Obraz1

b. określenie efektywności działania tego reaktora poprzez wyznać nie zależności stopnia hydrolizy substratu od czasu przebywania x = V/F ( lub oc ybkości przepływu substratu przez kolumnę reaktora) i wyznaczenie takiej szybkości przepływu substratu przy której, w danej temperaturze, ulega on w 90 % hydrolizie.

2. Część eksperymentalna

2.1.    Odczynniki i sprzęt

♦    Komórki drożdży immobilizowane w alginianie wapnia - otrzymane na poprzedniej pracowali

♦    0,1 M roztw'ór sacharozy w 0,05 M buforze octanowym o pH 5,0, zawierającym 5mM CaCl₂

♦    Odczynnik DNS do oznaczania cukrów redukujących - jak na poprzednich pracowniach

♦    0,2 M roztwór glukozy (kontrola-odpowiadająca całkowicie zhydrolizowanej 0,1M sacharozie

♦    Kolumna chromatograficzna 0 0,9 x 30 cm z płaszczem wodnym, zaopatrzona w adaptor

♦    Pompa perystaltyczna z możliwością regulacji przepływu w granicach 0,5-50 ml/min

♦    Pompa perystaltyczna (jednokanałowa) do wymuszania obiegu wody w-’ płaszczu wodnym kolumny (lub ultratermostat z pompką)

♦    Łaźnia wodna lub termostat o dokładnej regulacji temperatury nastawione na 37° C

♦    Łaźnia wodna nastawiona na 95° C

♦    Spektrofotometr

♦    Pipety automatyczne, probówki, szkło laboratoryjne

2.2.    Postępowanie

a.    Zmontować reaktor według schematu przedstawionego na Rys.3).

♦    do wewnętrznej rury kolumny wlać około 10 ml 10 mM roztworu chlorku wapnia, kolumnę upakowuć perełkami ałginianu wapnia z immobilizowanymi komórkami drożdży (przy pomocy bagietki)

« umieścić w łaźni wodnej (37° C) zbiornik z roztworem sacharozy i połączyć go przy pomocy wężyka i adaptora, poprzez pompę perystaltyczna, z kolumną. Zwrócić uw-agę na szczelność połączeń

♦    do płaszcza kolumny podłączyć węże o odpowiedniej średnicy i poprzez drugą pompę perystaltyczna zapewnić właściwy obieg wody, pobieranej z łaźni o temp. 37° C

♦    uruchomić obie pompy (ustawić minimalny przepływ substratu), w celu wyrównania temperatuiy w reaktorze - około 10 min.

b.    Wyznaczyć szybkość przepływu substratu przez kolumnę (w ml/min) przy danym ustawieniu pompy, w przypadku pompy typu PP 1-05, ustawić górny przełącznik na 10x, a dolny kolejno na 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2,

c.    Przygotować 2x11 probówek zawierających po 2 ml odczynnika DNS

d.    Ustawić pompę perystaltyczna na „10”, na maksymalny przepływ roztworu substratu. Włączyć pompę, po zebraniu około 50 ml wycieku do cylindra (przemycie kolumny), dalszy wyciek zebrać do probówki (około 10 ml) - próba nr 1.

Nie wyłączając pompy zmienić szybkość pompowania na „9” . przemyć kolumnę 30 - 50 ml porcją roztworu substratu po czym zebrać, jak poprzednio, około 10 ml porcję wycieku do analizy (próba nr 2).

W ten sposób przemywać kolumnę i zbierać wyciek do analizy przy kolejno ustawionych szybkościach przepływu substratu (Uwaga - po zmianie szybkości przepływu substratu -kolumna musi być przemyta tym roztworem o objętości równej co najmniej 2 objętościom złoża) .