34807

-    wyizolowane DNA z poprzednich ćwiczeń

-    pipety P-2, P-10, P-20

-    końcówki do pipet P-2, P-10, P-20

-    pojemnik na odpady

-    rękawiczki laboratoryjne

Erasfidma

^ przygotowanie 1,5% żelu agarozonego

1.    Przygotować fonnę do wylania żelu agarozowego i umieścić ją w zacisku.

2.    Naważyć 0,75g agaiozy, dodać 50 ml bufom TBE.

3.    Podgrzewać roztwór w kuchence mikrofalowej aż do całkowitego rozpuszczeiua agarozy.

4.    Po schłodzeniu roztworu do ok. 60(naczynie można utrzymać w dłoni) dodać 5 roztworu bromku etydyny.

5.    Żel wylać na płytkę (podstawka aparatu do elektroforezy), nałożyć grzebienie.

6.    Pozostawić do zastygnięcia (polimeryzacji). W żelu nie powinno być żadnych pęcherzyków powietrza.

7.    Po zastygnięciu żelu (ok. 20 min.) ostrożnie wyjąć grzebienie oraz wyjąć formę z zacisków^r.

8.    Umieścić płytkę z żelem w aparacie do elektroforezy i zalać buforem (1 xTBE), tak aby żel był 2-3 mm pod powierzchnią bufom.

^ przeprowadzenie elektroforezy w 1,5% tein agarozowym

1 Do 10 ^ próbki DNA dodać 2 4 bufom obciążającego z roztworem bar wnika (0,02% błękit bromofenolowy w 40% glicerolu).

2.    12^ przygotowanej próbki nanieść do kieszonek na żel.

3.    Do pierwszej kieszonki nanieść 5 4 markera (standard wielkości).

4.    Zamknąć aparat, prowadzący sprawdza czy kable są odpowiednio podłączone do zasilacza.

5.    Ustawić napięcie na 100 V i czas elektroforezy na ok. 15-20 minut.

6.    Po zakończonej elektroforezie odłączyć aparat od prądu

7.    Żel wyjąć ostrożnie z aparatu i obejrzeć na transilmninatorze UV.

Pytania:

1 Dlaczego w żelu agarozowym nie powinno być żadnych pęcherzyków powietrza?

2.    W jakim celu używany jest standard wielkości?

3.    Jakie są różnice między żelem agaiozow^rym a poliakrylamidowym?