ÿþW I C Z E N I E 2
I d e n t y f i k a c j a b a k t e r i i : f o r m y m o r f o l o g i c z n e
b a k t e r i i i k o l o n i i
B u d o w a m i k r o s k o p u o p t y c z n e g o b i n o k u l a r o w e g o
B u d o w a m i k r o s k o p u o p t y c z n e g o b i n o k u l a r o w e g o
B a r w i e n i e
B a r w i e n i e
B a r w i e n i e j e s t t o p r o c e s f i z y k o - c h e m i c z n y p o l e g a j c y n a w n i k n i c i u
b a r w n i k a d o w n t r z a k o m ó r k i m i k r o o r g a n i z m u i u t w o r z e n i u b a r w n e g o
k o m p l e k s u z c y t o p l a z m l u b w e w n t r z k o m ó r k o w y m i s t r u k t u r a m i k o m ó r k i .
B a r w i e n i e m a n a c e l u u Ba t w i e n i e o b s e r w a c j i c e c h m o r f o l o g i c z n y c h i
d i a g n o s t y c z n y c h k o m ó r e k m i k r o o r g a n i z m ó w n p . k s z t a Bt u , w i e l k o [c i ,
u Bo |e n i a k o m ó r e k , z d o l n o [c i r u c h u , w y s t p o w a n i a i r o z m i e s z c z e n i a w i c i i
r z s e k , o b e c n o [c i o t o c z e k , a t a k |e s p o s o b u r o z m n a |a n i a p r z e z p o d z i a B,
p c z k o w a n i e ( w y t w a r z a n i e i u Bo |e n i e p c z k ó w ) , z a r o d n i k o w a n i e ( u Bo |e n i e
z a r o d n i k ó w ) o r a z t w o r z e n i a i r o z m i e s z c z e n i a f o r m p r z e t r w a n y c h w
k o m ó r c e .
T y p y b a r w i e n i a
T y p y b a r w i e n i a
B a r w i e n i e p r z y \y c i o w e g d y n a \y w e k o m ó r k i
m i k r o o r g a n i z m ó w n a n i e s i o n e n a s z k i e Bk o p o d s t a w o w e
d z i a Ba m y b a r w n i k i e m
B a r w i e n i e p r e p a r a t ó w u t r w a l o n y c h g d y b a r w i e n i u
p o d d a j e s i u t r w a l o n e ( m a r t w e ) k o m ó r k i d r o b n o u s t r o j ó w .
U t r w a l a n i e
U t r w a l a n i e
U t r w a l a n i e p o l e g a n a t e r m i c z n y m l u b c h e m i c z n y m z a b i c i u m i k r o o r g a n i z m ó w i
p r z y t w i e r d z e n i u i c h d o p o w i e r z c h n i s z k i e Bk a p o d s t a w o w e g o .
C e l e m u t r w a l a n i a j e s t u Ba t w i e n i e s t o s o w a n y m b a r w n i k o m p e n e t r a c j i p r z e z [c i a n
k o m ó r k o w i i c h w n i k n i c i e d o w n t r z a k o m ó r k i o r a z o d s Bo n i c i e w [c i a n a c h
k o m ó r k o w y c h m i k r o o r g a n i z m ó w z w i z k ó w , z k t ó r y m i w i | s i b a r w n i k i .
M e t o d y u t r w a l a n i a :
C h e m i c z n a m e t o d a u t r w a l a n i a p o l e g a n a n a n i e s i e n i u n a w y s u s z o n y r o z m a z
m i k r o o r g a n i z m ó w o d p o w i e d n i e g o o d c z y n n i k a ( n p . f o r m a l i n y , a l k o h o l u , e t e r u ) . P o
k i l k u m i n u t a c h p r e p a r a t w y s y c h a i j e s t p r z y g o t o w a n y d o b a r w i e n i a .
