31431 skanuj0004

Własności spektralne utlenionych i zredukowanych form nukleotydów pirydynowych (różnice w widmie absorpcyjnym) są często wykorzystywane w analityce biochemicznej, np.:

1,    stosując odpowiedni substrat można oznaczyć aktywność specyficznej względem niego dehydrogenazy na podstawie ilości zredukowanego koenzymu powstałego zgodnie z reakcją:

AH₂ # NAD”'« A + NADH +H⁺

(NADP)    (NADPH + H⁺)

2,    stosując określoną oczyszczoną dehydrogenazę łub odpowiedni układ enzymatyczny można oznaczać małe ilości metabolitów selektywnie utlenianych lub redukowanych przez te enzymy z równoczesnym wytworzeniem stechiometrycznych ilości zredukowanego (utlenionego) koenzymu. Przykładem takich sprzężonych reakcji jest układ używany do oznaczania ATP lub glukozy:

ATP % glukoza => ADP + glukozo-6-fosforan glukozo-6-fosforan + NADP^ <■£ 6-fosfoglukonolakton + NADPH lH⁺

Możliatefei MM) wykorzystania nukleotydów pirydynowych w analityce wynikają z ich 3j^PHtBDych właściwości:

zredukowane formy koenzymórwr^^ą^pf^bsorbancję w 340 nm; nie wykazują jej formy utlej8<j§is koenzymów

zredukowane formy    > wykazują wówczas intensywną

flubreseencM „własną”. Formff.łtitetoś^Ml^^SfMl^^waninkach natychmiastowej destrukcji. -Zreduko#iB^enz-ymy-są-hietrwaiiiKj^ii^^^^ip^^ih_rnatomiast.utlenione-wykazują.trwa-łość w niskim pH. Właściwości tc dają.ur^źłiwuśA^zaiftZCiaKiia^^po zakończeniu reakcji, nadmiaru koenzymu ;j^jjsij$awiając do pomiaru niezmienioną ilość trwałej w danych warunkach formy ^MMeotydu - zredukowanej ^w    rt&ljBfeWBti'*^1    w środowisku kwaśnym

zarówno zredukowana jak i ^tlttnpna. pOślać ló^eS^rhhLpoy^^fegP w reakcji może być przekształcona Wrsilnie fluoryzującą pochodną dzięki czemu    .gjjj

rzędu 10"¹⁰ - 1CT⁹ M, có jest szczególnie    jmiJjtfy*iiłiftiillllMMiilTniyil illjBl’li lillflllttlfflftllliirnill'HiWBIMffflI

próbkach tkanek lr$rw pojedynczych komórkach.

1