24605

Ćwiczenie nr 10

Oznaczanie ryboflawiny w mleku.

Do analizy otrzymałem dwie próbki mleka oznaczone numerem 10 i 10’. Do dwóch kolbek stożkowych o pojemności 250 cm³ wlałem po 50 cm³ mleka oznaczając je odpowiednio 10 i 10’. Następnie dodałem bez wstrząsania 50 cm³ alkoholu metylowego, po czym obie zlewki ogrzewałem na łaźni wodnej w temperaturze 60 °C przez 15 minut. Po oziębieniu obu kolbek dodałem do każdej z nich 0,1 cm³ lodowatego kwasu octowego i 10 cm³ metanolu. Po zamknięciu kolbek korkami wstrząsnąłem je energicznie i pozostawiłem na 30 minut do opadiuęcia osadu. Po tym czasie przystąpiłem do przesączania zawartości moich kolbek. Próbki przesączyłem do kolby okrąglodennej o pojemności 250 cm³, a pozostały osad przemyłem trzykrotnie 10 cm³ porcjami 75% metanolu.

Zebrane przesącze zagęszczałem w temperaturze 60 °C przy użyciu wyparki rotacyjnej. Musiałem bardzo uważać aby część roztworu w postaci piany nie przeleciała do odbieralnika wyparki z powodu zbyt bardzo obiużonego ciśnienia. Zagęszczanie zakończyłem gdy w kolbie pozostało około 15 cm³ roztworu, który przeniosłem ilościowo do kolbki miarowej o pojemności 25 cm³. Dodałem 0,5 cm³ lodowatego kwasu octowego oraz 1 cm³ 4% roztworu nadmanganianu potasowego i całość wymieszałem. Po upływie 1 minuty dodałem 1 cm³ 3% roztworu nadtlenku wodonr i uzupełniłem wodą do 25 cm³. Po dokładnym wymieszaniu wyznaczyłem na spektrokolorymetrze ekstynkcję przy /.=445 nm. Ekstynkcja wynosiła 0,105 i 0,085

ZR t

376,4 *EHV

V* gdzie:

ZR - zawartość ryboflawiny w mleku wyr ażona w miligr amach na litr 376,4 - masa cząsteczkowa ryboflawiny E - ekstynkcja badanego roztworu W- współczynnik przeliczeniowy = 500 £ - molowy współczynnik ekstynkcji ryboflawiny = 12200 1 - grubość warstwy absorbującej w centymetrach

ZR t    t 1-619mg/l

Zawartość ryboflawiny w badanych przeze mnie próbach wynosiła 1,619 mg/l oraz 1,31 lmg/1

l