T e r m i c z n a m e t o d a u t r w a l a n i a p o l e g a n a 2 - 3 - k r o t n y m p r z e c i g n i c i u s z k i e Bk a
p o d s t a w o w e g o z w y s u s z o n y m r o z m a z e m m i k r o o r g a n i z m ó w w p Bo m i e n i u p a l n i k a .
S z k i e Bk o p o d c z a s u t r w a l a n i a p o w i n n o b y z w r ó c o n e r o z m a z e m k u g ó r z e .
P o d z i a B t e c h n i k b a r w i e n i a
P o d z i a B t e c h n i k b a r w i e n i a
B a r w i e n i e p r o s t e :
c z y l i m o n o c h r o m a t y c z n e ( j e d n o b a r w n e ) p o l e g a n a
z a s t o s o w a n i u j e d n e g o b a r w n i k a d o w i z u a l i z a c j i k o m ó r e k
m i k r o o r g a n i z m ó w ( b a r w i e n i e p o z y t y w n e ) l u b z a b a r w i e n i a
t Ba p r e p a r a t u ( b a r w i e n i e n e g a t y w n e ) .
B a r w i e n i e z Bo \o n e :
c z y l i p o l i c h r o m a t y c z n e ( w i e l o b a r w n e ) p o l e g a n a
z a s t o s o w a n i u d w ó c h l u b w i c e j b a r w n i k ó w w [c i [l e
o k r e [l o n e j k o l e j n o [c i .
B a r w i e n i e p r o s t e
B a r w i e n i e p r o s t e
" B a r w i e n i e p r o s t e p o z y t y w n e - p o l e g a n a z a b a r w i e n i u k o m ó r e k m i k r o o r g a n i z m ó w
w f o r m i e u t r w a l o n e j z z a s t o s o w a n i e m j e d n e g o b a r w n i k a . T Bo p r e p a r a t u p o
b a r w i e n i u p o z o s t a j e b e z b a r w n e . W y k o r z y s t u j e m y d o t e g o c e l u g Bó w n i e z a s a d o w e
b a r w n i k i a n i l i n o w e ( b Bk i t m e t y l e n o w y , z i e l e D m a l a c h i t o w a , z i e l e D b r y l a n t o w a ,
f u k s y n a z a s a d o w a , c z e r w i e D o b o j t n a , f i o l e t k r y s t a l i c z n y , g o r y c z k o w y i m e t y l o w y ) .
Z a s a d o w e b a r w n i k i w y k a z u j s i l n e p o w i n o w a c t w o d o k w a [n e j c y t o p l a z m y
w e w n t r z k o m ó r k o w e j m i k r o o r g a n i z m ó w t w o r z c z n i t r w a Be , b a r w n e k o m p l e k s y .
" B a r w i e n i e p r o s t e n e g a t y w n e - p o l e g a n a z a b a r w i e n i u t Ba n i e u t r w a l o n e g o
p r e p a r a t u z z a s t o s o w a n i e m j e d n e g o b a r w n i k a i p o w s t a n i u k o n t r a s t u p o m i d z y
w y b a r w i o n y m t Be m i b e z b a r w n k o m ó r k . D o b a r w i e n i a n e g a t y w n e g o
z a s t o s o w a n i e z n a l a z By k w a [n e l u b g r u b o z i a r n i s t e b a r w n i k i ( f u k s y n a k w a [n a ,
e o z y n a , e r y t r o z y n a , c z e r w i e D K o n g o , n i g r o z y n a , K o l a r g o l , t u s z c h i Ds k i ) . N a l e |y
p a m i t a , |e p r e p a r a t b a r w i o n y m e t o d n e g a t y w n n i e j e s t u t r w a l a n y t y l k o
s u s z o n y w p o w i e t r z u a t m o s f e r y c z n y m .
