywanie aktywności oksydazy polifenolowej (EC 1.10.3.2)

Oksydaza polifenolowa przenosi wodór bezpośrednio na tlen cząsteczkowy. Substratami w tej reakcji są zwykłe fenole, które utleniają się do chinonów. Chinony kondensując dają barwne pochodne. Enzym jest metaloproteiną, zawierającą miedź.

Zasada:

Oksydaza polifenolowa utlenia pirokatechinę do chinonów, które kondensując dają ciemnobrunatne zabarwienie.

Pirokatechma    o^-Chinon

Wykonanie:

Do 5 probówek odmierzyć podane w tabeli II objętości ekstraktu z ziemniaka, wody, buforu, pi-rokatechiny i 4% roztworu NaCN. Do probówki nr 4 dodać ekstrakt zawierający termicznie zde-naturowane białka. Zawartość wszystkich probówek starannie wymieszać, zanotować czas i pozo-