3582320191

METODY ELEKTROFORETYCZNE

Elektroforeza - wędrówka jonów w polu elektrycznym i proces rozdzielania tych cząsteczek wskutek różnicy szybkości ich migracji.

Zastosowanie elektroforezy - analiza i oczyszczanie makrocząsteczek/białek/kwasów nukleinowych oraz cukrów, aminokwasów, peptydów, nukleotydów, jonów i in.

Szybkość poruszania się cząstki w polu elektrycznym:    u =jji E

gdzie: u [cm/s] - szybkość migracji

Wpływ parametrów środowiska:

F =qE &7irfv =qE ąE

v =—-

67177-

p [m²/s V] - ruchliwość elektroforetyczna E [V/m] - natężenie pola elektrycznego,

F - siła działająca na cząstkę w polu elektrycznym q - ładunek cząstki q - lepkość środowiska r - promień cząstki

Ruchliwość elektroforetyczna (p) jest charakterystyczna dla danego jonu i jest wprost proporcjonalna do jego ładunku q [C], i odwrotnie proporcjonalna do promienia r [pm] _Q

//————

Podział metod elektroforetycznych:    &7RT

•    Elektroforeza swobodna

•    Elektroforeza w nośnikach:

o bibułowa

o żelowa [agarozowy, PAGE]

Etapy elektroforezy:

•    przygotowanie próbki

•    wybór odpowiedniego nośnika i systemu buforów elektroforetycznych

•    rozdział elektroforetyczny

•    detekcja

ELEKTROFOREZA BIBUŁOWA:

Schemat urządzenia do elektroforezy bibułowej:

•    Są to galaretki półprzezroczyste, kruche, nie są tak odporne jak żele poliakrylamidowe

•    Ich głównym składnikiem jest agaroza

•    Stosowana w biologii molekularnej do analizy kwasów nukleinowych

•    immunoelektroforeza białek

• Elektroforeza kwasów nukleinowych na żelach agarozowych:

o Elektroforeza DNA w żelu agarozowym jest standardową metodą pozwalającą na rozdzielenie, identyfikacje lub oczyszczenie fragmentów DNA. o Technika horyzontalna - rozdział według rozmiaru cząsteczek