B a r w i e n i e z Bo \o n e
B a r w i e n i e z Bo \o n e
B a r w i e n i e z Bo |o n e p o z y t y w n e p o l e g a n a z a s t o s o w a n i u m i n i m u m d w ó c h
b a r w n i k ó w w c e l u z a b a r w i e n i a k o m ó r e k n a r ó |n e k o l o r y ( b a r w i e n i e
G r a m a ) l u b z a b a r w i e n i a s t r u k t u r w e w n t r z k o m ó r k o w y c h n p .
p r z e t r w a l n i k ó w i c a By c h k o m ó r e k ( b a r w i e n i e W i r t z a / S c h a e f f e r - F u l t o n a ) .
B a r w i e n i e z Bo |o n e , p o z y t y w n o - n e g a t y w n e j e s t p o Bc z e n i e m b a r w i e n i a
p o z y t y w n e g o i n e g a t y w n e g o , p o l e g a n a z a s t o s o w a n i u c o n a j m n i e j d w ó c h
b a r w n i k ó w w c e l u z a b a r w i e n i a k o m ó r e k w e g e t a t y w n y c h i t Ba p r e p a r a t u
n p . w c e l u u w i d o c z n i e n i a o t o c z e k b a k t e r y j n y c h ( b a r w i e n i e B u r r i - G i n s a ) l u b
z a b a r w i e n i a s t r u k t u r w e w n t r z k o m ó r k o w y c h n p . p r z e t r w a l n i k ó w i t Ba
p r e p a r a t u ( b a r w i e n i e D o r n e r a ) .
S p o r u l a c j a p r o c e s t w o r z e n i a
e n d o s p o r y , p r z e b i e g a o n w e d Bu g
n a s t p u j c e g o s c h e m a t u :
I s t a d i u m u w y p u k l e n i e b Bo n y
c y t o p l a z m a t y c z n e j d o w n t r z a k o m ó r k i .
T w o r z y s i p r z e g r o d a
I I s t a d i u m D N A d z i e l i s i n a g e n o f o r
s p o r a n g i u m i g e n o f o r p r e s p o r y
I I I s t a d i u m D N A p r e s p o r y z o s t a j e
o d d z i e l o n e i o t o c z o n e d w i e m a b Bo n a m i
c y t o p l a z m a t y c z n y m i
I V s t a d i u m w e w n t r z n a b Bo n a t w o r z y
[c i a n k o m ó r k o w p r z e t r w a l n i k a , a
z e w n t r z n a d a j e d o [r o d k a k o r t e k s
V s t a d i u m z a k o Dc z e n i e f o r m o w a n i a
k o r t e k s u i o s Bo n b i a Bk o w y c h
V I s t a d i u m o s Bo n k i s t a j s i
n i e p r z e p u s z c z a l n e i c i e p Bo o d p o r n e ,
s i l n i e z a Ba m u j e [w i a t Bo , u s t a n i e
m e t a b o l i z m u i w e j [c i e s t a n a n a b i o z y
V I I s t a d i u m u w o l n i e n i e e n d o s p o r y
s p o w o d o w a n e l i z s p o r a n g i u m
M o r f o l o g i a k o l o n i i
M o r f o l o g i a k o l o n i i
K o l o n i n a z y w a m y z b i ó r k o m ó r e k w y r a s t a j c y c h n a p o d Bo \u s t a By m n a p By t c e P e t r i e g o .
P r z y o p i s i e k o l o n i i n a j w a \n i e j s z e s n a s t p u j c e c e c h y :
1 . W i e l k o [ k o l o n i i d u \e , [r e d n i e , m a Be , d r o b n e , [r e d n i c a k o l o n i i p o d a n a w
m i l i m e t r a c h
2 . K s z t a Bt k o l o n i i :
3 . B r z e g k o l o n i i :
4 . P o w i e r z c h n i a k o l o n i i : g Ba d k a , s z o r s t k a , p o m a r s z c z o n a , n i t k o w a t a , z i a r n i s t a , m a t o w a ,
b By s z c z c a ;
5 . W y n i o s Bo [ k o l o n i i p o n a d p o w i e r z c h n i p o d Bo \a :
6 . K o l o r k o l o n i i : b a r w a s a m e j k o l o n i i n p . b i a Ba , k r e m o w a , b e \o w a , \ó Bt a ; z a b a r w i e n i e
p o d Bo \a w o k ó B k o l o n i i , s t r e f a p r z e j a [n i e n i a w o k ó B k o l o n i i i t p .
