ROZWIĄZANIA by A.T.
Tu są skopiowane p ytania z wszystkich wcześniejszych plików i w całości rozwiązane przeze mnie (bo z częścią odpowiedzi się nie zgadzałam). Wg mnie to są prawidłowe odpowiedzi.
1. Pirosekwencjonowanie:
a) jednorazowo sekwencjonuje się odcinki DNA krótsze niż przy zastosowaniu metody Sangera b) ciąg identycznych zasad w matrycy daje sygnał o sile wprost proporcjonalnej do jego długości (np. po dodaniu dCTP sekwencja GGGGT da 4 razy silniejszy sygnał
chemiluminescencyjny niż GTCAT)
2. Nukleaza SI
a) może być użyta do lokalizacji sekwencji intronowych
b) może degradować ssDNA i ssRNA i powstają produkty posiadające sekwencje P-5’
c) DNA:DNA, RNA:RNA i DNA:RNA są odporne na działanie tego enzymu
b) jest egzonukleazą
e)używana do odtrawiania fragmentów kw.nukleinowych ,które maja forme pojedynczej nici 3. Który ze związków może być użyty jako substrat do enzymatycznego znakowania izotopem P32 fragmentu DNA o końcach tępych?
a) dATP znakowany P32 w pozycji g
b) ATP znakowany w pozycji a
c) dGTP znakowany w pozycji a (terminalna transferaza)
d) [g-P32] -ATP
e) [a-P32]-dATP (terminalna transferaza)
4. Wektor plazmidowy poddany linearyzacji enzymem EcoRI został użyty do ligacji z DNA powstałym w wyniku hybrydyzacji dwóch syntetycznych oligonukleotydów. Syntetyczny dsDNA został tak zaprojektowany, że posiada końce identyczne z końcami wektora EcoRI. Mieszaniną poligacyjną poddano transformacji komórki bakteryjne i wylano je na podłoże zawierające odpowiedni dla wektora antybiotyk. Które ze stwierdzeń jest nieprawdziwe?
a) wśród powstałych klonów można było zaobserwować klony zawierające wektor pozbawiony insertu
b) wśród powstałych klonów można było zaobserwować klony zawierające rekombinowany wektor z wbudowanym jednym fragmentem
c) wśród powstałych klonów można było zaobserwować klony zawierające wektor z wbudowanymi kilkoma fragmentami
d) ligacji jednego fragmentu i cząsteczki wektora towarzyszy powstanie czterech wiązań fosfodiestrowych
e) ligacji jednego fragmentu i cząsteczki wektora towarzyszy powstanie dwóch wiązań fosfodiestrowych
5. Dla elektroforezy nie jest prawdą:
a) superzwinięte cząsteczki DNA wędrują szybciej niż liniowe
b) cząsteczki DNA obdarzone ładunkiem ujemnym wędrują do elektrody dodatniej c) mieszanina fragmentów Dna jest rozdzielana tym efektywniej im krótsze są fragmenty d)małe cząsteczki Dna wędrują najczęściej szybciej niż większe
e) cząsteczki o długości 302 i 303 pz mogą być rozdzielane
6. Klon może być użyty jako substrat do radioaktywnego znakowania fragmentu DNA przy wykorzystaniu fragmentu Klenowa polimerazy DNA I:
a) dATP znakowany P32 w pozycji γ
b) ATP znakowany w pozycji α
c) dGTP znakowany w pozycji α
d) [γ-P32] –ATP
e) [α-32]-dATP
7. Przy pomocy techniki primer extension można mapować 5’ koniec transkryptu. W tym celu można też posłużyć się techniką wykorzystującą nukleazę S1. Która z podanych informacji jest nieprawdziwa dla pierwszej z wymienionych technik?
a) denaturacja DNA i elektroforeza a tu czasem nie zachodzi denaturacja RNA?
