Spis treści
8.12. Uwalnianie białek ze struktur błonowych Thermus ruber............................ 55
8.13. Permeabilizacja komórek Thermus ruber............................................... 56
8.14. Otrzymywanie surowych preparatów a-glukozydazy................................. 56
8.15. Frakcjonowanie białek ekstraktu bezkomórkowego siarczanem (VI) amonu...... 57
8.16. Oczyszczanie enzymu o aktywności a-glukozydazy.................................. 57
8.17. Wyznaczanie masy cząsteczkowej a-glukozydazy.................................... 58
8.18. Elektroforeza białek w żelu poliakrylamidowym w warunkach denaturujących
(SDS-PAGE)............................................................................... 59
8.19. Izolowanie i podczyszczanie syntazy trehalozy........................................ 60
8.20. Oznaczanie aktywności hydrolizy nitrofenylopiranozydów.......................... 61
8.21. Oznaczanie aktywności a-glukozydazy w komórkach Thermus ruber............. 62
8.22. Oznaczanie aktywności glikozydaz względem disacharydów
i oligosacharydów........................................................................... 62
8.23. Oznaczanie aktywności amylolitycznej względem polisacharydów................ 63
8.24. Oznaczanie aktywności syntazy trehalozy.............................................. 63
8.25. Identyfikacja produktów konwersji sacharydów....................................... 64
8.26. Oznaczanie aktywności proteolitycznej................................................. 65
8.27. Wyznaczanie optymalnej temperatury i pH............................................. 65
8.28. Badanie wpływu temperatury i pH na stabilność enzymów........................... 65
8.29. Wyznaczanie stałych kinetycznych...................................................... 66
8.30. Badanie specyficzności substratowej.................................................... 66
8.31. Oddziaływanie kationów.................................................................. 66
8.32. Wpływ inhibitorów i innych substancji.................................................. 67
8.33. Wpływ niektórych węglowodanów...................................................... 67
8.34. Badanie wpływu czasu reakcji na skład produktów konwersji 1 % roztworu 68
maltozy.......................................................................................
9. OMÓWIENIE I DYSKUSJA WYNIKÓW.............................................. 69
9.1. Hodowla termofilnej bakterii Thermus ruber.......................................... 69
9.2. Określenie profilu enzymatycznego Thermus ruber................................... 72
9.3. Wpływ warunków hodowli na wydajność a-glukozydazy........................... 74
9.4. Wybór sposobu izolacji a-glukozydazy z Thermus ruber............................ 78
9.5. Oczyszczanie a-glukozydazy z Thermus ruber........................................ 81
9.6. Warunki działania a-glukozydazy z Thermus ruber................................... 87
9.7. Właściwości a-glukozydazy z Thermus ruber.......................................... 90
9.8. Wpływ niektórych kationów na aktywność a-glukozydazy.......................... 94
9.9. Oddziaływanie niektórych substancji na aktywność a-glukozydazy................ 96
9.10. Wpływ substancji denaturujących białka na aktywność a-glukozydazy............ 97
9.11. Zmiany aktywności a-glukozydazy pod wpływem węglowodanów................ 99
9.12. Aktywność enzymatyczna permeabilizowanych komórek Thermus ruber......... 100
9.13. Wpływ warunków hodowli na ilość wytworzonej syntazy trehalozy............... 101
9.14. Izolacja syntazy trehalozy z Thermus ruber............................................. 104
9.15. Właściwości syntazy trehalozy wyizolowanej z Thermus ruber..................... 106
9.16. Warunki działania syntazy trehalozy z Thermus ruber................................ 108
11. DOROBEK NAUKOWY.................................................................... 113
12. PIŚMIENNICTWO........................................................................... 115
4