Aktywność enzymatyczna.
Anna Harazim nr indeksu 193210
Sandra Stefaniak nr indeksu 193332 Prowadzący: mgr inż. Zofia Dziuganowska
Doświadczenie 1.
Materiały:
Wyciąg z ziemniaków
0,1M bufor fosforanowy
0,3% roztwór pirokatechiny
Woda destylowana
Czynności:
Obserwacje:
| Nr próby | Wyciąg z ziemniaka (ml) | Woda (ml) | Bufor fosforanowy (ml) | Pirokatechina (ml) | Wynik |
|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 3 | 0 | 0,5 | 1 | ciemnobrązowy |
| 2 | 3 | 1 | 0,5 | 0 | bez zmian |
| 3 | 3 | 0 | 0,5 | 1 | bez zmian |
| 4 | 3 | 0 | 0,5 | 1 | jasnobrązowy |
Wnioski:
Oksydaza polifenolowa jest enzymem, który uczestniczy w utlenianiu powietrzem substancji zawierających ugrupowania polifenolowe. Ich utlenianie odpowiedzialne jest za ciemnienie np. świeżo obranych warzyw (ziemniaki). W wyniku utleniania syntezują się melaniny, które są barwnikami nadającymi kolor od jasnobeżowego do ciemnobrązowego.
W probówkach 1-3 szybciej postępowało utlenianie, ponieważ zawartość została wymieszana, aby ułatwić dostęp do tlenu. Różnice widać na przykładzie próbek 1 i 4, które mają taki sam skład, lecz utleniają się z różną szybkością i wydajnością. W próbie nr 3 enzym został dezaktywowany działaniem wysokiej temperatury (100°C). Ta próba została wykonana po to, aby zobaczyć, czy substrat (pirokatechina) sam nie reaguje. Próba nr 2 – kontrolna – bez substratu, ale z zachowanie objętości (H2O) – nie zachodzi.
Doświadczenie 2.
Próba benzydynowa.
Materiały:
Wyciąg z ziemniaków
Odczynnik benzydynowy
Czynności:
Obserwacje:
Wnioski:
Doświadczenie 3.
β-amylaza z nasion zbożowych.
Materiały:
Wyciąg z nasion
Woda destylowana
0,5% roztwór skrobi
Płyn Lugola
Odczynnik Benedicta
Czynności:
Obserwacje:
Wnioski:
Doświadczenie 4.
Inwertaza z drożdży.
Materiały:
Wyciąg z drożdży
Woda destylowana
Bufor octanowy (pH=4,4)
Roztwór skrobi
Roztwór sacharozy
Roztwór węglanu sodu
Odczynnik Benedicta
Czynności:
Do każdej z 4 ponumerowanych probówek dodałyśmy po 1ml wyciągu z drożdży. Następnie 4 probówkę dałyśmy do łaźni wodnej w celu podgrzania inwertazy. Po zagotowaniu do wszystkich probówek dodałyśmy podane ilości wody, buforu octanowego, skrobi i sacharozy. Próby pozostawiłyśmy w temperaturze pokojowej na 30 minut. Po inkubacji zobojętniłyśmy roztwory w probówkach węglanem sodu i wykonałyśmy próbę Benedicta.
Obserwacje:
| Nr próby | Enzym (ml) | Woda (ml) | Bufor (ml) | Skrobia (ml) | Sacharoza (ml) | Próba Benedicta |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 1 | 1 | 1 | 1 | 0 | 0 | bez zmian |
| 2 | 1 | 0 | 1 | 1 | 0 | bez zmian |
| 3 | 1 | 0 | 1 | 0 | 1 | ceglasty osad |
| 4 | 1 | 0 | 1 | 0 | 1 | bez zmian |
Wnioski:
Źródłem inwertazy są komórki drożdży. Katalizuje ona hydrolizę sacharozy do glukozy i fruktozy (proste cukry redukujące). Do aktywacji potrzebuje kwaśnego pH, dlatego w tym celu użyłyśmy buforu octanowego o pH=4,4. Próba Benedicta wykrywa obecność cukrów redukujących. Z doświadczenia wynika, że jedynie sacharoza rozkłada się na cukry redukujące (próba nr 3). W próbce nr 4 dezaktywowaliśmy inwertazę katalizującą reakcję. Natomiast próbka nr 1 i 2 jest próbą kontrolną.
Doświadczenie 5.
Enzymatyczna hydroliza skrobi przez α-amylazę śliny.
Materiały:
1% roztwór skrobi
Ślina
Odczynnik Benedicta
Płyn Lugola
Czynności:
Do 4 probówek dodałyśmy odrobinę śliny. Dwie z nich wstawiłyśmy do łaźni na 5min, aby zagotować. Następnie do każdej z czterech próbówek dodałyśmy 3ml roztworu skrobi i zamieszałyśmy. Po 10 minutach na jednej probówce z niezagotowaną i jednej z zagotowaną śliną przeprowadziłyśmy próbę Benedicta. To samo zrobiłyśmy dla próby Lugola.
Obserwacje:
Bez gotowania:
1-próba Benedicta bez zmian (powinien pojawić się ceglasty osad)
2-próba Lugola bez zmian
Po podgrzaniu:
1-próba Benedicta bez zmian
2-próba Lugola bez zmian (powinna być fioletowa barwa)
Wnioski:
Bez gotowania:
1-próba Benedicta Powinien pojawić się ceglasty osad, który w próbie Benedicta wykazuje obecność cukrów redukujących.
2-próba Lugola Barwa pozostaje bez zmian, ponieważ amylaza rozłożyła skrobię.
Po podgrzaniu:
1-próba Benedicta Brak zmian barwy, ponieważ cukry po podgrzaniu rozpuściły się.
2-próba Lugola Powinno pojawić się fioletowe zabarwienie, świadczące o obecności skrobi, gdyż amylaza po podgrzaniu uległa denaturacji. Skrobia w tym przypadku nie powinna zostać rozłożona.