b) hybrydyzacja
c) wariant tej techniki można wykorzystać do mapowania 3’końca
d) użycie rekombinowanego enzymu odwrotnej transkryptazy
8. Zakładając, że polimeraza TagI nie traci aktywności, a substraty PCR nie ulegają rozkładowi, można powiedzieć, że docelowa sekwencja DNA jest powielona po n cyklach:
a) n2 cyklach
b) 2n cyklach
c) n razy
d) n2n razy
e) 2^(n-2) razy
9. Który z podanych wektorów jest najmniej przydatny do sekwencjonowania genomu ssaczego?:
a) YAC (do 600 kb)
b) BAC (do 300 kb)
c) wektor będący pochodną faga λ (do 20 kb)
d) kosmid (do 40 kb)
e) wektor plazmidowy (około 8 kb)
10. Spośród podanych temperatur wybrać, która z największym powodzeniem da wydajne otrzymanie produktów PCR przeprowadzając dla startera 5’ GGTAATCGGTTAGGCTCC3’: a) 56°C
b) 72°C
c) 59°C
d) 55°C
e) żadna
11. Który z podanych czynników istotny dla jednej z metod pozwalających na otrzymanie cDNA jest głównym winowajcą odpowiedzialnym za brak cDNA informacji reprezentującej 5’ koniec transkryptu:
a) 5’AGCAATGG3’
3’TCGT5’
b) 5’AGCAATGG3’
3’ACC5’
c) 5’AGCAATGG3’
3’TCGTTACC5’
d)5’AGGAA3’
3’TCGTTACC5’
f) nie wiadomo
12. Wektor plazmidowy zawiera gen markerowy odpowiadający za odporność na erytromycynę (EryR) i gen markerowy odpowiedzialny za oporność na ampicylinę. Gen AmpR został przecięty enzymem restrykcyjnym a powstały w ten sposób plazmid połączono z fragmentem 1000pz o końcach komplementarnych do wektora. Które z poniższych fenotypów maja komórki transformowane :
a) niewrażliwe na ampicylinę & niewrażliwe na erytromycynę
b) niewrażliwe na ampicylinę & wrażliwe na erytromycynę
c) wrażliwe na ampicylinę & wrażliwe na erytromycynę
d) wrażliwe na ampicylinę & niewrażliwe na erytromycynę
e) nie wiadomo
13. Kolista cząsteczka Dna posiada n−miejsc restrykcyjnych EcoRI.ile fragmentów DNA powstanie po całkowitym jej strawieniu?
a) n-1
b) n
c) n+1
d) 2n-1
e) zależy od liczby powtórzeń
14.w analizie Southern fragment sekwencji genu z drożdży został użyty jako sonda do analizy fragmentów powstałych w wyniku trawienia EcoRI DNA genomowego z jalpa. Na
autoradiogramie zaobserwowano radioaktywne pasmo odpowiadające fragmentowi DNA o długości 4 kb. Oznacza to ze:
a) gen jalpa ma 4kb
b) gen japla jest taki jak gen drożdży
c) gen japla jest obecny w preparacie poddanym analizie
d) gen japla jest obecny w 4ch kopiach w genomie
e) gen japla ma taka sama sekwencje jak gen drożdży
15. Przedstawiony poniżej wektor może być używany zarówno w komórkach bakteryjnych jak i drożdżowych. Elementami, które są specyficzne dla komórek drożdżowych są:
a) ori
b) amp’
c) URA3
d) ARS
e) polilinker
16. Jaka może być maksymalna długość insertu, który można wklonować do kosmidu?
a) 8kb
b) 40kb
c) 150kb
17. Co jest wykorzystywane w technice RACE?
a) oligo(dT)
b) odwrotna transkryptaza
c) dNTP
d) fragment Klenowa polimerazy DNA I
e) sekwencja komplementarna do … (tu chyba o GSP chodzi)