7 . P r z e j r z y s t o [ k o l o n i i : p r z e j r z y s t a , m t n a , o p a l i z u j c a , n i e p r z e j r z y s t a ;
8 . K o n s y s t e n c j k o l o n i i s p r a w d z a s i z a p o m o c e z y i o k r e [l a j a k o : s u c h , l e p k ,
[l u z o w a t ;
9 . Z a p a c h k o l o n i i - m y d l a n y , k w a [n y , p i w a , m i o d u , k a s z t a n ó w , g n i l n y ;
1 0 . Z a w i e s z a l n o [ k o l o n i i w p By n i e f i z j o l o g i c z n y m - z d o l n o [ t w o r z e n i a j e d n o l i t e j
z a w i e s i n y w r o z t w o r z e p By n u f i z j o l o g i c z n e g o ( 0 , 8 5 % N a C l ) - Ba t w a l u b n i e ,
g r u d k o w a t a , n i e j e d n o r o d n a .
B a r w i e n i e b Bk i t e m m e t y l e n o w y m
B a r w i e n i e b Bk i t e m m e t y l e n o w y m
B a r w i e n i e z u |y c i e m b Bk i t u m e t y l e n o w e g o j e s t u w a |a n e z a p r o s t e
b a r w i e n i e . M o |n a s t o s o w a g o w c e l u o k r e [l e n i a w y g l d u b a k t e r i i . B Bk i t
m e t y l e n o w y j e s t k a t i o n o w y m b a r w n i k i e m , k t ó r y n a d a j e n i e b i e s k i k o l o r
u j e m n i e n a Ba d o w a n y m p o l i f o s f o r a n o w y m c z [c i o m k o m ó r e k ( t a k i m j a k
k w a s r y b o n u k l e i n o w y ) .
W y n i k - k o m ó r k i b a k t e r i i b a r w i s i n a k o l o r u m i a r k o w a n i e n i e b i e s k i ,
p o d c z a s g d y t Bo m a j a s n o n i e b i e s k i e z a b a r w i e n i e .
B a r w i e n i e z u |y c i e m b Bk i t u m e t y l e n o w e g o s t o s u j e s i j a k o u z u p e Bn i e n i e
b a r w i e n i a m e t o d G r a m a , z w Ba s z c z a w p r z y p a d k u b a r w i e n i a d o t y c z c e g o
b a k t e r i i g r a m - u j e m n y c h , t a k i c h j a k H a e m o p h i l u s i n f l u e n z a e i b a k t e r i e z
r o d z a j u N e i s s e r i a .
B a r w i e n i e p r o s t e
B a r w i e n i e p r o s t e
( A ) S t a p h y l o c o c c u s . e p i d e r m i d i s ( B ) ( C ) B a c i l l u s c e r e u s
M e t o d a b a r w i e n i a G r a m a
M e t o d a b a r w i e n i a G r a m a
U t r w a l e n i e w p Bo m i e n i u ;
p r z y t w i e r d z e n i e b a k t e r i i
d o s z k i e Bk a
D o d a n i e f i o l e t u k r y s t a l i c z n e g o
B a r w n i k w n i k a d o b a k t e r i i
i b a r w i j e n a f i o l e t o w o
D o d a n i e j o d y n y , p Bu k a n i e
J o d y n a t w o r z y k o m p l e k s z
f i o l e t e m k r y s t a l i c z n y m ;
b a k t e r i e p o z o s t a j f i o l e t o w e
N i e k t ó r e b a k t e r i e
N i e k t ó r e b a k t e r i a
p o z o s t a j z a b a r w i o n e
D o d a n i e a l k o h o l u o d b a r w i a j s i
n a f i o l e t o w o
( o d b a r w i a c z ) ; p Bu k a n i e
D o d a n i e s a f r a n i n y ; p Bu k a n i e
B a k t e r i e z a b a r w i o n e n a B a k t e r i e z a b a r w i o n e n a
f i o l e t o w o g r a m d o d a t n i e c z e r w o n o g r a m u j e m n e
B a r w i e n i e G r a m a c . d .
