Temat: Analiza mikrobiologiczna poszczególnych grup fizjologicznych bakterii - bakterie amylolityczne, redukujące siarczany, amonifikacyjne, dentryfikacyjne.
Celem ćwiczenia jest sprawdzenie obecności w wodzie rzecznej bakterii posiadających właściwości amylolityczne, amonifikacyjne, denitryfikacyjne zdolności do redukcji siarczanów oraz zdolności do rozkładu mocznika.
Wykonać rozcieńczenie wody rzecznej od 10-1 - 10-4. W tym celu 1 ml wody z rzeki zawiesić sterylnie w 9 ml soli fizjologicznej, uzyskując w ten sposób rozcieńczenie 10-1. Zawiesinę dobrze zamieszać, procedurę powtórzyć aż do uzyskania rozcieńczenia 10-4.
Analiza właściwości amonifikacyjnych bakterii - oznaczanie miana bakterii amonifikacyjnych: wykonać posiewy 1 ml zawiesiny z rozcieńczeń 10-3 - 10-4 do probówek z wodą peptonową. Paski bibułowe nasączone octanem ołowiu umieścić PENSETĄ w probówce, zaczepiając jeden jego koniec o brzeg probówki w taki sposób, by drugi koniec nie dotykał płynu. Inkubować przez 7 dni w temperaturze 27˚C. Odczytać miano bakterii amonifikacyjnych jako ostatnie rozcieńczenie, w którym nastąpiła zmiana barwy paska wskaźnikowego na czarny. *Odczyt właściwości bakterii prowadzi się na porcelanowej płytce (załącznik do następnego ćwiczenia)
Oznaczanie miana bakterii rozkładających mocznik: wykonać posiewy 1 ml zawiesiny z rozcieńczeń w dwóch powtórzeniach 10-3 - 10-4 do probówek z podłożem mocznikowym. Inkubować przez 7 dni w temperaturze 27˚C. Odczytać miano bakterii rozkładających mocznik jako ostatnie rozcieńczenie, w którym nastąpiła zmiana zabarwienia podłoża. Kontrolą jest jałowa pożywka
Oznaczanie miana bakterii denitryfikacyjnych: wykonać posiewy 1 ml zawiesiny z rozcieńczeń w dwóch powtórzeniach 10-3 - 10-4 do probówek z podłożem z saletrą potasową. Inkubować przez 7 dni w temperaturze 27˚C. Kontrolą jest jałowa pożywka. *Odczyt właściwości bakterii prowadzi się na porcelanowej płytce (załącznik do następnego ćwiczenia)
Oznaczanie miana bakterii redukujących siarczany: wykonać posiewy 1 ml zawiesiny z rozcieńczeń oraz 10-3 - 10-4 do probówek z podłożem Boarsa. Inkubować przez 7 dni w temperaturze 27˚C. Odczytać miano bakterii utleniających siarczany jako ostatnie rozcieńczenie, w którym nastąpiło wytrącenie czarnego siarczku żelaza (I).
Analiza właściwości amylolitycznych bakterii: Wykonać posiew powierzchniowy metoda płytek tartych 0,1 ml zawiesiny z rozcieńczeń 10-2 i 10-3 w dwóch powtórzeniach na płytki z podłożem skrobiowym. Inkubować przez 7 dni w temperaturze 27˚C. Po okresie inkubacji podłoże zalać płynem Lugola. Po upływie kilku minut odczytać wynik licząc kolonie, wokół których wystąpiła żółta strefa. Zabarwienie granatowe świadczy o braku rozkładu skrobii.