18. Cechy charakterystyczne dla ligazy:
a) syntetyzuje DNA na matrycy RNA
b) potrzebuje ATP lub NAD+
c) z taką samą efektywnością łączy końce lepkie, jak i tępe
d) tworzy wiązanie pomiędzy grupa 5’-OH a 3’-fosforanową
e) żadna z powyższych
19. Jakie czynniki są użyteczne w technice Sangera?
a) dNTP
b) 2’3’- dideoksynukleotydy wszystkich 4 nukleotydów
c) 2’3’- dideoksynukleotyd jednego z 4 nukleotydów
d) trifosforany nukleozydów
20. Haploidalny szczep Neurospora jest transgeniczna pod względem genu lucyferazy. Nie występuje w szczepie dzikim. Został transgeniczny szczep skrzyżowany ze szczepem typu dzikiego a powstałe askospory poddano analizie PCR. Zakładając, że PCR przeprowadzono w sposób optymalny można przepuszczać, że udział askospor, dla których zidentyfikowano specyficzny produkt wynosi:
a) 0%
b) 25%
c) 50 %
d) 75%
e) 100 %
21. Mamy opisany eksperyment restrykcji jakiegoś faga. Najpierw 14ul DNA w probówce. Do tego dodajemy kolejno: 2ul buforu i 2 ul roztworu z enzymem. Skoro optymalne stężenie NaCl dla enzymu to 100mM to jakie było wyjściowe stężenie tej soli dodawanym buforze? Tutaj jest błąd w poleceniu według mnie, suma objętości powinna być 20 um, wtedy rozcienczenie buforu jest 10 razy wiec wyjsciowe bylo 1000.
a) 200mM
b) 1000mM
c) 50mM
d) 500mM
e) trudno powiedzieć bo za mało informacji
22. Który enzym restrykcyjny daje produkty najmniej wydajnie ulegające ligacji? Enzym restrykcyjny Cla I rozpoznaje sekwencje AT↓CGAT i trawi wiązanie fosfodiestrowe pomiędzy resztami T i C (zaznaczone strzałką). Enzym restrykcyjny Taq I rozpoznaje sekwencje T↓CGA-miejsce trawienie zaznaczono strzałką. Proszę wybrać twierdzenie/a, które jest/są poprawne: a) końce fragmentów DNA generowane przez enzymy są końcami komplementarnymi b) fragmenty powstałe po trawieniu enzymami są tylko w części komplementarne i wobec tego nie mogą być ligowane
c) Cla I i Taq I są izoschizomerami
d) dowolne fragmenty powstałe po trawieniu Cla I i Taq I mogą być ligowane i następnie trawione Cla I
e) dowolne fragmenty powstałe po ligowaniu produktów trawienia Cla I i Taq I mogą być trawione Taq I
23. Co jest nieprawdziwe dla faga lambda?
a) do wektora jego pochodnej można wklonować insert o długości 53kb
b) po jego replikacji w komórce gospodarza powoduje lizę komórki
c) pochodne faga lambda mogą służyć do klonowania cDNA i DNA genomowego
d) większość pochodnych faga lambda jest pozbawiona insertu odpowiedzialnego za lizę komórki gospodarza
e) pochodne faga lambda mają inserty, które umożliwiają mu wbudowywanie się do komórki 24. Rysunek wektora pGEM i wskazać cechy prawdziwe:
a) jest kosmidem
b) ma gen markerowy
c) może być użyty do otrzymywania ssDNA
d) może być użyty do badania aktywności promotorów eukariotycznych
25. Czym możemy znakować produkt otrzymany po PCR?
a) [α 32P]dATP
b) [γ 32P]ATP
c) dGTP znakowany w pozycji α
26. Ktore z podanych niżej związków mogą być wykorzystane do znakowania fragmentu DNA przy wykorzystaniu kinazy polinukleotydowej:
a) dATP, znakowany 32P w pozycji γ (gama)
b) ATP , znakowany w pozycji α (alfa)
c) dGTP , znakowany w pozycji α lub γ (alfa lub gama- obojętnie)
d) [γ(gama)-32P]-ATP
e) [α(alfa)-32P]-dATP
27. Przy pomocy nukleazy S1 można znakować koniec 5' transkryptu. Przy pomocy tego samego enzymu można zmapować tez 3' koniec po wprowadzeniu odpowiednich zmian do naszych działań. Które z poniższych czynności ma miejsce TYLKO podczas mapowania 3'
końca:
a) znakowanie DNA przy wykorzystaniu gama -32P -ATP
b) znakowanie DNA przy wykorzystaniu alfa -32P -dATP
c) denaturacja DNA i elektroforeza
d) reakcja przy udziale rekombinowanego enzymu używanego przez retrowirusy do syntezy DNA na bazie RNA
e) reakcja przy udziale polimerazy DNA I
28. Pewien student zamierzał otrzymać bibliotekę z mutacjami kasetowymi w obrębie centrum aktywnego enzymu XYZ. No i madrala zrobił jakoś tak:
gen XYZ dał do wektora pUC18, wstawił go tak, że nie zaburzał ramki odczytu LacZ'. Wyciął
kasetę, którą chciał zmienić, oddzielił przez elektroforezę od reszty wektora, wziął wektor bez kasety i fosfatazą usunął reszty fosforanowe z 5' końców - żeby nie doszło do samoligacji wektora, po czym dodał syntetyczne oligonukleotydy. Mniej więcej to brzmiało cos jak to chociaż oczywiście nic pewnego.
