1

Ćwiczenie 7

Temat: Podstawy antybiotykoterapii, lekooporność bakterii

Demonstracja i omówienie:

1. Antybiogram - metoda dyfuzyjno-krążkowa

CZĘŚĆ PRAKTYCZNA

Zadanie 1.

Oznaczanie lekooporności bakterii metodą dyfuzyjno-krążkową

Cel: Określenie oporności nabytej badanych szczepów

Wykonanie: praca w grupach 2 osobowych (każda grupa wykonuje antybiogram dla 1

drobnoustroju)

Materiał:

płytki z podłożem Mueller-Hintona

roztwór fizjologiczny soli

skala Mac Farlanda (0,5 McF)

krążki z antybiotykami

jałowe wymazówki

linijka

rekomendacje dotyczące wyboru krążków z antybiotykami (wg EUCAST – The European

Committee on Antimicrobial Susceptibility Testing)

hodowle badanych szczepów na podłożu stałym:

1. Szczep należący do rodziny Enterobacteriaceae (………………………….), izolowany w

ilości 10

5

/ml z moczu od 2-letniego dziecka z objawami zakażenia układu moczowego

2. Szczep należący do rodziny Enterobacteriaceae (…………………………)., izolowany w

ilości 10

6

/ml z moczu od 30-letniego mężczyzny z objawami zakażenia układu moczowego

3. Szczep należący do rodziny Enterobacteriaceae (………………………….) izolowany z

cewki moczowej od 52-letniego mężczyzny z objawami zakażenia układu moczowego

4. Szczep należący do rodzaju Staphylococcus (………………………………), izolowany z krwi

od 63 letniego pacjenta z objawami endocarditis

5. Szczep należący do rodzaju Staphylococcus (……………………….), izolowany od

mężczyzny z ropnia otrzewnej

6. Szczep należący do rodzaju Staphylococcus (………………………………..), izolowany z

przetoki po złamaniu kości u 15 letniego chłopca

2

Oznaczanie lekooporności bakterii metodą dyfuzyjno-krążkową

Przygotować zawiesinę badanego szczepu w fizjologicznym roztworze soli o gęstości 0,5 w skali

MacFarlanda. Rozprowadzić wymazówką zawiesinę na powierzchni podłoża Mueller-Hintona,

tak, by cała powierzchnia była pokryta badanym szczepem bakterii. Nakładać wcześniej opaloną,

jałową pensetą krążki z antybiotykami według schematu (Ryc.1). Krążki lekko docisnąć do

podłoża końcem pensety. Płytki inkubować 24 godz. w 35°C. (ODCZYT NA NASTĘPNYCH

ĆWICZENIACH). Odczytać za pomocą linijki wielkość (średnica w mm) stref zahamowania

wzrostu i zinterpretować korzystając z odpowiednich wartości referencyjnych (EUCAST).

Wyniki zapisać w tabeli

1.

Ryc.1

3

Tabela 1

Grupy

antybiotyku

Antybiotyk

Drobnoustrój

1.

2.

3.

4.

5.

6.

mm

*

mm

*

mm

*

mm

*

mm

*

mm

*

mm – średnica strefy zahamowania wzrostu podana w milimetrach

* szczep wrażliwy (W), szczep średniowrażliwy (SW), szczep oporny (O)

Zadanie 2

.

Odczytanie antybiogramu

Cel: wykrycie oporności nabytej oraz interpretacja mechanizmów oporności

Wykonanie: praca w grupach 2 osobowych (każda grupa odczytuje antybiogram dla 1 szczepu)

Materiał:

gotowe antybiogramy

linijka

wytyczne dotyczące wyboru krążków z antybiotykami do antybiogramu

(Rekomendacje według EUCAST)

4

Tabela 2

G

rupa

ant

y

bi

ot

y

ku

A

nt

yb

io

tyk

Drobnoustrój/

mm / wynik

1.

S. aureus

2.

S. aureus

3.

Enterococcus

4.

Enterococcus

5.

Klebsiella

(Enterobacteriaceae)

6.

Klebsiella

(Enterobacteriaceae)

Interpretacja*

Wynik: szczep wrażliwy (W), szczep średniowrażliwy (SW), szczep oporny (O)

* MRSA, MSSA, HLAR, VRE, ESBL (-), ESBL (+)

Zadanie 3.

Odczytanie wartości MIC (ang. Minimal Inhibitory Concentration)

Cel: zapoznanie się z zasadą odczytu wartości MIC interpretacją testu

Wykonanie: praca w grupach 2 osobowych (każda grupa odczytuje MIC antybiotyku dla 1

drobnoustroju)

Materiał:

gotowe płytki z podłożem Mueller-Hintona zawierające paski do oznaczania MIC (1-6)

wartości MIC dla danych antybiotyków (Rekomendacje według EUCAST)

5

Tabela 3

Grupy

antybiotyków

Antybiotyk

Drobnoustrój/ wartość MIC

1

2

3

4

5

6

Wynik

*

* wrażliwy (W), średniowrażliwy (SW), oporny (O)