73777 img075

wytrząsarkę do probówek, zlewka o poj. 2 I Probówki, pipety myć i wyjaławiać wg PN-A-86034-2. pożywki, roztwór 2,2% TTC. mleko UHT (Ultra High Temperaturę) oraz wzorce barwy (A lub B) przygotować wg PN-A-86036

Wykonanie oznaczenia. Rozpoczęcie oznaczenia o godzinie 14 ® w danym dniu oznacza, że pierwsza obserwacja zmiany barwy wypadnie na następny dzień rano o godzinie 8 , a ostatnia po 23 godzinach inkubacji, tj. o godzinie 13“

Do probówki z kapturkiem odmierzyć 4 ml mleka UHT pipetą automatyczną z wyjałowioną końcówką, następnie dodać 1 ml pożywki z TTC oraz 200 pl badanej próbki mleka. Po wymieszaniu probówkę inkubować w temp. 18 °C bez dostępu światła Zanotować czas rozpoczęcia inkubacji. Po 18 h inkubacji wyjąć na moment statyw z probówkami z cieplarki, wymieszać zawartość probówek, lekko potrząsając statywem, po czym wyjąć probówki, których zawartość zabarwiła się na kolor dostrzegalnie różowy i zanotować ich numery (odczyt I po 18 h). Intensywność zabarwienia powinna być równa lub większa niż zabarwienie wzorca barwy (A lub B). Kontynuować inkubację probówek przez dalsze 2 h (odczyt II po 20 h). Kontynuować inkubację probówek, których zawartość me uległa zabarwieniu po 20 h i po dalszych 3 h wykonać jeszcze jeden odczyt (odczyt III po 23 h).

Interpretacja wyników Badane próbki mleka sklasyfikować posługując się kryteriami zawartymi w tabeli 10.

Tabela 10

Zależność między LBO wg metody płytkowej i czasem redukcji TTC odniesiona do schematu klasyfikacyjnego mleka przyjętego w normie PN-A-86002

Klasa mleka	LBO (jtk/ml)	Czas redukcji TTC (h)
E	£100 000	>23
1	£400 000	£23
II	£ 1 000 000	£20
III	> 1 000 000	£ 18

11. Oznaczyć pozostałości antybiotyków fi-laktamowych w mleku świeżym -kolorymetrycznym testem PENZYM (wersja farmerska).

Sprzęt i odczynniki: łaźnia wodna z termoregulacją o temp. 47,5 °C z odpowiednim statywem do probówek, pinceta; zestaw “Penzym" zawiera; 20 fiolek ze zliofilizowanym enzymem DD-karboksypeptydazą, 1 buteleczkę z 22 tabletkami odczynnikowymi, 1 strzykawkę z 20 wymiennymi końcówkami o pojemności 0,2 ml.

Do testu farmerskiego należy używać mleko świeże (pozytywna ocena w próbie alizarolowej). Obecność chloru i wody utlenionej może przeszkodzić właściwym reakcjom enzymatycznym Do rozpuszczenia oddczynników używać wody destylowanej.

Wykonanie oznaczenia. Do uprzednio otwartej fiolki zawierającej zliofilizowany enzym DD - karboksypeptydazę nanieść strzykawką 0,2 ml badanego mleka.

umknąć fiolkę gumowym korkiem wymieszać dokładnie przez wytrząsanie iv /ne. a następnie inkubować w łaźni wodnej, zabezpieczonej przed bezpośrednim działaniem światła, przez 5 min w temp 47.5 °C Po tym czasie dodać za pomocą pęsety 1 tabletkę odczynnikową (substrat i o-dianizydyna), ponownie wymieszać przez wytrząsanie, po czym inkubować w temp 47.5 °C przez dalsze 1h min W 5 oraz 10 minucie inkubacji należy wyjąć fiolkę i wstrząsać przez 3-Mtk w celu ułatwienia rozpuszczenia się tabletki odczynnikowej Po inkubacji określić zabarwienie fiolki

Odczytanie i interpretacja wyniku. Interpretacji wyniku dokonujemy poprzez porównanie z wzorcem barwnym załączonym do każdego opakowania testu. 1' irwa rózowo-pomarańczowa wskazuje na wynik ujemny. Barwa żółta próbki wskazuje na obecność w mleku antybiotyków (ł-laktamowych w granicach 0,008-0,017 j.m./ml. Pośrednie zabarwienie pomiędzy barwą różowopomarańczową n /ółtą wskazuje na obecność antybiotyków w zakresie 0.004-0.015 j.miml mieni W celu usunięcia wątpliwości co do zabarwienia końcowego próby należy pi/ndłużyć inkubację o dodatkowe 3 minuty.

iUstalić klasę mleka surowego w punkcie skupu dostarczanego przez dwóch producentów (A i B) na podstawie wyników badań mikrobiologicznych (4 badania z okresu 2 miesięcy) i cytologicznych (3 badania z okresu 3 miesięcy) próbek mleka (tab. 11).

Tabela 11

Wyniki badań mikrobiologicznych (LBO w tys.jtk/ml) i cytologicznych (LKS w tys./ml)

Wyszczególnienie	LBO		LKS
	A	B	A	B
ai	70	100	300	500
a?	100	85	500	400
aj	85	150	400	250
a4	150	200	380	450
as	99	180	—	-
4r geometryczna

Średnia geometryczna z 4 badań mikrobiologicznych z okresu 2 miesięcy obliczana jest wg wzoru:

średnia geometryczna = </a, *a₂ *a₃ *a₄

Udzie:

•i, pierwszy wynik oznaczania LBO np. w styczniu, n, drugi wynik oznaczania LBO w styczniu.

•i, pierwszy wynik oznaczania LBO w lutym, n< - drugi wynik oznaczania LBO w lutym.