a) rekombinanty będą niebieskie
b) rekombinanty nie będą niebieskie
c) te co się same zligowaly (nierembionanty) nie będą niebieskie
d) te co się same zligowaly stanowią jedynie 1,2 % w porównaniu do eksperymentu kontrolnego gdzie nie było defosforylacji
e) w komórkach nie będzie aktywności enzymu XYZ
29. Cztery klony BAC fragmentow ludzkiego genomowego DNA (A, B, C, D) zbadano na obecnosc sekwencji STS (5 sekwencji oznaczonych 1-5). Ich obecnosc w poszczegolnych genach przedstawia tabelka poniżej, przy czym + oznacza obecnosc STS w danym klonie: STS
DNA 1 2
3 4 5
A + + +
B +
+
C + +
D + +
Powyższe wyniki wskazują na to iż klony te składają się na następującą sekwencje: a) A-B-C-D
b) D-C-B-A
c) A-B-D-E; klon C nie "pasuje" do pozostałych
d) D-A-C-B
e) D-A-B-C
30. Każdy rodzic ma dwa allele genu X. Może on mieć postać dziką - dominujaca(A) -
ZDROWA...albo zmutowaną - recesywną(a)- wywołuje anemię sierpowatą. W przypadku zmutowanej wersji gen nie jest przecinany przez enzym restrykcyjny np. EcoRI bo nie ma miejsca rozpoznawanego przez ten enzym i otrzymujemy jeden tylko fragment o dł. 1,3 kb. Jeśli tniemy gen dziki to otrzymujemy 2 fragmenty : 1,1kb i 0,2 kb. Znaczy gdzieś tam w środku ma jedno miejsce które jest rozpoznawane przez ten enzym restrykcyjny.
Pytanie: Jakie fragmenty będziemy widzieć u rodziców których PRZYSZLE DZIECKO MA 25%
PRAWDOPODOBIENSTWO NA ZACHOROWANIE NA TĄ CHOROBE (czyli dziecko musi być
homozygota recesywna 'aa'. żeby tak się stało to rodzice są heterozygotami A/a.) a) można zaobserwować obecność fragmentów 1.1 kb i 0.2 kb u obojga rodziców b) można zaobserwować obecność fragmentów 1.3 kb i 0.2 kb u obojga rodziców c) można zaobserwować obecność fragmentów 1.3kb u jednego z rodziców i 1,1kb oraz 0.2
kb u drugiego z rodziców
d) ...tez źle nie chce mi się pisać (cos w stylu C)
e) u obojga rodziców wszystkie trzy fragmenty :1,3kb .. 1,1kb... 0.2kb
31. Plazmid X ma gen markerowy AmpR czyli na ampicylinę oporność(said Yoda). Bierzemy jakiś inny plazmid co ma geny oporności na ampicylinę, chloramfenikol, erytromycynę, itp, itd.
Tniemy go i kolekcję otrzymanych fragmentów wklonowujemy w nasz plazmid X, ten przenosimy do komórek i szukamy rekombinantów które dostały gen oporności na chloramfenikol - jakich podłóż możemy użyć:
a) z ampicyliną
b) z chloramfenikolem i ampicyliną
b) z chloramfenikolem
d) erytromycyna i ampicylina
e) erytromycyna i chloramfenikol
32.Wyobraź sobie ze dysponujesz klonem (tzn. sekwencją) jakiegoś genu, który, możesz przypuszczać na podstawie analiz genetycznych, jest zlokalizowany w odległości nie większej niż 200kb od genu odpowiedzialnego za powstawanie jakieś choroby.
