3870137235

38

A. EJCHART

F2

Rysunek 9. Widma HN(CO)CA o zredukowanej wymiarowości dla podwójnie znakowanej ubikwityny. Widma pozwalają na skorelowanie przesunięć chemicznych jąder ^lH i ¹⁵N grup amidowych z przesunięciami chemicznymi C_a poprzedzającej reszty aminokwasowej (patrz Tab. 2). Każde z widm zawiera sygnały korelacyjne o częstościach będących za każdym razem inną kombinacją liniową częstości jąder „zredukowanych”, w tym przypadku ^,5N i C_u. Przez częstości jąder rozumie się różnice pomiędzy częstościami rezonansowymi i nośnymi wyrażone w Hz; widmo A zawiera sumę częstości, a widmo B -różnicę. Przykład liczbowy przedstawiony dla sygnału o najmniejszej wartości przesunięcia chemicznego H_N (najbardziej na prawo) korelującego reszty Gly35-lle36 pozwala zrozumieć ideę zredukowanej wymiarowości

«^I5N) - [Sfi*N) + ą(^,5N)]/2 = (95,44 + 144,95)/2 = 120,19.

s(»c)=ą/^,5q+m“n)- 6finmw*wK'*Qi

>dzie S_rf}K) oznacza położenie częstości nośnej impulsu węglowego na skali przesunięć chemicznych, w tym przypadku ustawione przy 56,00 ppm, zaś /(^,5N)//(^ł3C) jest stosunkiem częstości rezonansowych dwóch izotopów wynoszącym 0,404. Ostatecznie ĄⁿC) = 56,00 + (120,19- 144,95)0,404 = 46,00

Dwuwymiarowe widma NOESY średnich białek mają tak dużą liczbę sygnałów korelacyjnych, że ich pełna identyfikacja staje się niemożliwa. Dlatego korzystając z obecności izotopów ^}5N i ¹³C widma dwuwymiarowe rozciąga się w trzecim i ewentualnie w czwartym wymiarze stosując redagowanie izotopowe (Tab. 3), dzięki czemu każdy sygnał korelacyjny jest identyfikowany nie przez dwa a przez trzy lub czteiy przesunięcia chemiczne, co w znaczący sposób zmniejsza nakładanie się sygnałów. Fragment trójwymiarowego ^I5N-redagowanego widma NOESY jest przedstawiony na Rys. 10. Izotopowo redagowane widma NOESY stanowią podstawowe źródło informacji strukturalnych dostarczając dane o odległościach pomiędzy protonami w białkach [20, 26, 27].