Ćw. 7 Test zahamowania migracji makrofagów.
" Cel: wykrycie jednej z cytokin, zwanej czynnikiem hamującym migrację (MIF  Migration
Inhibitory Factor)
" Pobudzone antygenem (np. endotoksyną  LPS) monocyty i makrofagi wytwarzają cytokinę
MIF zatrzymującą te komórki w miejscu infekcji. Cytokina ta jest miernikiem odpowiedzi
komórkowej na dany antygen.
" Badanie wykonuje się w rurkach kapilarnych, w których obecne są leukocyty izolowane z krwi
lub wysięku otrzewnowego.
" Jeśli brak jest antygenu, to komórki ruchliwe (makrofagi i monocyty) wędrują z kapilary do
otaczającego środowiska.
" Dodanie do płynu hodowlanego swoistego antygenu skutkuje wydzielaniem przez uczulone
limfocyty T cytokiny MIF, a co za tym idzie zahamowanie migracji makrofagów.
Mierząc strefy zajęte przez wędrujące komórki w próbie badanej i kontrolnej, można określid stopieo
zahamowania ich migracji (MII  Migration Inhibitory Index) korzystając ze wzoru:
% zahamowania migracji makrofagów:
średni obszar migracji w obecności antygenu
średni obszar migracji bez antygenu
Wykonanie:
1. Komory do testu przemyd alkoholem i wytrzed jałową gazą.
2. Z jednej strony nakleid (smar silikonowy) szkiełko nakrywkowe.
3. Nakłud palec jałową igłą.
4. Wprowadzid krew do dwóch kapilar na wysokośd około 1cm.
5. Pusty koniec kapilary zatopid w płomieniu palnika i odwirowad przez 7 min przy 500xg w
wirówce hematokrytowej.
6. Po odwirowaniu uciąd kapilarę na granicy płynu i osadu komórek.
7. Odcięte kapilary przykleid częścią zatopioną do dna komory smarem silikonowym.
8. Jedno oczko komory wypełnid płynem Eagle a bez antygenu (kontrola), drugie - płynem
Eagle a z dodatkiem antygenu (próba badana).
9. Oczka komory zakleid szkiełkami nakrywkowymi, a otwory boczne zakleid parafiną.
10. Płytki umieścid w wilgotnej komorze i inkubowad przez 24h w 37o C.