Spośród podanych poniżej czynności proszę wybrać TYLKO NIEKTORE składające się w odpowiedniej sekwencji na eksperyment (technikę) który pozwoli na odczytanie sekwencji w tym obszarze 200kb.
A) częściowe trawienie DNA enzymem BamHI w celu otrzymania zachodzących na siebie (względem sekwencji) fragmentów o dl ok. 20 kb
B) całkowite (wyczerpujące) trawienie DNA enzymem EcoRI
C) izolacja ludzkiego genomowego DNA
D) izolacja genomowego DNA z E.coli
E) Northern-blotting sondą otrzymana przy wykorzystaniu genu A
F) powtarzanie czynności opisanych w poprzednich dwóch etapach do momentu otrzymania odpowiedniej ilości klonów
G) otrzymanie biblioteki w fagu lambda
H) przeszukiwanie biblioteki przy pomocy sondy przygotowanej w oparciu o sekwencje genu A w etapie pierwszym, potem izolacja klonu hybrydowanego z sonda
I) subklonowanie fragmentu z końca nowoizolowanego klonu w celu otrzymania nowej sondy do ponownego przeszukiwania biblioteki i identyfikacji nowego klonu hybrydyzowanego z sondą.
Proszę wybrać, który z poniższych zapisów, następujących po sobie czynności składających się na scharakteryzowany powyżej eksperyment, jest prawidłowy :
a) A-B-C-D-E-G
b) C-A-G-H-I-F
c) C-H-I-F-A
d) A-C-G-H-I-F
e) żadna
33. W trakcie elektroforezy w żelu agarozowym, w nieobecności bromku etydyny: a) cząsteczki dsDNA porusza się w kierunku elektrody ujemnej
b) cząsteczki dsDNA są obdarzone lądunkiem dodatnim
c) liniowe cząsteczki dsDNA poruszają się tym szybciej im są krótsze
d) superzwinięte cząsteczki dsDNA poruszają się wolniej niż odpowiednie im zlinearyzowane e) fragmenty dsDNA o długości 1006bp i 1007bp mogą być rozdzielone w celu preparatywnym 34. Dwie próbki kompetentnych komórek E.coli poddano transformacji wektorem zawierającym gen AmpR (oporność na ampicylinę). I potem mamy dwie różne sytuacje:
1. dodano do nich niewielka ilość pożywki płynnej i po ok. 2 min umieszczono na pożywce zawierającej ampicylinę.
2. dodano ta sama ilości pożywki płynnej i po 30 min inkubacji umieszczono na pożywce z ampicylina.
Jakie zanotowano obserwacje:
a) szalka pierwsza 300 kolonii i szalka druga 300 kolonii
b) szalka pierwsza 300 kolonii i szalka druga 30 kolonii
c) szalka pierwsza 30 kolonii i szalka druga 400 kolonii
d) szalka pierwsza 0 kolonii i szalka druga 300 kolonii
e) szalka pierwsza 300 kolonii i szalka druga 0 kolonii
35. Fragmenty (ramiona - w sumie 30kb) WEKTORA ZASTĘPCZEGO poddawano ligacji z fragmentami DNA mającymi prawidłowe końce lepkie odpowiednie do ramion wektora. Jaki maksymalny rozmiar mógł mieć wszczepiany w ten wektor odcinek:
a) 8kb
b) 40kb
c) 100kb
d) 20kb
e) 22kb
36. Doświadczenie którego celem jest nokaut genu mysiego XYZ. Komórki macierzyste, do których wprowadzany jest gen rekombinowany:
a) zawierają 1 allel zmutowany i 1 typ dzikiego genu XYZ
b) zawierają oba allele typu dzikiego
c) poddawane są selekcji, której celem jest wybrać te w których zaszła rekombinacja niehomologiczna
d) są oporne na działanie neomycyny
e) zawierają gen Tk
