3184153052

472 R. DĄBROWSKA [6]

LC_A1 i LC_A2 niezbędne są dla aktywności enzymatycznej miozyny, podczas gdy łańcuch LC_DTNB można usunąć bez utraty tej aktywności (29).

Spośród lekkich łańcuchów miozyny mięczaków poznano dotąd tylko rolę LC_edta. Posiada on kluczowe znaczenie w regulacji cyklu skurczowo-rozkurczowego mięśni tych zwierząt; jego usunięcie pozbawia miozynę w połączeniu z aktyną wrażliwości na działanie jonów wapnia oraz zmniejsza zdolność wiązania tego kationu z 1,67 p.mola/g do 0,78 p-mola/g miozyny (27). Po rekombinacji „odczulonej” miozyny i LC_EDTa w obecności dwuwar-tościowych kationów obydwie te właściwości zostają przywrócone. LC_EDTA, mimo że ani sam nie posiada właściwości enzymatycznych ani nie wiąże jonów wapnia, działa jako podjednostka miozyny regulująca skurcz, hamując interakcję miozyny z aktyną tylko w nieobecności jonów wapnia, podobnie jak to czyni kompleks białek troponina—tropomiozyna regulujący skurcz mięśni szkieletowych kręgowców. Sposób, w jaki jony wapń i LC_edta regulują interakcję aktyny z miozyną mięczaków nie został jeszcze zbadany. Istnieją hipotezy, że LC_EDTA w nieobecności jonów wapnia łączy się z obydwoma globularnymi subfragmentami miozyny (S[), wpływając na nie w taki sposób, że nie mogą one reagować z aktyną (27). Taka sytuacja odpowiada stanowi rozkurczu mięśni (Ryc. 4a). Pod wpływem jonów wapnia następują zmiany konformacyjne w LC_EDTA, powodujące odsłanianie tych miejsc miozyny, które reagują z aktyną a w konsekwencji powodują skurcz mięśni (Ryc. 4b).

Ten mechanizm regulacji nie wymaga obecności tropomiozyny, nie obserwuje się też kooperatywności między monomerami aktyny. Jeden LC_edta blokuje jedną cząsteczkę miozyny.

II. Sposoby klasyfikacji systemów regulacji

Aktyna stymuluje aktywność enzymatyczną miozyny zależnie od typu mięśni od kilku do kilkuset razy (1). Miarą interakcji aktyny z miozyną in vitro jest więc poziom aktywności ATP-azy aktomiozynowej w obecności ATP.

II-1. Kompctycyjna aktywacja aktomiozyny przez aktynę

Test ten służy do identyfikacji systemu regulacji związanego z miozyną i polega na mierzeniu wpływu nadmiaru czystej aktyny na aktywność enzymatyczną miofibryli lub aktomiozyny wyizolowanej z badanych mięśni. W przypadku występowania systemu regulacji związanego z miozyną, w nieobecności jonów wapnia, dodana aktyna nie może reagować z miozyną obecną w badanym systemie (patrz rozdz. 1-2) i aktywność ATP-azy aktomiozynowej jest niska. Podwyższenie poziomu aktywności ATP-azy następuje dopiero po wprowadzeniu do środowiska jonów wapnia (Ryc. 5a)