img028 (33)

OZ MACZAM 1 E flMETHEMCGLCB $ !\'¥

WG. EWELl/CNA Q MAIULtDlYA

Zasada oznaczeń i a

MetHb w środowisku kwaśnym ma charakterystyczne maksimum absorbancji przy    długości fali 635 nm, które zanika po

przeprowadzeni u    methemoglobiny cyjankiem sodowym w

cyjanmethemog1obinę (CNMetHb). Różnica absorbancji przed i po dodaniu cyjanku sodowego jest miarą stężenia MetHb.

Odczunn i k i

1. Bufor fosforanowy 1/15M o pH 6,6. Rozpuścić '8,9 g Na-HPO^-IE HgO cz. d. a. i 5,7 g bezwodnego KHgPO^ cz.d.a. w wodzie

destylowanej, uzupełnić do kreski w kolbie na 1000 cm .

£. Bufor fosforanowy 1/60M o pH 6,6. Do jednej objętości buforu 1/15M dodać 3 objętości wody i zmieszać.

3.    Roztwór kwasu octowego 12/ (objętościowo). 12 cin^J lodowatego kwasu octowego rozcieńczyć wodą do 100 cm³ (roztwór A).

4.    Roztwór cyjanku sodowego cz.d.a. 10/.    5 g NaCN rozpuścić w

wodzie destylowanej w kolbie miarowej na 50 crn^ (roztwór B).

5.    Zobojętniony roztwór cyjanku sodowego przygotowany ex tempore. Zmieszać jedną objętość 10/ NaCN (Ej z jedną objętością 12/ CH^COOH (a). Uwaga: dodać kwasu do cyjanku (nie odwrotnie), mieszając pod przykryciem (pod wyciągiem).

6.    Roztwór że 1azi cyjanku potasowego K₃Fe(CN)₆ cz.d.a. £0/ Przyrządzić roztwór 5/ przez rozcieńczenie.

Wykonan i e oznaczeri i a

Pobrać 0,2 cm³ krwi do 10 cm³ buforu fosforanowego 1/60M, zmieszać i po 5 min odczytać absorbancję A₁ przy dł. fali 635 nm. Roztwór krwi rozdzielić do 2 probówek:

a)    do jednej z nich dodać kroplę zobojętnionego roztworu cyjanku sodowego, zmieszać i pozostawić na 2 minuty, po czym odczytać absorbancję A^ przy tej samej długości fali wobec buforu fosforanowego.

b)    do drugiej probówki dodać kroplę K₃Fe(CN)g i odczytać absorbancję d^ przy długości fali 635 nm, następnie dodać 1 kroplę zobojętnionego roztworu cyjanku sodowego i odczytać absorbancję d_£ przy tej samej długości fali. Jako odnośnik stosować bufor fosforanowy.