37. Kolisty DNA poddano linearyzacji enzymem dającym końce lepkie. Następnie potraktowano go nukleaza S1 i po zahamowaniu aktywności tejże nukleazy użyto terminalnej transferazy przy obecności dNTP. Najprawdopodobniej końce powstałego fragmentu DNA beda mialy charakter taki jak te pokazane w punkcie :
a) 5’AGCAATGGC3’
3’CTAGTCGT5’
b) 5’AGCAATGG3’
3’ACC5’
c) 5’AGCAATGG3’
3’TCGTTACC5’
d) 5’ACTAGCAA3’
3’TCGTTACC5’
e) żadne z powyższych
38. Real time PCR:
a)pozwala na oznaczenie stężenia DNA w próbce
b)Jest tożsame z metodą wagową (qPCR)
c)stosuje się związek wiążący się niekowalencyjnie do dwuniciowego DNA
d)stosuje się sondę reporterową hybrydyzującą z produktem PCR
e)Real time PCR może służyć do oznaczenia stężenia RNA, jeśli na początku eksperymentu użyje się odwrotnej transkryptazy
39. Znamy sekwencję genu XYZ z Drosophila melanogaster. Służy on do skonstruowania sondy w celu zlokalizowania genu w bibliotece genomowego DNA człowieka. Jaka będzie temperatura hybrydyzacji sondy z docelowym DNA?
a) niższa
b) wyższa
c) taka sama
d) 98°C
e) żadna z podanych
40. Co potrzeba do złączenia wektora linearnego o tępych końcach z produktem reakcji PCR
prowadzonej za pomocą polimerazy Taq?
a) dATP
b) dTTP
c) polimeraza Taq
d) polimeraza Vent
e) transferaza terminalna
41.Rysunek z wektorem YAC, zupełnie identycznym jak na s. 111 (Fig. 7.8)
a) na podłożu minimalnym z TRP można wyselekcjonować sztuczny chromosom
b) po wklonowaniu insertu inaktywacja SUP4
c) stosowane drożdże to mutanty podwójnie auksotroficzne
d) od razu po trawieniu enzymami restrykcyjnymi można przystąpić do ligacji YAC z insertem 42. Indukowane wyciszenie genów wirusem (VACS):
a) degraduje mRNA (transkrypt)
b) wykorzystuje naturalne systemy obronne rośliny
c) wirus gemini do określania funkcji genów roślinnych
d) przez rearanżację i delecje
43. EMSA, jakie odczynniki potrzebne
a) ATP z 32P w pozycji y
b) dATP z 32P a
c) dGTP
d) [32 P a ATP]
44. Które z podanych poniżej związków jest odpowiednim substratem do radioaktywnego znakowania dsDNA o końcach tępych, który zostanie wykorzystany do eksperymentu footprintingu?
a) dATP, znakowany 32P w pozycji γ
b) ATP, znakowany w pozycji α
c) dGTP, znakowany w pozycji α
d) [γ-32P]-ATP
e) [α-32P]-dATP
45. Do czego można użyć techniki PCR?
a) bezpośredniego powielenia fragmentu RNA, jeżeli znamy sekwencje sąsiadujące z tym fragmentem
b) przygotowania sondy DNA do przeszukania biblioteki cDNA (str. 154)
c) bezpośredniej izolacji (powielenia) fragmentu genu prokariotycznego
d) przygotowania, która posłuży analizy polimorfizmu długości fragmentów restrykcyjnych (RFLP)
e) Przeprowadzenia wszystkich eksperymentów, wymienionych w punktach A), B), C) i D) 46. Pojedyncza mieszanina reakcyjna stosowana w thermal cycle sequencing musi zawierać: a) dNTP
b) trifosforany rybonukleozydów
c) 2’,3’-dideokswyanalogi czterech nukleotydów
d) 2’,3’-dideokswyanalog jednego z czterech nukleotydów
e) fragment Klenowa
47. Wektor ( ampR, ori, CAT):
a) jest kosmidem
b) można prowadzić transkrypcje in vitro za pomocą enzymów fagowych
c) ma gen markerowy ( amp R)
d) można pozyskiwać jego większe ilości hodujące w bakterii ( ori)
e) pozwala na badanie aktywności promotorów prokariotycznych w komórkach eukariotycznych.