B a r w i e n i e G r a m a c . d .
1 ) F i o l e t k r y s t a l i c z n y j e s t z a s a d o w y m , s Ba b o r o z p u s z c z a l n y m b a r w n i k i e m , k t ó r y
w r o z t w o r z e t w o r z y k a t i o n y . Aa t w o p e n e t r u j e p r z e z [c i a n k o m ó r k o w i
b Bo n c y t o p l a z m a t y c z n b a k t e r i i G r a m - u j e m n y c h i G r a m - d o d a t n i c h w n i k a j c
d o w n t r z a k o m ó r k i . N a t y m e t a p i e w s z y s t k i e k o m ó r k i w y b a r w i o n e s n a
f i o l e t o w o .
2 ) N a s t p n i e n a p r e p a r a t n a n o s i s i p By n L u g o l a , k t ó r y s t a n o w i r o z t w ó r j o d u w j o d k u
p o t a s u . J o n y j o d u Ba t w o p r z e n i k a j d o w n t r z a k o m ó r k i , p o d o b n i e j a k
c z s t e c z k i f i o l e t u k r y s t a l i c z n e g o . K a t i o n y b a r w n i k a r e a g u j z j o n a m i j o d u
t w o r z c w i e l k o c z s t e c z k o w e , n i e r o z p u s z c z a l n e w w o d z i e k o m p l e k s y .
W s z y s t k i e k o m ó r k i n a d a l z a b a r w i o n e s n a k o l o r f i o l e t o w y .
B a r w i e n i e G r a m a c . d .
B a r w i e n i e G r a m a c . d .
3 ) T r z e c i e t a p p o l e g a n a n a n i e s i e n i u o d b a r w i a c z a ( r o z t w o r u a l k o h o l u l u b m i e s z a n i n y
a c e t o n u z a l k o h o l e m ) . O d b a r w i a c z w n i k a w w a r s t w y m u r e i n y b a k t e r i i p o w o d u j c
d e h y d r a t a c j . W w y n i k u u s u n i c i a w o d y n a s t p u j e z a g s z c z e n i e s i e c i m u r e i n y , a t y m
s a m y m z m n i e j s z e n i e p u s t y c h p r z e s t r z e n i w w i e l o w a r s t w o w y c h [c i a n a c h k o m ó r k o w y c h .
P o n a d t o w w y n i k u d z i a Ba n i a o d b a r w i a c z a u b a k t e r i i G r a m - u j e m n y c h z n i s z c z e n i u u l e g a
z e w n t r z n a b Bo n a l i p o p o l i s a c h a r y d o w a e k s p o n u j c c i e n k w a r s t w m u r e i n y . K o m p l e k s
b a r w n i k a z j o d e m z o s t a j e u w i z i o n y p o d z w a r t i g r u b w a r s t w m u r e i n y w k o m ó r k a c h
b a k t e r i i G r a m - d o d a t n i c h , n a t o m i a s t z k o m ó r e k b a k t e r i i G r a m - u j e m n y c h j e s t o n Ba t w o
w y m y w a n y o d b a r w i a c z e m . N a t y m e t a p i e n a s t p u j e w Ba [c i w e z r ó \n i c o w a n i e k o m ó r e k .
K o m ó r k i G r a m - d o d a t n i e z u w i z i o n y m k o m p l e k s e m b a r w n i k a n a d a l m a j z a b a r w i e n i e
f i o l e t o w e , p o d c z a s g d y k o m ó r k i G r a m - u j e m n e s t a j s i b e z b a r w n e p o w y p Bu k a n i u
k o m p l e k s u .
