28061 IMG�49

Egz.nrl

7.2.2. Ocena ilości DNA wyizolowanego.

Wyizolowany DNA poddawany jest analizie ilościowej z użyciem zestawu odczynników wchodzących w skład zestawu Quantifiler Duo DNA Quantlfication Kit firmy Life Technologies według procedury zalecanej przez producenta z wykorzystaniem urządzenia 7500 Real Time PCR System oraz oprogramowania SDS Software v 1.2.3. ww. firmy.

Dla celów kontroli prawidłowości przebiegu badań, jednocześnie z badanym DNA, oznaczeniu ilości poddawane są próbki kontrolne: kontrola negatywna (zawierająca odczynniki użyte na tym etapie badania) oraz próbki kontrolne procesu izolacji.

{    7.2.3. Amplifikacja (powielanie) DNA.

Uzyskany DNA powielany jest metodą PCR (łańcuchowej reakcji polimerazy) z zastosowaniem zestawu AmpFISTR NGM SEIect Amplification Kit firmy Life Technologies w obrębie 16-tu locl STR: D10S1248, vWA, D16S539, D2S1338, D8S1179, D21S11, D18S51, D22S1045, D19S433, TH01, FGA, D2S44, D3S1358, D1S1656, D12S391, SE33 oraz locus AMG (płeć).

DNA powielany jest zgodnie z zaleceniem producenta z wykorzystaniem urządzenia GeneAmp PCR 9700 firmy Applied Biosystems.

Dla celów kontroli prawidłowości przebiegu badań, jednocześnie z badanym DNA, amplifikacji poddawane są próbki kontrolne: kontrola dodatnia (zawierająca DNA |    o znanym stężeniu i profilu), kontrola ujemna (zawierająca odczynniki użyte na

tym etapie badania) oraz próbki kontrolne procesu izolacji.

7.2.4. Elektroforeza kapilarna produktów amplifikacji i analiza uzyskanych wyników.

Powielony DNA rozdzielany jest elektroforetycznie z wykorzystaniem automatycznego sekwenatora 3130 Genetic Analyzer firmy Applied Biosystems. Ocena długości uzyskanych fragmentów DNA oraz przyporządkowanie nazw uzyskanym fragmentom odbywa się z wykorzystaniem: standardu długości GeneScan - 600 [LIZ] Size Standard oraz drabiny alleli AmpFISTR NGM SEIect Allelic Ladder wchodzących w skład zestawu AmpFISTR NGM SEIect PCR

2/15

I AGENCJA BEZPIECZEŃSTWA WEWNĘTRZNEGO    ZAŁĄCZNIK NR ł

•!»IO KADAŃ KRYMINALISTYCZNYCH    OO OPINII NR 1687/I4/KAM/BBK 1687