48. Charakterystyka wektora pBluescript II KS ( +/-)
a) może być użyty do transkrypcji in vitro przy użyciu polimeraz fagowych
b) zawiera gen markerowy
c) jest fagemidem
d)może być używany do wklonowania inertów ssDNA
e) może być użyty do badania promotorów prokariotycznych w komórkach eukariotycznych 49. Załóżmy , ze w plazmidzie , który jest kolistą cząsteczką , na którą składa się 3200 pz występują sekwencja rozpoznawane prze EcoRI położone w odległości : 400, 700, 1400 i 2600
pz od arbitralne położonego punktu zerowego . Po całkowitym trawieniu wymienionym enzymem – powstaną produkty :
a) 400, 800, 1000 ( x2)
b) 400,1200,1600
c) 300,700,2200
d) 700,400,1400,2600
e) 300,700,1000,1200
50. Szczególnie użytecznymi cechami wektora używanego do klonowania są :
a) duża ilość kopi i występowanie w nim genu markerowego (nadającego cechę odporności na działanie antybiotyku)
b) wirulentność i lizygeniczność
c) zdolność do integracji w chromosomie komórki gospodarza w następnie indukcja cyklu litycznego
d) zdolność do autonomicznej replikacji i posiadanie sekwencji wielokrotnego klonowania e) posiadanie promotora T7 i genu markerowego ( pozwalającego na otrzymanie pojedynczej nici DNA wklonowanego fragmentu)
51. Wektor będący pochodną faga lambda poddano trawieniu enzymem EcoRI a następnie powstałe produkty rozdzielono elektroforetycznie. Otrzymane w ten sposób ramiona wektora poddano ligacji z fragmentami DNA o końcach EcoRI i długości ok. 20 kb. Po ligacji upakowno fagi in vitro i infekowano nimi bakterie. Analizie poddano DNA wszystkich powstałych łysinek i zidentyfikowano takie , które zawierały:
a) DNA wektory , które uległy replikacji
b) DNA rekombinowanego wektora zawierającego fragmenty DNA o długośći ok. 20 kb c)DNA rekombinowanego wektora zawierającego fragmenty o długości 40 kb
d) DNA całego genomu faga ʎ
e) nie zaobserwowano żadnych łysinek , gdyż fragmenty były za długie
52. W analizie Southern fragment sekwencji genu aktyny z drożdży został użyty jako sonda do analizy fragmentów powstałych w wyniku trawienia EcoRI DNA genomowego z D.stramonium.
NA auroradiogramie zaobserwowano jako jedno radioaktywne pasmo odpowiadające fragmentowi Dna o długości 4kb. Oznacza to że:
a) gen aktyny D. stramonium ma dł 4kb
b) gen aktyny D. stramonium jest takiej samej wielkości jak gen drożdży
c) gen aktyny D. stramonium jest najprawdopodobniej obecny w preparacie poddanym do analizy
d)gen aktyny D. stramonium jest obecny w 4 kopiach w genomie
e) gen aktyny D. stramonium posiada identyczna sekwencje jak gen drożdży
53. Spośród podanych poniżej proszę wybrać zawierające najwłaściwsze uzupełnienia dla następującego twierdzenia „dd NTP , używany do sekwencjonowania DNA metodą sangera charakteryzuje się tym, że nie posiada on … przy węglach …i…”
a) OH 2’3’
b) metyl 2’3’
c) karboksyl 5’3’
d) OH 2’5’
e) żaden z powyższych
54. Które z podanych poniżej enzymów będą dawały produkty, które można poddać, bez dodatkowych zabiegów, radioaktywnemu znakowaniu przy pomocy [a 32P] – dATP i fragmentu Klenowa? W nawiasach podano sekwencje, dla uproszczenia tylko jednej z nici, rozpoznawanej przez odpowiednie enzymy, gwiazdka oznacza położenie trawionego wiązania
fosfodiestrowego.
a) EcoRI (GA*ATTC)
b) PstI (CTGCA*G)
c) SmaI (CCC*GGG)
d) HpaII (C*CGG)
e) BglII ( A*GATCT)