4 ) O s t a t n i m e t a p e m j e s t d o d a t e k b a r w n i k a k o n t r a s t o w e g o s a f r a n i n y . B a r w n i k t e n ,
p o d o b n i e j a k f i o l e t k r y s t a l i c z n y , w y k a z u j e c h a r a k t e r z a s a d o w y , s Ba b o r o z p u s z c z a s i w
w o d z i e , a w r o z t w o r z e t w o r z y k a t i o n y , k t ó r e Ba t w o p e n e t r u j p o p r z e z w a r s t w m u r e i n y i
Bc z s i z u j e m n i e n a Ba d o w a n y m i c z s t e c z k a m i t a k i m i j a k k w a s y t e j c h o j o w e , p e p t y d y
c z y g Bó w k i f o s f o l i p i d ó w . P o n i e w a \ k o l o r s a f r a n i n y j e s t m n i e j i n t e n s y w n y n i \ f i o l e t u
k r y s t a l i c z n e g o k o m ó r k i G r a m - d o d a t n i e p o z o s t a j f i o l e t o w e . B e z b a r w n e k o m ó r k i G r a m -
u j e m n e z a b a r w i o n e s a f r a n i n p r z y j m u j k o l o r r ó \o w y .
Z j a w i s k o G r a m - z m i e n n o [c i
Z j a w i s k o G r a m - z m i e n n o [c i
Z d a r z a s i , \e k o m ó r k i G r a m - d o d a t n i e b a r w i s i m e t o d G r a m a j a k k o m ó r k i G r a m -
u j e m n e . Z j a w i s k o t o n a z y w a m y G r a m - z m i e n n o [c i .
D o t y c z y o n o g Bó w n i e b a k t e r i i z r o d z a j ó w :
B a c i l l u s , C l o s t r i d i u m , C o r y n e b a c t e r i u m i P r o p i o n i b a c t e r i u m .
M o \e b y s p o w o d o w a n a :
w i e k i e m h o d o w l i ( p ó zn e f a z y w z r o s t u ) b r a k i e m w p o d Bo \u s k Ba d n i k ó w
o d \y w c z y c h n i e z b d n y c h d o s y n t e z y [c i a n y k o m ó r k o w e j ( s t o d l a b a k t e r i i
w a r u n k i s t r e s o w e ) m o \e d o t y c z y k o m ó r e k b a k t e r i i b d c y c h w f a z i e
p o d z i a Bu .
E f e k t g r a m - z m i e n n o [c i m o g w y w o Ba t a k i e c z y n n i k i j a k : z b y t d Bu g i e
u t r w a l a n i e p r e p a r a t u w p Bo m i e n i u p a l n i k a l u b z a d Bu g i e t a p o d b a r w i a n i a .
B a r w i e n i e m e t o d G r a m a
B a r w i e n i e m e t o d G r a m a
B a c i l l u s s u b t i l i s E s c h e r i c h i a c o l i
B a r w i e n i e p o z y t y w n o - n e g a t y w n e w c e l u
B a r w i e n i e p o z y t y w n o - n e g a t y w n e w c e l u
u w i d o c z n i e n i a o t o c z e k b a k t e r y j n y c h u
u w i d o c z n i e n i a o t o c z e k b a k t e r y j n y c h u
K l e b s i e l l a o x y t o c a ( m e t . M a n e v a l a )
K l e b s i e l l a o x y t o c a ( m e t . M a n e v a l a )
B a r w n i k A : 1 % c z e r w i e D K o n g o
B a r w n i k B : 5 % w o d n y r o z t w ó r f e n o l u , 2 0 % k w a s o c t o w y , 3 0 % F e C l 3 , 1 %
k w a [n a f u k s y n a
W w y n i k u b a r w i e n i a k o m ó r k i b a k t e r y j n e w y b a r w i a j s i n a c z e r w o n o ,
t Bo p r e p a r a t u j e s t n i e b i e s k i e , z a [ o t o c z k i b a k t e r y j n e p o z o s t a j
b e z b a r w n e .
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